分光光度法ppt課件(2)(參考版)
2025-05-09 08:10本頁面
【正文】 5 應(yīng)用 : 單一組分測定示例 、 多組分測定 、 光度滴定 、 絡(luò)合物組成的測定 、 酸堿離解常數(shù)的測定 。 3 靈敏度的表示 — 摩爾吸光系數(shù)的意義和計算 ； 準(zhǔn)確度 — 適宜的測量范圍 、 偏離比爾定律的原因 。 定量分析的基礎(chǔ) — 朗伯 比爾定律： A=?bc=lgT 式中各參數(shù)的物理意義 ， 定量計算 。 當(dāng) cM/c為 ， 絡(luò)合比為 1:1； 當(dāng) cM/c為 ， 絡(luò)合比為 1:2； 當(dāng) cM/c= ， 絡(luò)合比為 1:3。 68 （ 2） 連續(xù)變化法 (又稱等摩爾系列法 ) cM+cR=c， 改變 cM和 cR的相對量 ， 配制一系列溶液 ， 在有色絡(luò)合物 的最大吸收波長處測量這一系列 溶液的吸光度 。 66 3 弱酸和弱堿解離常數(shù)的測定 HB==H++B pHAAAApKBHBa ?????? )()(lg67 絡(luò)合物組成的測定 （ 1）飽和法 (又稱摩爾比法 ) 固定一種組分 (通常是金 屬離子 M)的濃度，改變絡(luò)合 劑 (R)的濃度，得到一系列 [R]/[M]比值不同的溶液， 并配制相應(yīng)的試劑空白作 參比液，分別測定其吸光度。當(dāng)選擇 λ2為測量波長，三氯苯酚在此波長處也有較大吸收，產(chǎn)生干擾。對于相互干擾的雙組分體系，它們的吸收光譜重疊，選擇參比波長和測定波長的條件是 :待測組分在兩波長處的吸光度之差 ΔA要足夠大，干擾組分在兩波長處的吸光度應(yīng)相等，這樣用雙波長法測得的吸光度差只與待測組分的濃度成線性關(guān)系，與干擾組分無關(guān)，從而消除了干擾 。 以有色絡(luò)合物吸收曲線下端的某一波長作為參比波長；以顯色劑的吸收峰為參比波長 。 bcAAA )(2121 ???? ?? ?????63 （ 2）雙波長吸光光度法的應(yīng)用 * 混濁試液中組分測定 ：一般選擇待測組分的最大吸收波長為測量波長 (λl)， 選擇與其相近而兩波長相差在 40~60 nm范圍內(nèi)且有較大的 ΔA值的波長為參比波長 。 這是定量的理論依 據(jù) 。被廣泛用于環(huán)境試樣及生物試樣的分析 。這樣就可以從分析波長的信號中扣除來自參比波長的信號，消除各種干擾，得待測組分的含量。 參比溶液的濃度越接近待測試液的濃度 ， 測量誤差越小 ， 最小誤差可達 %。x %。 (cxco) x%； 普通光度法的結(jié)果為 cx177。以把 空白溶液作為參比的稀溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線作為 ΔA和 Δc的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測得的 ΔA求出相應(yīng)的 Δc值， 從 cx=co+c可求出待測試液的濃度，這就是示差吸 光光度法定量的基本原理。 它們的基本原理相同 ， 且以高濃度示差吸光光度法應(yīng)用最多 ， 僅介紹高濃度示差吸光光度法 。 示差吸光光度法可克服這一缺點 。 當(dāng) A=(或透射比 T=%)時，測量的相對誤 差最小。 吸光度越大，讀數(shù)波動所引起的吸光度誤差也越大 56 透射比很小或很大時，濃度測量誤差都較大，即 光度測量最好選吸光度讀數(shù)在刻度尺的中間而不落兩 端。吸光度標(biāo) 尺刻度不均勻。這 些誤差可能來源于光源不穩(wěn)定，實驗條件偶然變動， 讀數(shù)不準(zhǔn)確等。 55 2 吸光度測量的誤差 在吸光光度分析中，儀器測量不準(zhǔn)確也是誤差 的主要來源。 c 締合 例如在酸性條件下， CrO42會締合生成Cr2O72，而它們對光的吸收有很大的不同。 A 解離 大部分有機酸堿的酸式 、 堿式對光有不同的吸收性質(zhì) ， 溶液的酸度不同 ， 酸 (堿 )解離程度不同 ， 導(dǎo)致酸式與堿式的比例改變 ， 使溶液的吸光度發(fā)生改變 。 故在光度法中應(yīng)避免溶液產(chǎn)生膠體或混濁 。 52 （ 2） 介質(zhì)不均勻引起的偏離 朗伯－比爾定律要求吸光物質(zhì)的溶液是均勻的 。 ◎ 人射光波長選擇在被測物質(zhì)的最大吸收處，保證測定有較高的靈敏度，此處的吸收曲線較為平坦，在此最大吸收波長附近各波長的光的 ε值大體相等，由于非單色光引起的偏離要比在其他波長處小得多。 由于物質(zhì)對不同波長光的吸收程度的不同 ， 因而導(dǎo)致對朗伯－比爾定律的偏離 。 偏離朗伯－比爾定律 的原因主要是儀器或溶液 的實際條件與朗伯 比爾定 律所要求的理想條件不一致 。 這種 情況稱為偏離朗伯 比爾定律 。 e 改變加入試劑的順序，使被測組分不發(fā)生顯色反應(yīng)，可以此溶液作為參比溶液消除干擾。 c 顯色劑有顏色 ， 可選擇不加試樣溶液的試劑空白作參比溶液 。 參比溶液選擇： a 試液及顯色劑均無色 ， 蒸餾水作參比溶液 ?？赏ㄟ^控制溶液的濃度或選擇不同厚度的吸收池來達到目的 。為避免鐵的干擾，可以選 擇波長 520 nm進行測定，雖然 測鎳的靈敏度有所降低，但酒 石酸鐵不干擾鎳的測定。 但是 ， 在 最 大 吸 收 波 長 處 有 其 他 吸 光 物 質(zhì) 干 擾 測 定 時 ， 則 應(yīng) 根 據(jù) 入 射 光 波 長 吸 收 最 大 ， 干擾最小的原則 。 43 （ 1） 測量波長的選擇 為了使測定結(jié)果有較 高 的 靈 敏 度 ， 應(yīng) 選 擇 被 測 物 質(zhì) 的 最 大 吸 收 波 長的光作為入射光 ， 這稱為 “ 最大吸收原則 ” （ m a x i m u m a b s o r p t i o n） 。
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