《高效液相色譜儀》ppt課件(文件)
【正文】 噪音低。 溶 劑 UV截止波長(zhǎng)（ nm） 乙 腈 190 水 190 環(huán) 己 烷 195 己 烷 200 甲 醇 210 乙 醇 210 乙 醚 220 二氯甲烷 220 氯 仿 240 四氯化碳 265 四氫呋喃 280（ 220） 甲 苯 285 在使用紫外檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)與所用溶劑的截止波長(zhǎng)接近（或低于截止波長(zhǎng)）時(shí)，容易產(chǎn)生噪音干擾，從而影響檢測(cè)結(jié)果。 ℃ （需配柱溫箱使用） ； 靈敏度低 (106g)； 不能用于梯度洗脫。 缺點(diǎn) ：只適合于能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的檢測(cè)。在檢測(cè)器中，光被散射的程度取決于溶質(zhì)顆粒的大小與數(shù)量。 四、液相色譜的流動(dòng)相 1. 流動(dòng)相特性 ? 液相色譜的流動(dòng)相又稱為：淋洗液，洗脫劑。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。 在選擇溶劑時(shí)， 溶劑的極性 是選擇的重要依據(jù)。 流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng) ( 特殊情況除外，如配位色譜等 ) 流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便降低柱壓，延長(zhǎng)色譜柱 使用的壽命 避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。 ? 流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法 正常進(jìn)行。 溶劑和樣品過濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、 儀器起到作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。有機(jī)相濾膜一般用于過濾有機(jī)溶劑，過濾水溶液時(shí)流速低或?yàn)V不動(dòng)。 ? 抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。 當(dāng)樣品中溶質(zhì)組分較多及不同溶質(zhì)的性質(zhì)差別較大時(shí)，考慮梯度洗脫。 脫氣：超聲脫氣，吹氦脫氣，抽真空脫氣法，在線真空脫氣法 ? 樣品的準(zhǔn)備 稱量，用 流動(dòng)相 超聲溶解，過濾或高速離心 2. 應(yīng)用領(lǐng)域 目前， HPLC在有機(jī)化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、藥物臨床、化工、食品衛(wèi)生、環(huán)保監(jiān)測(cè)、商檢和法檢等方面都有廣泛的用途，而在生物和高分子試樣的分離和分析中更是有明顯優(yōu)勢(shì)。 例 2． 稠環(huán)芳烴的分析 固定相：十八烷基硅烷化鍵合相 流動(dòng)相： 20%甲醇 水 ～ 100%甲醇 線性梯度淋洗， 2%/min 流 速： 1mL/min 柱 溫： 50 186。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用 10～ 20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱 ； 如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水 “過渡” 。 ( 12）一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。 （ 2）樣品池也要保養(yǎng) (流動(dòng)相干凈，樣品不能太臟）。 （ 13） 若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑 保存并封閉 3. 泵的維護(hù)與保養(yǎng) （ 1） 使用的流動(dòng)相盡量要清潔； （ 2） 進(jìn)液處的 砂芯過濾頭 要經(jīng)常清洗； （ 3） 流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀； （ 4） 每天開始使用儀器，注意放空排氣，確保泵頭、流動(dòng)池以及其他流路系統(tǒng)中無氣泡 。 如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用 乙醇或異丙醇平衡 每天用足夠的時(shí)間來平衡色譜柱，一定要做！！ 如何平衡？ 平衡過程中，將流速 緩慢地提高 ；用流動(dòng)相平衡色譜柱直至 獲得穩(wěn)定的基線 表 1 建議用來沖洗的溶劑體積 色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積（ 20倍） 30ml 60ml 250mm10mm ~20ml 400ml 2. 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng) （ 1） 盡量使用預(yù)柱和保護(hù)柱來保護(hù)分析柱 （ 2） 柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng) （ 3） 避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相 （ 4） 避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化 （ 5） 流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理 （ 6） 大多數(shù)反相色譜柱的 pH穩(wěn)定范圍是 2－ 8，盡量不 超過該色譜柱的 pH范圍 （ 7） 注意每根色譜柱的柱壓上限，嚴(yán)禁在上限壓力下工作 （ 8）嚴(yán)格控制進(jìn)樣量，并盡量用流動(dòng)相溶解樣品 （ 9）避免樣品閥扳動(dòng)過慢造成柱壓大的波動(dòng)
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