腫瘤細胞與分化、凋亡一(參考版)
2025-05-03 06:04本頁面
【正文】 DADS對人胃癌 MGC803和 BGC823細胞 G2/M期檢查點 激酶通路的影響 ?RTPCR檢測 Chk1和 Chk2在 mRNA水平的改變 ?Western blot檢測各蛋白的改變 ?免疫共沉淀檢測 Chk Chk2與 Cdc25C結合 M 1 2 3 4 5 6 600bp 300bp Chk1 βactin 01 2 3 4 5 6Ratio of gray valueRTPCR 檢測 MGC80 BGC823細胞 Chk1mRNA表達水平 M： Marker； 1： MGC803細胞對照組； 23： DADS 處理 MGC803細胞 1d、 2d； 4: BGC823細胞對照組； 56： DADS 處理 BGC823細胞 1d、 2d M 1 2 3 4 5 6 600bp 300bp Chk2 βactin 01 2 3 4 5 6Ratio of gray valueRTPCR 檢測 MGC80 BGC823細胞 Chk2mRNA表達水平 M： Marker； 1： MGC803細胞對照組； 2－ 3： DADS 處理 MGC803細胞 1d、 2d； 4: BGC823細胞； 5－ 6： DADS處理 BGC823細胞 1d、 2d DADS誘導 MGC803和 BGC823細胞 Chk1和 PChk1表達 0 1 2 4 8 12 (hr) PChk1(Ser345) Chk1 βactin 010h 1h 2h 4h 8h 12hRatio of gray valueCHK1PCHK1DADS對 MGC803細胞磷酸化 Chk1表達的影響 PChk1(Ser345) Chk1 βactin 010h 1h 2h 4h 8h 12hRatio of gray valueCHK1PCHK1DADS對 BGC823細胞磷酸化 Chk1表達的影響 0 1 2 4 8 12 (hr) DADS誘導 MGC803和 BGC823細胞 Chk2和 PChk2表達 0 1 2 4 8 12 (hr) PChk2 Chk2 βactin 010h 1h 2h 4h 8h 12hRatio of gray valueCHK2PCHK2DADS對 MGC803細胞磷酸化 Chk2表達的影響 0 1 2 4 8 12 (hr) PChk2 Chk2 βactin 010h 1h 2h 4h 8h 12hRatio of gray valueCHK2PCHK2DADS對 BGC823細胞磷酸化 Chk2表達的影響 DADS誘導 MGC803和 BGC823細胞 ATR和 PATR的表達 0 15 30 60 90 120 (min) PATR（ Ser428） ATR βactin 0123456780m 15m 30m 60m 90m 120mRatio of gray valueATRPATRDADS對 MGC803細胞磷酸化 ATR表達的影響 0 15 30 60 90 120 (min) PATR（ Ser428） ATR βactin 01231 2 3 4 5 6Ratio of gray valueATRPATR圖 27 DADS對 BGC823細胞磷酸化 ATR表達的影響 DADS誘導 BGC823細胞 Chk下游分子 CDC25C、 Cyclin B1的表達 0 12 24 36 48 (hr) CDC25C βactin 01230h 12h 24h 36h 48hRatio of gray valueDADS對 BGC823細胞 Cdc25C磷酸酶表達的影響 0 12 24 36 48 (hr) Cyclin B1 β－ actin 012341 2 3 4 5Ratio of gray value圖 25 DADS對 BGC803細胞 CyclinB1表達的影響 免疫共沉淀檢測 Chk1激酶活性 Chk1 Cdc25C MGC803細胞 BGC823細胞 圖 29 免疫共沉淀 Westernblot分析 MGC803和 BGC823細胞中的 Chk1表達 免疫共沉淀檢測 Chk2激酶活性 Chk2 Cdc25C MGC803細胞 BGC823細胞 免疫共沉淀 Westernblot分析 MGC803和 BGC823細胞中 Chk2的表達 Chk1和 Chk2 基因沉默對 DADS G2/M期阻滯作用 及檢查點激酶通路的影響 1. 實時熒光定量 PCR檢測 RNAi后 Chk1和 Chk2 mRNA表達的改變 2. Chk1和 Chk2 RNAi后 Chk1和 Chk2蛋白表達的改變 3. Chk1 、 Chk2基因沉默后 MTT比色實驗結果 4. 干擾后細胞周期的改變 5. Chk1和 Chk2 RNAi后下游蛋白表達的改變 定量 RTPCR檢測 MGC803細胞 Chk1 mRNA表達的改變 樣品 GAPDH chk1 chk1/GAPDH MGC803 MGC803+vector MGC803+DADS MGC803+DADS+vector 定量 RTPCR檢測 BGC823細胞 Chk1 mRNA表達的改變 樣品 GAPDH chk1 chk1/GAPDH BGC823 BGC823+vector BGC823+DADS BGC823+DADS+vector 定量 RTPCR檢測 MGC803細胞Chk2 mRNA表達的改變 樣品 GAPDH chk2 chk2/GAPDH MGC803 MGC803+vector MGC803+DADS MGC803+DADS+vector 定量 RTPCR檢測 BGC823細胞
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