高效液相色譜儀ppt課件-閱讀頁
2025-05-20 07:32本頁面
【正文】 分離狀況。 ? 若流動相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。 2. 流動相類別 按流動相組成成分 ：單組分和多組分； 按極性分 ：極性、弱極性、非極性； 按使用方式分 ：固定組成淋洗和梯度淋洗。 采用二元或多元組合溶劑作為流動相可以靈活調(diào)節(jié)流動相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時間。 采用正相液 液分配分離時：首先選擇中等極性溶劑， 若組分的保留時間短，降低溶劑極性，反之增加。 常用溶劑的極性順序 ： 水 (最大 ) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷 氯仿 溴乙烷 苯 四氯化碳 二硫化碳 環(huán)己烷 己烷 煤油 (最小 ) 3. 流動相選擇 4. 選擇流動相時應(yīng)注意的幾個問題 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)： 流動相對樣品具有一定的溶解能力， 保證樣品組分不會沉淀在柱中 ( 或長時間保留在柱中 ) 。 如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。如使用 UV 檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。 ? 在流動相配制好后，一定要進(jìn)行 脫氣 。 ? 盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。 ? 對 色譜柱 ：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小， 溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。 5. 流動相過濾 流動相在混合前分別濾過，特別要注意分清 有機(jī)相 濾膜和水相 濾膜。水相濾膜只能用于過濾水溶液，嚴(yán)禁用于有機(jī)溶劑，否則濾膜會被溶解！溶有濾膜的溶劑不得用于 HPLC。 ? 加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。 ? 超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩1015min。 為達(dá)到較好的分離效果，確定流動相配比。 當(dāng)分析弱酸，弱堿性化合物時，可通過采用緩沖溶液及加醋酸、三乙 胺等調(diào)節(jié)流動相 的 pH值來改善峰型。 ? 相鄰組分分離度的要求： 對于難分離的樣品，要求分離度 R≥ 樣品分析方法 ? 流動相的準(zhǔn)備 過濾：用孔徑為 （ )濾膜過濾除去固體顆粒雜質(zhì)。 在目前已知的有機(jī)化合物中，若事先不進(jìn)行化學(xué)改性， 只有 20％的化合物用氣相色譜法可以得到較好的分離， 而 80％的有機(jī)化合物需 HPLC分析。 作為人工合成藥物的精制手段，用于除去少量雜質(zhì) (手性色譜柱以及配位色譜法 ) 從一些復(fù)雜的混合物中排除干擾物質(zhì)，并分析其中微量成分 中草藥有效成分的制備和分析 環(huán)境監(jiān)測和污染物的分析 食品中營養(yǎng)成分和物質(zhì)的分析 手性分離技術(shù)目前已成為高效液相色譜十分重要和熱門的應(yīng)用領(lǐng)域 例 1. 環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析 固定相：薄殼型硅膠 (37 ～ 50?m) 流動相：正己烷 流 速： mL/min 色譜柱： 50cm?(內(nèi)徑 ) 檢測器：差示折光檢測器 可對水果、蔬菜中 的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行分析。C 柱 壓： 7 ?105 Pa 檢測器：紫外檢測器 稠環(huán)芳烴多為致癌物質(zhì)。 （ 2） 在 HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是 平頭注射器 。 （ 3） 使用定量環(huán)的定量：六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。 （ 4） 進(jìn)樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用 μm () 的濾膜過濾。 為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動相沖洗， 在進(jìn)樣閥的 Load和 Inject位置反復(fù)沖洗， 再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)。 一定確保所使用的流動相和乙腈 /水互溶。 切忌直接用甲醇置換緩沖液 2. 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng) 硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在 正庚烷 中的。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜止過夜或更長時間。否則反沖會迅速降低柱效。 （ 5） 避免泵啟動過速、升壓過快 4. 檢測器的保養(yǎng) （ 1） 紫外燈的保養(yǎng)：在分析前、色譜柱平衡得差不多時，再打開檢測器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測器。
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