細胞凋亡和細胞壞死-資料下載頁
2025-05-12 22:07本頁面
【正文】 ? 應用范圍：石蠟包埋的組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)細胞、組織中分離的細胞 ? (三 ) ELISA法 ? 原理：以抗組蛋白抗體包被微孔板壁，加入標本，凋亡細胞的核小體可與抗體結合，再加入抗 DNA片斷 POD復合物，與核小體中的 DNA片斷結合，最后加入 POD顯色底物，以酶標儀測定光密度以進行定量分析。 三 . 凋亡酶學分析 ? 1. 內切核酸酶 (endonuclease, DNase) ? 種類： DNase Ⅰ （內質網(wǎng)、高爾基體 ), DNase Ⅱ （溶酶體、胞核 )， NUC18（胞核，胸腺細胞中 ) 等 ? 作用： 使 DNA斷裂成 180－ 200bp或其倍數(shù)的片斷 ? 激活機制： CAD(caspaseactivate DNase) ? ICAD(inhibtor of CAD) ? 檢測： Western Blotting ? Caspases的檢測 ? 1. Caspase3活性測定 (FIENA法 ) ? 熒光測定免疫吸附法 (flurometric immunosorbent enzyme assay, FIENA), caspase3可作用于連接熒光素的特異底物－乙?；於彼?谷氨酸 頡氨酸 天冬氨酰胺 (AcDEVD), 產(chǎn)生發(fā)熒光的裂解產(chǎn)物 AFC，且caspase3活性與 AcDEVDAFC分解的量或自由熒光 AFC產(chǎn)生熒光的強弱成正比，故可定量檢測 ? 2. 蛋白印跡法 ? Caspases作用底物的檢測 ? PARP89kD的檢測 四 . 凋亡相關蛋白分析 ? 1. Bcl2家族 ? 促進凋亡： Bax, Bal, BclXs, Bad, Bid, Bik, Bim, Hrk, Bok等 ? 抑制凋亡： Bcl2, BclXl, Bclw, Mcl1, A1/Bfl1等 ? 均含有 BH(Bcl2 homology)結構域，通過此結構域以二聚體形式調控凋亡。 ? 2. 其他相關蛋白 ? p53, Myc, Fas等 五、流式細胞分析 （ Flow Cytometry， FCM） 利用流式細胞儀對處在快速、直線、流動狀態(tài)中的單細胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速定量分析，同時對特定群體加以分選的現(xiàn)代細胞分析技術。 FCM分析細胞凋亡的方法 ? 一 . 細胞形態(tài)分析 ? 二 . 細胞膜結構與功能改變分析 ? 三 . 細胞 DNA含量分析 ? 四 . TUNEL法
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