【正文】 瓊脂品質(zhì)之檢驗(yàn)方法參照褐藻膠之品質(zhì)檢驗(yàn)方法執(zhí)行。 （凝固溫度） 瓊脂可固化之溫度成為凝固點(diǎn)，通常濃度為1～%，凝固點(diǎn)為28～38℃，一般在30℃左右即可。成品瓊脂鏡貯存后，因分子結(jié)構(gòu)之變異而起老化現(xiàn)象，使膠強(qiáng)度降低。 ～，如不在此范圍內(nèi)，則可能為藥品之添加不當(dāng)所致。 普通含有１－２％或１％以下，在提取過(guò)程中如添加無(wú)機(jī)物藥品，將回使成品之灰分增加，至于瓊脂之碳水化合物（尤其是Agaropectin）結(jié)合之硫酸根或微量金屬成分也成為灰分。[產(chǎn)品檢驗(yàn)] 以Agarose及Agaropectin組成，并以前者為主，其他熱水可溶性之多糖氨基酸，著色物質(zhì)，無(wú)機(jī)鹽等均為瓊脂之不純成分。本實(shí)驗(yàn)采用熱風(fēng)干燥。凍結(jié)后之瓊脂，可用沖水的方式將所含之水分溶解之。本實(shí)驗(yàn)采用凍結(jié)融解法。 、切膠 將瓊脂膠液住入不銹鋼或瓷盤(pán)中放冷，凝固后切成條狀，冷卻溫度應(yīng)在25度以下，否則將延長(zhǎng)冷卻時(shí)間。 水煮提取后，瓊脂即由原澡擴(kuò)散于溶液中，先進(jìn)行粗濾，再進(jìn)行細(xì)濾。水煮提膠進(jìn)行兩次。進(jìn)行水煮提膠。以上漂白操作，可用下列反應(yīng)式表示：CaOCl2（漂白粉） 2CaOCl2+H2+H2CO3→2HClO+CaCO3+CaCl2HClO→HCl+O↑CaCO3+2HCl→CaCl 2+ H2CO3CaOCl2+ HCl→HClO+CaCl2CaOCl2+ 2HCl→CaCl2+ Cl2+H2OCl2+H2O→2HCl+O↑NaClO（次亞氯酸） 3NaClO+H2+H2CO3→NaCl+2HClO+2NaCO3HClO→HCL+O↑Na2CO3+2HCl→2NaCl+CO2+H2ONaOCl+HCl→HClO+NaClNaOCl+2HCl→NaCl+H2O+Cl2Cl2+H2O→2HCl+O↑ 漂白后紫菜中仍留有漂白劑，要充分洗滌，否則到下一步水煮提膠時(shí)，會(huì)在高溫下使瓊脂氧化斷鍵，成為糊狀膠液。漂白操作：將已洗滌的堿處理紫菜，~%漂白粉溶液中（漂白粉含有有效氯約60%），~%硫酸溶液中15~30分鐘，漂白操作結(jié)束。漂白溶液要保持中性，當(dāng)pH4時(shí)，瓊脂易斷鍵，如果pH8時(shí)，瓊脂顏色變深。漂白操作時(shí)，應(yīng)先將漂白液配成一定濃度后，然后加入要漂白的葉片，不可將濃的漂白粉溶液加入，防止局部濃度過(guò)高，瓊脂分子斷鍵，降低產(chǎn)品的質(zhì)量。水浸后將紫菜濾出，然后進(jìn)行漂白。水洗后進(jìn)行水浸，葉片一經(jīng)浸泡膨脹，有利于后工序漂白，也縮短水煮提膠時(shí)間。 、水浸 葉片應(yīng)在低溫下水洗，防止在高溫條件下瓊脂成分流失。堿煮時(shí)間約1小時(shí)左右，堿煮以后，葉片為褐綠色有光澤，紫菜葉片中的色素溶解于堿液中，此時(shí)堿液為深綠色。紫菜在常溫下浸泡1天，浸泡過(guò)程中要經(jīng)常攪拌，使制裁中色素不斷浸出，紫菜不斷溶脹，以減少后工序水煮提膠的時(shí)間。[工藝流程] 紫菜—→堿處理—→水洗—→漂白—→水洗—→提取—→過(guò)濾—→凝固—→截切—→凍結(jié)—→融解—→脫水—→干燥—→瓊脂[操作方法] 將紫菜所附著之土砂、貝殼、鹽分、雜藻等除去。 R R’+Ca2Cl+H2O R Ca2++R’OH 經(jīng)過(guò)堿處理后的末水紫菜，其藻體中以人工形成了 R Ca 亦即可使其變成能提取的瓊脂形態(tài). 末水紫菜表面有一層含有纖維質(zhì)的表皮細(xì)胞，在加熱提取瓊脂時(shí)，須在煮水中加酸或?qū)A處理的紫菜予以酸處理，以破壞表皮細(xì)胞，而有利于瓊脂成分之提取。反之不能、與金屬離子成鹽，而只能成酯狀結(jié)構(gòu)者如 只能充做糊料而不能成為瓊脂。究其原因是原藻粘質(zhì)物中含硫酸酯的數(shù)量不同所致。起不同之處，主要是原料前處理。本實(shí)驗(yàn)是以末水紫菜為原料制備瓊脂。109~30109，不溶于冷水而溶于熱水，1%濃度的瓊脂溶液其凝固點(diǎn)30~40℃，其熔點(diǎn)為８０℃，瓊脂溶液冷卻后即成凝膠。3． 計(jì)算產(chǎn)品的出成率和原輔材料的成本核算。 W1W2水不溶物（%）= 100 W[思考題] 提膠前的原料為什么要經(jīng)過(guò)甲醛、酸或堿處理？其作用是什么？ 進(jìn)行消化時(shí)，為什么選用Na2CO3 作消化劑而不選用NaOH作消化劑？ 進(jìn)行鈣化操作時(shí)，膠液的pH在何范圍內(nèi)最為適合？為什么？實(shí)驗(yàn)十二 瓊脂的制備[目的和要求]1． 學(xué)習(xí)和掌握以末水紫菜為原料，制備瓊脂的基本原理。 W1W2灰分（%）= 100 W式中：W1——坩堝加殘留物重（克） W——坩堝重量（克） W——試樣重（克） 精確稱取試樣0。 精確稱取褐藻膠試樣1克，于燒至恒重已知重量的瓷坩堝中，先于電爐上炭化，再移入茂福爐中，升溫至550600℃灼燒4小時(shí)。測(cè)定方法：根據(jù)旋轉(zhuǎn)式粘度計(jì)所附的粘度測(cè)定限值表，選擇相應(yīng)轉(zhuǎn)子和轉(zhuǎn)速，視待測(cè)溶液無(wú)氣泡時(shí)，將盛有溶液的燒杯移杯于粘度計(jì)下，使轉(zhuǎn)子浸入液體中，深度恰到刻度標(biāo)記，于液溫20℃下啟動(dòng)轉(zhuǎn)子，待刻度盤(pán)指針保持穩(wěn)定后，即可讀出讀數(shù)，取三次讀數(shù)的平均值。再將稱量瓶防入烘箱中繼續(xù)干燥1小時(shí)，取出冷卻稱量。取褐藻膠樣品 2~5克于稱量瓶中準(zhǔn)確稱量。放冷后，進(jìn)行檢驗(yàn)。實(shí)踐證明，烘干溫度在60℃以下，時(shí)間在20分鐘之內(nèi)，可以獲得色澤好、粘度高的產(chǎn)品。 固相轉(zhuǎn)化的褐藻膠中尚含有70%左右的水分，必須將其烘干，使水分含量在15%以下，以利于產(chǎn)品的長(zhǎng)期保藏。194。193。轉(zhuǎn)化后的膠樣，用廣范pH試紙檢驗(yàn)，呈色均一，不應(yīng)夾雜紅、橙紅或藍(lán)色。其操作方法是：先把經(jīng)過(guò)壓榨脫水的褐藻酸粉碎，然后加入褐藻酸重量8%的碳酸鈉粉末（100目以上的無(wú)水碳酸鈉）充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅胖?小時(shí)，讓其繼續(xù)轉(zhuǎn)化。是影響產(chǎn)品粘度穩(wěn)定性的重要環(huán)節(jié)。 經(jīng)脫鈣后的褐藻酸凝膠含有90%的水分，固相轉(zhuǎn)化之前，必須進(jìn)行脫水，使凝膠中的含水量不超過(guò)70%，脫鈣后的凝膠經(jīng)過(guò)壓榨即可達(dá)到目的。其操作方法是經(jīng)過(guò)壓榨脫水后的褐藻酸鈣，放入大燒杯中，加入褐藻酸鈣重量的1。此時(shí)褐藻酸鈉轉(zhuǎn)變成纖維長(zhǎng)而又堅(jiān)韌的褐藻酸鈣。其方法是：把精濾的膠液注入容器中，邊攪拌邊加入相當(dāng)于膠液重量0。同時(shí)，大量可溶性無(wú)機(jī)鹽及色素等雜質(zhì)也隨水排除，使褐藻酸進(jìn)一步純化，所以，鈣化是褐藻膠生產(chǎn)中的一個(gè)重要的精制和濃縮過(guò)程。 經(jīng)過(guò)上述處理的膠液仍是不純的褐藻酸鈉溶液，%左右，大部分是水分。其方法是膠液先經(jīng)過(guò)100目篩網(wǎng)過(guò)濾，再經(jīng)過(guò)300目網(wǎng)篩過(guò)濾即可。加水量一般控制在海帶重量的100~500倍，稀釋后的膠液粘度在100~110秒（恩氏粘度計(jì)測(cè)試值） 粗濾：經(jīng)稀釋后的膠液，先經(jīng)過(guò)20目的網(wǎng)篩過(guò)濾，除去膠液中較大的雜質(zhì)。 稀釋：消化液一般為海帶的20~40倍。這些殘?jiān)蛎?，給過(guò)濾帶來(lái)很大困難。用 Na2CO3做消化劑，其濃度為1%，溫度為65℃消化時(shí)間為4小時(shí)。同時(shí)，碳酸鈉溶液將不溶性褐藻酸鹽復(fù)分解為可溶性的鈉鹽而被提取出來(lái)。 褐藻酸是褐藻藻體細(xì)胞壁內(nèi)所特有的多糖成分，它主要是以褐藻酸鈣的形式以及部分鎂、鐵、鋁等金屬鹽形式存在。2% 硫酸溶液浸泡1小時(shí)。5%的甲醛溶液浸泡4小時(shí)。經(jīng)浸泡吸水后的海帶，切碎成10公分的條塊，用清水充分反復(fù)洗滌，直至附著在藻體表面的粘液洗凈為止。[工藝流程] 海帶—→水浸泡—→前處理—→消化—→稀釋—→過(guò)濾—→漂浮—→過(guò)濾—→鈣化—→脫鈣—→壓榨—→粉碎—→固相轉(zhuǎn)化—→烘干—→粉碎—→成品褐藻膠[操作方法] 海帶中除含有大量的褐藻酸外，還含有一定數(shù)量的碘、甘露醇、氯化鉀，褐藻酸膠，褐藻淀粉，色素以及泥沙等附著物。H+NH4OH→AlgH+Na2CO3→(Alg)H+CaCl2 褐藻酸與固相堿充分混合后，能轉(zhuǎn)化成水溶性的褐藻酸鈉或褐藻酸銨，統(tǒng)稱為褐藻膠。 褐藻酸鈣在鹽酸的作用下，轉(zhuǎn)化成不溶性的褐藻酸凝膠。H+NaCl Alg其過(guò)程如下：海藻經(jīng)過(guò)加熱、加堿，使藻體中不溶性的褐藻酸鈣轉(zhuǎn)化為水可溶性的褐藻酸鈉： M（Alg）n+Na2CO3 → Alg、Na+MCO3 M為Ca2+ 、Fe3+ 、Al3+ 、Ba2+等金屬離子 Alg為褐藻酸 于消化液中加無(wú)機(jī)酸或CaCl2溶液，使褐藻酸鈉轉(zhuǎn)化為水不溶性的褐藻酸或褐藻酸鈣： Alg[思考題] ？ ，再用2N氫氧化氨溶液洗脫？該洗脫順序能否顛倒？原因何在？ ，分析該實(shí)驗(yàn)條件下氨基酸從分離柱洗脫下來(lái)的順序。（2）當(dāng)精氨酸洗脫達(dá)高峰時(shí)，由于精氨酸濃度過(guò)大，坂口反應(yīng)和茚三酮反應(yīng)的顏色被掩蓋而顯陰性。計(jì)算公式：精氨酸鹽酸鹽的比旋光度按下式計(jì)算： 100α[α] 25。重復(fù)測(cè)定三次，取其平均值。校正零點(diǎn)：打開(kāi)旋光儀電源，預(yù)熱5分鐘，取1分米旋光管，緩緩注入1MHCl溶液至液面的中心高出管口平面，蓋緊，拭干，置于圓筒形半管內(nèi)，校正零點(diǎn)。 ①鑒別 本品50mg于試管中，加水1ml溶解，加10％NaOH ，次氯酸鈉試劑 5ml，a－荼酚數(shù)滴，溶液應(yīng)呈紅色。~+176。得層析純L精氨酸鹽酸鹽。流速每分鐘5ml ，流出液的pH由高至低，再由低至高，用坂口試劑檢查是否有精氨酸出現(xiàn)，再用坂口試劑檢查確認(rèn)和經(jīng)層析為一點(diǎn)純時(shí)，換用2N氫氧化氨洗脫，直至無(wú)精氨酸反應(yīng)為止，洗脫結(jié)束。共上2780ml液體。 ⑴水解、脫酸、脫色 稱取干雞毛500克，放在三頸燒瓶中，加1500ml 6N工業(yè)鹽酸，加熱至110℃并維持10小時(shí)，而后改裝成減壓蒸餾，水泵減壓，蒸餾至殘留物粘稠狀，加入預(yù)熱之蒸餾水1000ml，溶解后再重復(fù)減壓蒸餾至粘稠狀，再加1000ml熱水溶解和減壓蒸餾，如此經(jīng)過(guò)3~4次趕酸后，用1000ml水溶解，抽濾，用2000ml水洗濾渣，水相加水至4000ml，用150克活性炭在80~90℃加熱攪拌1小時(shí)，脫色過(guò)濾，活性炭用熱水洗2次，得金黃色透明液體，加水至總體積為5000ml供下步上柱用。 ⑶中毒樹(shù)脂的復(fù)活 樹(shù)脂使用多次后，交換容量下降，上柱量減少，分離效果也差，這時(shí)樹(shù)脂已中毒，用上述樹(shù)脂再生法已不見(jiàn)效，必須去毒復(fù)活樹(shù)脂。使用過(guò)的樹(shù)脂，倒入三角燒瓶中，用自來(lái)水沖洗清，同時(shí)漂洗去少量破碎樹(shù)脂。用工業(yè)燒堿配的2N NaOH溶液浸一夜，用自來(lái)水洗至中性，再用2N工業(yè)鹽浸一夜，用蒸餾水洗至中性裝柱待用。 ⑴新樹(shù)脂的處理 新樹(shù)脂用20％或飽和食鹽水浸泡24小時(shí)，用自來(lái)水清洗至清洗水澄清，再按下法處理。上述溶液中加入五粒氫氧化鉀。2扳口試劑：％ d一荼酚乙醇液中。 儀器：25型酸度計(jì)，25毫升分部自動(dòng)收集儀，陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱體（柱高100 cm ，三頸燒瓶（3000ml），自動(dòng)溫控器一套，真空吸濾裝置一套，水力噴射泵一支，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器一臺(tái)，電熱碗一只（3000ml）。這樣，各種不同的氨基酸就在通過(guò)交換柱的緩沖溶液所造成的不同pH環(huán)境中，產(chǎn)生了不同的移動(dòng)速度，由此可以達(dá)到各種氨基酸系統(tǒng)分離的目的。若將氨基酸陽(yáng)離子（精氨酸）引入交換柱，則氨基酸與樹(shù)脂上的鈉離子交換，因而受阻或被吸附，其受阻或被吸附的程度取決于各種氨基酸的pH值。然后用不同pH的洗脫液，可把各種氨基酸分別洗脫下來(lái)。例如，在酸性溶液中，精氨酸解離成陽(yáng)離子。[原 理] 本實(shí)驗(yàn)采用離子交換法分離精氨酸。 熟悉和掌握分離提純精氨酸的基本操作。 檢查