高效液相色譜儀ppt課件(參考版)
2025-05-08 07:32本頁面
【正文】 （ 2）樣品池也要保養(yǎng) (流動相干凈，樣品不能太臟）。 （ 13） 若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑 保存并封閉 3. 泵的維護(hù)與保養(yǎng) （ 1） 使用的流動相盡量要清潔； （ 2） 進(jìn)液處的 砂芯過濾頭 要經(jīng)常清洗； （ 3） 流動相交換時要防止沉淀； （ 4） 每天開始使用儀器，注意放空排氣，確保泵頭、流動池以及其他流路系統(tǒng)中無氣泡 。 ( 12）一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。 如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請?jiān)谑褂昧鲃酉嘀坝? 乙醇或異丙醇平衡 每天用足夠的時間來平衡色譜柱，一定要做！！ 如何平衡？ 平衡過程中，將流速 緩慢地提高 ；用流動相平衡色譜柱直至 獲得穩(wěn)定的基線 表 1 建議用來沖洗的溶劑體積 色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積（ 20倍） 30ml 60ml 250mm10mm ~20ml 400ml 2. 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng) （ 1） 盡量使用預(yù)柱和保護(hù)柱來保護(hù)分析柱 （ 2） 柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動 （ 3） 避免使用高粘度的溶劑作為流動相 （ 4） 避免流動相組成及極性的劇烈變化 （ 5） 流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理 （ 6） 大多數(shù)反相色譜柱的 pH穩(wěn)定范圍是 2－ 8，盡量不 超過該色譜柱的 pH范圍 （ 7） 注意每根色譜柱的柱壓上限，嚴(yán)禁在上限壓力下工作 （ 8）嚴(yán)格控制進(jìn)樣量，并盡量用流動相溶解樣品 （ 9）避免樣品閥扳動過慢造成柱壓大的波動 （ 10）壓力升高可能是需要 更換預(yù)柱 的信號 （ 11）每天分析測定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗? (約 20 倍） ,并保存在適當(dāng)溶劑中（ C18在甲醇 )； 當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)先用無鹽流動相沖洗。由于色譜柱在儲存或運(yùn)輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析樣品之前，應(yīng)使用 10～ 20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱 ； 如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水 “過渡” 。 （ 1） 色譜柱的平衡 反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在 乙腈 /水 中的。防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對進(jìn)樣閥的磨損。 使用部分裝液法進(jìn)樣時，進(jìn)樣量最多為 定量環(huán)體積的 75%，如 20μL的定量環(huán)最多進(jìn)樣 15μL的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同； 使用完全裝液法進(jìn)樣時，進(jìn)樣量最少為 定量環(huán)體積的 3至 5倍， 即 20μL的定量環(huán)最少進(jìn)樣 60至 100μL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。 六、儀器保養(yǎng) （ 1） 手柄處于 Load和 Inject之間時，由于暫時堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過高的壓力引起柱頭損壞， 所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動閥，不能停留在中途。 例 2． 稠環(huán)芳烴的分析 固定相：十八烷基硅烷化鍵合相 流動相： 20%甲醇 水 ～ 100%甲醇 線性梯度淋洗， 2%/min 流 速： 1mL/min 柱 溫： 50 186。因此， HPLC具有非 常廣闊的應(yīng)用前景。 脫氣：超聲脫氣，吹氦脫氣，抽真空脫氣法，在線真空脫氣法 ? 樣品的準(zhǔn)備 稱量，用 流動相 超聲溶解，過濾或高速離心 2. 應(yīng)用領(lǐng)域 目前， HPLC在有機(jī)化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、藥物臨床、化工、食品衛(wèi)生、環(huán)保監(jiān)測、商檢和法檢等方面都有廣泛的用途，而在生物和高分子試樣的分離和分析中更是有明顯優(yōu)勢。 樣品組分保留值和容量因子的選擇 ? 分析時間最好控制在 10～ 30min ? 容量因子控制在 1～ 10；對于容量因子范圍較寬的通常使用梯度洗脫技術(shù)。 當(dāng)樣品中溶質(zhì)組分較多及不同溶質(zhì)的性質(zhì)差別較大時，考慮梯度洗脫。 ? 在線真空脫氣法（實(shí)時在線脫氣，效果好） 五、 HPLC應(yīng)用 1. 分析方法如何建立？ 色譜柱和檢測器的選擇 根據(jù)被分離物質(zhì)性質(zhì)選擇；參考文獻(xiàn)類似物質(zhì) 疏水性的樣品 ——反相鍵合色譜 ； 親水性的樣品 ——正相鍵合色譜； 流動相組成 ,配比 ,流量 ,梯度洗脫的選擇 根據(jù)分析樣品的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)，并查閱相關(guān)文獻(xiàn)確定流動相組成。 ? 抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。 流動相脫氣的目的 – 使色譜泵的輸
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