【正文】 溶劑和樣品過濾非常重要，它會對色譜柱、 儀器起到作用，消除由于污染對分析結(jié)果的影響。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。 ℃ （需配柱溫箱使用） ； 靈敏度低 (106g)； 不能用于梯度洗脫。 常用的反向填 料有 :C18(ODS)、 C8(MOS)、 C4(Butyl)、 C6H5(Phenyl)等。L等不同容積， 可以根據(jù)需要選配。 特點(diǎn)：高壓、高效、高速 分離對象 ：適用高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣分離分析 （與 GC區(qū)分） 三、流程及主要部件 1. 流程 2. 主要部件 (1) 高壓輸液泵 單元泵 雙 元 泵 高壓泵作用 ：輸送流動(dòng)相。 用定量環(huán)進(jìn)樣精密度好，在使用外標(biāo)法時(shí)，應(yīng)使用此種操作方式。保護(hù)柱除了可以過濾顆粒物外，因?yàn)閹?1厘米長的填料，強(qiáng)保留物質(zhì)就先留在保護(hù)柱的柱芯填料里面，這樣可以避免色譜柱被強(qiáng)保留物質(zhì)污染。 c. 熒光檢測器 (FLD) 特點(diǎn) : 選擇性檢測器， 靈敏度比紫外檢測器高 23個(gè)數(shù)量級， 可達(dá)到 1012g； 選擇性好，對流量和溫度敏感性低。 采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間。 5. 流動(dòng)相過濾 流動(dòng)相在混合前分別濾過，特別要注意分清 有機(jī)相 濾膜和水相 濾膜。 作為人工合成藥物的精制手段，用于除去少量雜質(zhì) (手性色譜柱以及配位色譜法 ) 從一些復(fù)雜的混合物中排除干擾物質(zhì)，并分析其中微量成分 中草藥有效成分的制備和分析 環(huán)境監(jiān)測和污染物的分析 食品中營養(yǎng)成分和物質(zhì)的分析 手性分離技術(shù)目前已成為高效液相色譜十分重要和熱門的應(yīng)用領(lǐng)域 例 1. 環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析 固定相：薄殼型硅膠 (37 ～ 50?m) 流動(dòng)相：正己烷 流 速： mL/min 色譜柱： 50cm?(內(nèi)徑 ) 檢測器：差示折光檢測器 可對水果、蔬菜中 的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行分析。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜止過夜或更長時(shí)間。 一定確保所使用的流動(dòng)相和乙腈 /水互溶。 ? 相鄰組分分離度的要求： 對于難分離的樣品，要求分離度 R≥ 樣品分析方法 ? 流動(dòng)相的準(zhǔn)備 過濾：用孔徑為 （ )濾膜過濾除去固體顆粒雜質(zhì)。 ? 盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。 ? 若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。 特點(diǎn) ：通用性檢測器； 對溫度變化比較敏感，要保持在 177。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被 沖洗出 ， 而極性弱的組分會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留 。L、 50181。 也即是貯液瓶中的有機(jī)溶劑或緩沖溶液靠 高壓泵 送入色譜柱。 自動(dòng)進(jìn)樣器 色譜柱是高效液相色譜的心臟，在 HPLC的使用中， 保持色譜柱的柱效，延長柱子的使用壽命非常重要。 (4) 液相色譜 檢測器 分類 按檢測原理： 光學(xué)檢測器（如 紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射 ） 熱學(xué)檢測器 (如吸附熱） 電化學(xué)學(xué)檢測器（如庫倫、安培） 電學(xué)檢測器（電導(dǎo)、介電常數(shù)） 按測量性質(zhì)： 通用型檢測器（如示差折光、蒸發(fā)光散射檢測器） 專屬型檢測器（如紫外、熒光檢測器） 按檢測方式： 濃度型檢測器 質(zhì)量型檢測器 著重介紹四種檢測器：紫外檢測器（光電二極管陣列檢測器）、 示差折光檢測器、熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器 工作原理 ：基于朗伯 比爾定律。 缺點(diǎn) ：只適合于能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的檢測。 在選擇溶劑時(shí)， 溶劑的極性 是選擇的重要依據(jù)。有機(jī)相濾膜一般用于過濾有機(jī)溶劑，過濾水溶液時(shí)流速低或?yàn)V不動(dòng)。 例 2． 稠環(huán)芳烴的分析 固定相：十八烷基硅烷化鍵合相 流動(dòng)相： 20%甲醇 水 ～ 100%甲醇 線性梯度淋洗， 2%/min 流 速： 1mL/min 柱 溫：