細胞凋亡和細胞壞死(參考版)
2025-05-15 22:07本頁面
【正文】 FCM分析細胞凋亡的方法 ? 一 . 細胞形態(tài)分析 ? 二 . 細胞膜結構與功能改變分析 ? 三 . 細胞 DNA含量分析 ? 四 . TUNEL法 。 三 . 凋亡酶學分析 ? 1. 內切核酸酶 (endonuclease, DNase) ? 種類： DNase Ⅰ （內質網、高爾基體 ), DNase Ⅱ （溶酶體、胞核 )， NUC18（胞核，胸腺細胞中 ) 等 ? 作用： 使 DNA斷裂成 180－ 200bp或其倍數的片斷 ? 激活機制： CAD(caspaseactivate DNase) ? ICAD(inhibtor of CAD) ? 檢測： Western Blotting ? Caspases的檢測 ? 1. Caspase3活性測定 (FIENA法 ) ? 熒光測定免疫吸附法 (flurometric immunosorbent enzyme assay, FIENA), caspase3可作用于連接熒光素的特異底物－乙?；於彼?谷氨酸 頡氨酸 天冬氨酰胺 (AcDEVD), 產生發(fā)熒光的裂解產物 AFC，且caspase3活性與 AcDEVDAFC分解的量或自由熒光 AFC產生熒光的強弱成正比，故可定量檢測 ? 2. 蛋白印跡法 ? Caspases作用底物的檢測 ? PARP89kD的檢測 四 . 凋亡相關蛋白分析 ? 1. Bcl2家族 ? 促進凋亡： Bax, Bal, BclXs, Bad, Bid, Bik, Bim, Hrk, Bok等 ? 抑制凋亡： Bcl2, BclXl, Bclw, Mcl1, A1/Bfl1等 ? 均含有 BH(Bcl2 homology)結構域，通過此結構域以二聚體形式調控凋亡。 ? 原理：在 TdT的作用下，帶有標記物的 dUTP被連接在斷裂 DNA3’末端，然后通過相應的方法檢測標記物，從而判斷是否有凋亡發(fā)生。 細胞凋亡的形態(tài)學檢測方法 檢測方法 可鑒定凋亡細胞特征 光學顯微鏡 相差顯微鏡 透射電鏡 聚焦激光掃 描電鏡 掃描電鏡 流式細胞儀 縮時攝影術 細胞體積縮小、核濃縮、細胞周圍透明圈 細胞發(fā)泡、凋亡小體 微絨毛消失、染色質沿核膜分布、新月體狀核、凋亡小體 凋亡細胞內固縮染色質及核碎片定位 細胞膜表面泡狀鼓起 低前向
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