【正文】 natural killer cells) can kill tumour cells using the granule exocytosis pathway or the deathreceptor pathway. ?Cancer treatment by chemotherapy and irradiation kills target cells primarily by inducing apoptosis. Therefore, modulation of the key elements of apoptosis signalling directly influences therapyinduced tumourcell death. Summary101102。l　 細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究 包括細(xì)胞間信號傳遞、受體與信號跨膜傳導(dǎo)、細(xì)胞內(nèi)信號傳遞途徑l　 細(xì)胞結(jié)構(gòu)體系的組裝細(xì)胞結(jié)構(gòu)體系的組裝 生物大分子如何逐級裝配并最終形成生物賴以進(jìn)行生命活動的細(xì)胞結(jié)構(gòu)體系的問題 99l 美國科學(xué)情報(bào)研究所（ ISI） 1997年以來 SCI（Science Citation Index）收錄及引用論文檢索，全世界自然科學(xué)研究中論文發(fā)表最集中的幾個領(lǐng)域分別是：l ?細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo) （ signal transduction）；l ?細(xì)胞凋亡 （ cell apoptosis）；l ?基因組與后基因組學(xué)研究 （ genome and postgenomic analysis）。9596對細(xì)胞生命活動的研究成為當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展的瓶頸對細(xì)胞生命活動的研究成為當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展的瓶頸細(xì)胞生命活動細(xì)胞生命活動突變體分析突變體分析 突變體分析突變體分析 蛋白修飾分析蛋白修飾分析基因表達(dá)基因表達(dá) 多肽定性分析多肽定性分析生物信息學(xué)生物信息學(xué)序列測定序列測定雙向電泳分析雙向電泳分析DNA分離與克隆分離與克隆 機(jī)器人技術(shù)機(jī)器人技術(shù) (robotics) 功能基因組學(xué)功能基因組學(xué)蛋白質(zhì)分離與制備蛋白質(zhì)分離與制備 蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)9798重點(diǎn)研究領(lǐng)域：重點(diǎn)研究領(lǐng)域：l　　 染色體染色體 DNA與蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系與蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系 　　　 — 主要是非組蛋白對基因組的作用l　 細(xì)胞增殖、分化、凋亡的相互關(guān)系及其調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡的相互關(guān)系及其調(diào)控 　　　 　 細(xì)胞增殖、分化、凋亡與衰老是細(xì)胞最重要的生命活動現(xiàn)象，它們既相互聯(lián)系又相互制約并受到一系列基因的調(diào)控。94l 2022年 《 美國科學(xué)院院報(bào) 》 （ PNAS）的一篇文章中，通過數(shù)學(xué)方法，對科學(xué)雜志的引用關(guān)系進(jìn)行了分析，對當(dāng)前的 88個研究領(lǐng)域進(jìn)行了排序?！　　o論是對細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的深入研究，還是對細(xì)　　　無論是對細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的深入研究，還是對細(xì)胞重大生命活動規(guī)律的探索，都需要用分子生物學(xué)的胞重大生命活動規(guī)律的探索，都需要用分子生物學(xué)的新概念與新方法，在分子水平上進(jìn)行研究，換句話說新概念與新方法，在分子水平上進(jìn)行研究，換句話說， 細(xì)胞分子生物學(xué)細(xì)胞分子生物學(xué) 或或 分子細(xì)胞生物學(xué)分子細(xì)胞生物學(xué) 將是今后相當(dāng)一將是今后相當(dāng)一段時間的主流。相互滲透與交融是總的發(fā)展趨勢。法雖可進(jìn)行群體定量 ,但工作量大 ,同時易出現(xiàn)壞死細(xì)胞的假陽性。目前 ,流式細(xì)胞儀常用作群體細(xì)胞凋亡的定量分析 ,但在檢測中的漏檢率和錯檢率都很高。個方面 ,一是群體細(xì)胞凋亡的定量 ,二是細(xì)胞凋亡程度的定量。生理性還是病理性，需進(jìn)行致病因素的相關(guān)性分析 .p 細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題90p 細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題l （ 3）細(xì)胞凋亡的定量分析：89l （ 2）細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果分析 :TUNEL梯帶狀圖像并不必然與細(xì)胞凋亡相關(guān) 。形態(tài)學(xué)檢查是其他各種檢測方法的基礎(chǔ) ,任何方法的檢查結(jié)果必須結(jié)合形態(tài)學(xué)檢查來判斷。家族蛋白等 .l :88p 細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題l （ 1）細(xì)胞凋亡的判斷標(biāo)準(zhǔn) :目前 ,檢測細(xì)胞凋亡的許多方法的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)不一。l mRNA水平的檢測：l 蛋白印跡法 :檢測細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白分析 :如caspase87l 細(xì)胞色素 C的定位檢測： 通過 Western雜交用細(xì)胞色素 C抗體和 COX4抗體標(biāo)示細(xì)胞色素 C和COX4的存在位置，從而判斷凋亡的發(fā)生。DetectionCLONTECH公司的 ApoAlertTM將 AnnexinV進(jìn)行熒光素（ FITC、 RPE）或 biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的 AnnexinV作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡以及共聚焦激光掃描顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。PS） 正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，在凋亡早期， PS可 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面 ，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。cytometry， FCM)8586l :l PS（磷脂酰絲氨酸）在細(xì)胞外膜上的檢測 : 亞 “ G1” 峰檢測法 :處于增殖周期中的細(xì)胞，根據(jù)其所處不同周期時相 (G0／ Gl、 S、 G2／ M)，其 DNA含量分布在 2n—4n 之間。cytometry， FCM)8483 此外 ,將 PCR熒光定量 PCR被用來檢測 Bcl2和 caspase表達(dá)；l 梯形條帶不明顯時 ,用PCR被用來擴(kuò)增凋亡細(xì)胞產(chǎn)生的 DNA是檢測凋亡特異性基因的常用方法。測定方法主要有 流式細(xì)胞儀 檢測法、 蛋白印跡法 及 免疫組織化學(xué)染色法 等。、 Bcl2蛋白、 cmycl 夾心法可以測定核小體單體和寡聚核小體，因而可以用于許多不同的培養(yǎng)細(xì)胞株或動物組織細(xì)胞的凋亡檢測 。78l (ELISA法 )l 利用 “夾心酶標(biāo)免疫測定法 ”的原理 ,核小體DNA由于與組蛋白 H2A、 H2B、 H3和 H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶裂解， 用抗組蛋白（或抗 DNA） 過氧化物酶（或生物素化的抗體） 結(jié)合到核小體，通過酶標(biāo)儀分析 ,可定量反映細(xì)胞凋亡水平。l ④ 若樣品處理不當(dāng) ,易形成假陽性 ,影響結(jié)果判斷。l ③ 不能檢測 DNAbp)大片段 (300757677l 缺點(diǎn) :l ① 只能標(biāo)記中期及晚期的凋亡細(xì)胞。l ⑤ 適用性 較廣 :可用于石蠟包埋的組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離細(xì)胞的凋亡情況檢測。74l TUNEL法優(yōu)點(diǎn) :l ④ 適用于 形態(tài) 研究 :用 TUNEL法可用于只有極少細(xì)胞發(fā)生凋亡的情況。凋亡細(xì)胞顯示增強(qiáng)的熒光 ,而壞死細(xì)胞和活細(xì)胞均不著染熒光。73l TUNEL法優(yōu)點(diǎn) :l 　　 DNA的作用下 ,在無需模板的情況下 ,可進(jìn)行 3′端的 DNA　　 DNA72l TUNEL法原理　　 DNA斷端 3′OH　 由由 DNA 片段末端標(biāo)記技術(shù)發(fā)展而成的片段末端標(biāo)記技術(shù)發(fā)展而成的TUNEL 法法 [ termina deoxy nucleotibyl transferase( TdT )mediated dUTPbiotin nick end labelling ,TUNEL] 及試劑盒化及試劑盒化 ,使使細(xì)胞凋亡的原位檢測在諸多領(lǐng)域的研究中得到細(xì)胞凋亡的原位檢測在諸多領(lǐng)域的研究中得到廣泛應(yīng)用。：l 　　　凋亡細(xì)胞經(jīng)處理后 ,采用常規(guī)方法分離提純 DNA ,進(jìn)行瓊