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細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死(參考版)

2025-05-15 22:07本頁面
  

【正文】 FCM分析細(xì)胞凋亡的方法 ? 一 . 細(xì)胞形態(tài)分析 ? 二 . 細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能改變分析 ? 三 . 細(xì)胞 DNA含量分析 ? 四 . TUNEL法 。 三 . 凋亡酶學(xué)分析 ? 1. 內(nèi)切核酸酶 (endonuclease, DNase) ? 種類: DNase Ⅰ (內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體 ), DNase Ⅱ (溶酶體、胞核 ), NUC18(胞核,胸腺細(xì)胞中 ) 等 ? 作用: 使 DNA斷裂成 180- 200bp或其倍數(shù)的片斷 ? 激活機(jī)制: CAD(caspaseactivate DNase) ? ICAD(inhibtor of CAD) ? 檢測: Western Blotting ? Caspases的檢測 ? 1. Caspase3活性測定 (FIENA法 ) ? 熒光測定免疫吸附法 (flurometric immunosorbent enzyme assay, FIENA), caspase3可作用于連接熒光素的特異底物-乙?;於彼?谷氨酸 頡氨酸 天冬氨酰胺 (AcDEVD), 產(chǎn)生發(fā)熒光的裂解產(chǎn)物 AFC,且caspase3活性與 AcDEVDAFC分解的量或自由熒光 AFC產(chǎn)生熒光的強(qiáng)弱成正比,故可定量檢測 ? 2. 蛋白印跡法 ? Caspases作用底物的檢測 ? PARP89kD的檢測 四 . 凋亡相關(guān)蛋白分析 ? 1. Bcl2家族 ? 促進(jìn)凋亡: Bax, Bal, BclXs, Bad, Bid, Bik, Bim, Hrk, Bok等 ? 抑制凋亡: Bcl2, BclXl, Bclw, Mcl1, A1/Bfl1等 ? 均含有 BH(Bcl2 homology)結(jié)構(gòu)域,通過此結(jié)構(gòu)域以二聚體形式調(diào)控凋亡。 ? 原理:在 TdT的作用下,帶有標(biāo)記物的 dUTP被連接在斷裂 DNA3’末端,然后通過相應(yīng)的方法檢測標(biāo)記物,從而判斷是否有凋亡發(fā)生。 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測方法 檢測方法 可鑒定凋亡細(xì)胞特征 光學(xué)顯微鏡 相差顯微鏡 透射電鏡 聚焦激光掃 描電鏡 掃描電鏡 流式細(xì)胞儀 縮時(shí)攝影術(shù) 細(xì)胞體積縮小、核濃縮、細(xì)胞周圍透明圈 細(xì)胞發(fā)泡、凋亡小體 微絨毛消失、染色質(zhì)沿核膜分布、新月體狀核、凋亡小體 凋亡細(xì)胞內(nèi)固縮染色質(zhì)及核碎片定位 細(xì)胞膜表面泡狀鼓起 低前向
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