【正文】 而采用聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)可將血漿蛋白分離出 100種以上。采用醋酸纖維素膜電泳，可將血漿蛋白質(zhì)分為 5個(gè)組分。 （ 三 ） 根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列預(yù)測(cè)三維空間 結(jié)構(gòu) * 通過(guò)對(duì)已知空間結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析 ， 找出一級(jí)結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)的關(guān)系 ， 總結(jié)出規(guī)律 ， 用于新的蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè) 。 （一）圓二色光譜可估算蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)比例 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) X射線衍射法 (Xray diffraction)和核磁共振技術(shù) (nuclear magic resonance, NMR)是研究蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)最準(zhǔn)確的方法 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 化學(xué)法 溶解法 二硝基氟苯法（ DNP法） 肼解法 二甲基氨基萘磺酰氯法（ Dansyl氯法）還原成氨基醇法 亮氨酸氨肽酶法 細(xì)胞外氨肽酶法 羧肽酶 A法 羧肽酶 B法 羧肽酶 C法 氨基酸和肽的末端測(cè)定法 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ?通過(guò)核酸來(lái)推演蛋白質(zhì)中的氨基酸序列： 按照三聯(lián)密碼的原則推演出氨基酸的序列 分離編碼蛋白質(zhì)的基因 測(cè)定 DNA序列 排列出 mRNA序列 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 七、應(yīng)用物理學(xué)、生物信息學(xué)原理可進(jìn)行蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)測(cè)定或預(yù)測(cè) 通常采用 圓二色光譜 (circular dichroism，CD)測(cè)定溶液狀態(tài)下的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)含量 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 因?yàn)槌两迪禂?shù) S大體上和分子量成正比關(guān)系 ，故可應(yīng)用超速離心法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量 ， 但對(duì)分子形狀的高度不對(duì)稱的大多數(shù)纖維狀蛋白質(zhì)不適用 。 ?蛋白質(zhì)分離常用的層析方法 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 五 、利用蛋白質(zhì)顆粒沉降行為不同可進(jìn)行超速離心分離 ?超速離心法 (ultracentrifugation)既可以用來(lái)分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 。 ?層析 (chromatography) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ? 離子交換層析： 利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進(jìn)行分離。 ? 雙向凝膠電泳 ，蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ，常用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定。 這種通過(guò)蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù) , 稱為 電泳 (elctrophoresis) 。 利用特異抗體識(shí)別相應(yīng)的抗原蛋白 ， 并形成抗原抗體復(fù)合物的性質(zhì) ， 可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白 。 ?鹽析 (salt precipitation)是將硫酸銨 、 硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液 ， 使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞 ， 導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀 。 蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后 ， 應(yīng)立即分離 。 應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過(guò)有一定截留分子量的超濾膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。 雙縮脲反應(yīng)可用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)水解程度。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 五、蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)可用于溶液蛋白質(zhì)測(cè)定 （一）蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生茚三酮反應(yīng) 蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng) (ninhydrin reaction) 。 ?蛋白質(zhì)沉淀 ?蛋白質(zhì)的凝固作用 (protein coagulation) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 四 、蛋白質(zhì)在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰 由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸 ， 因此在 280nm波長(zhǎng)處有特征性吸收峰 。 變性的蛋白質(zhì)易于沉淀 ， 有時(shí)蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀 ， 但并不變性 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 若蛋白質(zhì)變性程度較輕 ， 去除變性因素后 ， 蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能 ， 稱為 復(fù)性 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ? 應(yīng)用舉例 ?臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來(lái)消毒及滅菌。 ?蛋白質(zhì)的變性 (denaturation) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) ? 造成變性的因素 ? 變性的本質(zhì) —— 破壞非共價(jià)鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。 ?蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) ( isoelectric point, pI) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 二、蛋白質(zhì)具有膠體性質(zhì) 蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一 ， 分子量可自 1萬(wàn)至 100萬(wàn)之間 ， 其分子的直徑可達(dá)1～ 100nm， 為膠粒范圍之內(nèi) 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 第四節(jié) 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) Chemical and Physical Properties of Proteins 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 一、 蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì) 蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外 ，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán) ， 在一定的溶液 pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán) 。 PrPc α螺旋 PrPsc β折疊 正常 瘋牛病 ?瘋牛病 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 三、蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾、相互作用可改變其功能 最初基因表達(dá)的產(chǎn)物 —— 蛋白質(zhì)，并不一定為具有生物學(xué)功能的成熟蛋白質(zhì)，新生蛋白質(zhì)通常還需要進(jìn)行蛋白質(zhì)翻譯后的化學(xué)修飾（第十八章）。 正常的 PrP富含 α螺旋，稱為 PrPc。 這類疾病包括 ：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨丁頓舞蹈病、瘋牛病等。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) （二）蛋白質(zhì)構(gòu)象改變可導(dǎo)致 構(gòu)象病 蛋 白 質(zhì) 構(gòu) 象 疾 病 （ Protein Conformational Diseases） ： 若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯(cuò)誤 ， 盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變 ， 但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變 ， 仍可影響其功能 ， 嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生 。 如果是促進(jìn)作用則稱為 正協(xié)同效應(yīng) (positive cooperativity) 如果是抑制作用則稱為 負(fù)協(xié)同效應(yīng) (negative cooperativity) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) O2 血紅素與氧結(jié)合后 ， 鐵原子半徑變小 ， 就能進(jìn)入卟啉環(huán)的小孔中 ， 繼而引起肽鏈位臵的變動(dòng) 。 氧合 Hb占總 Hb的百分?jǐn)?shù) （ 稱 百分飽和度 ） 隨 O2濃度變化而改變 。 Hb亞基之間通過(guò) 8對(duì)鹽鍵 ，使 4個(gè)亞基緊密結(jié)合而形成親水的球狀蛋白 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 血紅蛋白 (hemoglobin， Hb) 血紅蛋白具有 4個(gè)亞基組成的四級(jí)結(jié)構(gòu) 。 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 1. 肌紅蛋白 /血紅蛋白含有血紅素輔基 二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)表現(xiàn)功能 血紅素結(jié)構(gòu) (一 )血紅蛋白構(gòu)象改變引起功能變化 目 錄 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié) 第一節(jié) 第六節(jié) 肌紅蛋白 (myoglobin， Mb) 肌紅蛋白是一個(gè)只有三級(jí)結(jié)構(gòu)的單鏈蛋白質(zhì) ，有 8段 α螺旋結(jié)構(gòu) 。 glu pro leu C(146) HbS β 肽鏈 HbA β 肽 鏈 Nval glu thr his