16基因工程和蛋白質(zhì)工程(參考版)
2025-01-16 23:56本頁面
【正文】 表達(dá)具有 TGT順序的質(zhì)粒，即可以產(chǎn)生在同一部位上半胱氨酸代替絲氨酸的蛋白質(zhì)。然后由 DNA聚合酶延伸引物，由 DNA連接酶將雙鏈再連接成環(huán)，轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞復(fù)制，即產(chǎn)生兩種子代質(zhì)粒。 于是用人工合成一段寡聚核苷酸引物，引物里含有 TGT外，其余均與基因部分互補(bǔ)。 Southern和 Western印跡法 DNA frangment Electrophoresis Transfer of DNA by blotting 32Plabled DNA probe Autoradiography Agarrose gel Autoradiogram Nitrocellulose sheet Autoradiogram Polymer sheet SDSPolyacrylamide gel Transfer protein Add radiolabled spesfic antibody , Wash to remove unboud antibody Protein band detected by specific antibody Autoradiography ——外源 DNA在受體細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄和翻譯 帶有目的基因的載體轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞成功并篩選出來后，最終目的是要目的基因在受體細(xì)胞中得以表達(dá)，產(chǎn)生具有功能性的蛋白質(zhì)或肽 。這樣可檢出重組體質(zhì)粒 DNA。 （ 3） R環(huán)檢測法 在有利于形成 R環(huán)的條件下，使待檢測的純化的質(zhì)粒 DNA，在含有 mRNA的緩沖液中局部變性。 ?噬菌體感染大腸桿菌的途徑 +要插入的外來 DNA質(zhì)粒載體連接重組 DNA 分子經(jīng)轉(zhuǎn)化或病毒感染導(dǎo)入宿主細(xì)胞對(duì)含有重組 DNA分子的選擇無性繁殖（克隆）重組 DNA 分子合成和克隆過程宿主染色體 ——從大量受體細(xì)胞選出帶有重組體 的細(xì)胞 （ 1）插入失活法 （ 2）放射性探針檢測法 （ 3） R環(huán)檢測法 （ 4）免疫測定法 （ 1）插入失活法 在現(xiàn)在的基因工程操作中，所使用的載體通常是經(jīng)過加工改造的衍生物，它們要么帶有一個(gè)或幾個(gè)可供選擇的遺傳標(biāo)記，要么具有被選擇的遺傳功能，這就使帶有目的基因與不帶目的基因的細(xì)菌有明顯區(qū)別，便于篩選。因噬菌體具有自動(dòng)侵入的功能。即增加細(xì)胞膜的通透性才能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。 我們常常采用 ?噬菌體作為基因工程的載體，其一它的遺傳結(jié)構(gòu)與功能知道得比較清楚；其二是易于使細(xì)胞感染，易于使外源 DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞。但都是經(jīng)過了人工改造，更適宜運(yùn)用于DNA重組技術(shù)。除質(zhì)粒外，噬菌體、病毒也能通過 “感染 ”將外源基因帶入細(xì)菌并進(jìn)行復(fù)制 。轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒 DNA仍能進(jìn)行復(fù)制，這種性能為 DNA重組技術(shù)
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