高效液相色譜儀ppt課件(完整版)
【正文】 2CCH2H2CCH2H2CCH2H3CSiCH2H3CCH3H2CCH2H2CCH2H2CCH2H3CCH2H3CCH3H2CCH2H2CCH2H2CCH2H3CSiCH2H3CCH3H2CCH2H2CCH2H2CCH2H3CSiOOOSiCH3H3CCH3 SiCH3H3CCH3HHHHHHH主要是由于修飾到硅膠上的 硅烷化 試劑不同。 常用的反向填 料有 :C18(ODS)、 C8(MOS)、 C4(Butyl)、 C6H5(Phenyl)等。 雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器 2487 特點(diǎn) ：選擇性檢測(cè)器， 靈敏度較高（ 109g）， 噪音低。 ℃ （需配柱溫箱使用） ； 靈敏度低 (106g)； 不能用于梯度洗脫。在檢測(cè)器中，光被散射的程度取決于溶質(zhì)顆粒的大小與數(shù)量。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。 流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng) ( 特殊情況除外，如配位色譜等 ) 流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便降低柱壓，延長(zhǎng)色譜柱 使用的壽命 避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。 溶劑和樣品過(guò)濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、 儀器起到作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。 ? 抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。 脫氣：超聲脫氣，吹氦脫氣，抽真空脫氣法，在線真空脫氣法 ? 樣品的準(zhǔn)備 稱量，用 流動(dòng)相 超聲溶解，過(guò)濾或高速離心 2. 應(yīng)用領(lǐng)域 目前， HPLC在有機(jī)化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、藥物臨床、化工、食品衛(wèi)生、環(huán)保監(jiān)測(cè)、商檢和法檢等方面都有廣泛的用途，而在生物和高分子試樣的分離和分析中更是有明顯優(yōu)勢(shì)。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用 10～ 20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱 ； 如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水 “過(guò)渡” 。 （ 2）樣品池也要保養(yǎng) (流動(dòng)相干凈，樣品不能太臟）。 如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用 乙醇或異丙醇平衡 每天用足夠的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱，一定要做！！ 如何平衡？ 平衡過(guò)程中，將流速 緩慢地提高 ；用流動(dòng)相平衡色譜柱直至 獲得穩(wěn)定的基線 表 1 建議用來(lái)沖洗的溶劑體積 色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積（ 20倍） 30ml 60ml 250mm10mm ~20ml 400ml 2. 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng) （ 1） 盡量使用預(yù)柱和保護(hù)柱來(lái)保護(hù)分析柱 （ 2） 柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng) （ 3） 避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相 （ 4） 避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化 （ 5） 流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理 （ 6） 大多數(shù)反相色譜柱的 pH穩(wěn)定范圍是 2－ 8，盡量不 超過(guò)該色譜柱的 pH范圍 （ 7） 注意每根色譜柱的柱壓上限，嚴(yán)禁在上限壓力下工作 （ 8）嚴(yán)格控制進(jìn)樣量，并盡量用流動(dòng)相溶解樣品 （ 9）避免樣品閥扳動(dòng)過(guò)慢造成柱壓大的波動(dòng) （ 10）壓力升高可能是需要 更換預(yù)柱 的信號(hào) （ 11）每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱 (約 20 倍） ,并保存在適當(dāng)溶劑中（ C18在甲醇 )； 當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)先用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。 使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最多為 定量環(huán)體積的 75%，如 20μL的定量環(huán)最多進(jìn)樣 15μL的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同； 使用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最少為 定量環(huán)體積的 3至 5倍， 即 20μL的定量環(huán)最少進(jìn)樣 60至 100μL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。因此， HPLC具有非 常廣闊的應(yīng)用前景。 ? 在線真空脫氣法（實(shí)時(shí)在線脫氣，效果好） 五、 HPL
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