高效液相色譜儀的應(yīng)用(參考版)
2025-05-02 05:04本頁面
【正文】 ： 采用 柱前熒光衍生反相色譜法； 可對作物種子、植物組織、果樹花芽及果實(shí)中的游離或結(jié)合態(tài)多胺進(jìn)行快速準(zhǔn)確測定。 HPLC的應(yīng)用 ： 采用 柱前衍生反相色譜法 可在 12分鐘對 17種氨基酸進(jìn)行準(zhǔn)確的痕量分析。 ： 植物樣品中的有機(jī)酸多采用 離子交換色譜法測定，也可用反相色譜法。 HPLC的應(yīng)用 ： 土壤、復(fù)合肥、作物種子、蔬菜、動物體液、動物飼料、植物材料和微生物中各種金屬和非金屬元素， 采用離子交換色譜分離 電化學(xué)檢測法進(jìn)行直接測定 。 100R S D ?? XS 1)(12??? ?? nXXSniS : standard deviation : average n : number of repeat XMethodological detection 回收率檢驗(yàn) 在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，然后按照樣品處理方法進(jìn)行處理、測定，最后按照公式計(jì)算加標(biāo)回收率。用相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。 標(biāo)準(zhǔn)值： 。 《 中國藥典 》 規(guī)定 R應(yīng)大于 。也叫分辨率，表示相鄰兩峰分離的程度。 流速范圍： ml/min 常用范圍： ml/min Investigation of measuring conditions 色譜圖檢驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖： 樣品的色譜圖： 2 系統(tǒng)適應(yīng)性檢驗(yàn) 理論塔板數(shù) 用于定量表示色譜柱的分離效率（柱效），用 N 表示 取決于色譜柱固定相的種類、性質(zhì)（粒度、粒徑分布等）、填充狀況、柱長、流動相的種類和流速等。 ? 流動相一般由甲醇 水、甲醇 水 酸、乙睛 水等組成，根據(jù)化合物的性質(zhì)和色譜柱的材料而定。若為混合樣品，則兼顧每個樣品的吸收波長。 ? 超過濾 用孔徑為 l0 1010500 l010m的多孔膜過濾，可除去蛋白質(zhì)等高分子物質(zhì)。親水性物質(zhì)用硅膠吸附，而疏水性物質(zhì)可用聚苯乙烯 — 二乙烯基苯等樹脂吸附。 但如果待測組分和蛋白質(zhì)結(jié)合，大多數(shù)情況下難以用萃取操作來進(jìn)行分離。 3 樣品處理技術(shù) ? 溶劑萃取 溶劑萃取適用于待測組分為非極性物質(zhì)。它們的存在，將影響組分的分離測定，同時容易堵塞和污染色譜柱，使柱效降低，所以常需對試樣預(yù)處理。 溶劑的過濾和脫氣 流動相溶劑在使用前必須先用 濾，以除去微小顆粒，防止色譜柱堵塞； 同時要進(jìn)行脫氣處理，因?yàn)槿芙庠谌軇┲械臍怏w會 在管道、輸液泵或檢測池中以氣泡形式逸出，影響 正常操作的進(jìn)行。 ? 四氫呋喃（抗氧劑丁基甲苯酚）強(qiáng)烈吸收紫 外線，可蒸餾。 ? 氧化鋁或硅膠柱可除去溶劑中的極性化合物。 ? 重蒸餾水也可。 四、 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作 ? 水 ? 有機(jī)溶劑 ? 樣品預(yù)處理 ?1 水 ? 理想的 HPLC用水應(yīng)為 的 超純水 ，并通過 ，除去熱源、有機(jī)物、無機(jī)離子及空氣等。 ? 流動相同時還應(yīng)滿足檢測器的要求。如使固定液溶解流失、酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。 常用溶劑的極性順序 ： ? 水 (最大 ) 甲酰胺 甲醇 乙腈 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷 氯仿 溴乙烷 苯 四氯化碳 二硫化碳 環(huán)己烷 己烷 煤油 (最小 ) 流動相選擇的注意基本要求 ? 盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。 ? 采用正相液 液分配分離時：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時間太短，降低溶劑極性，反之增加。 流動相分類 ? 按流動相組成分 ： 單組分和多組分； ? 按極性分 ： 極性、弱極性、非極性； ? 按使用方式分 ： 固定組成淋洗和梯度淋洗； ? 常用溶劑 ： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、乙腈、水； ? 采用二元或多元組合溶劑作為流動相可以靈活調(diào)節(jié)流動相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時間。 ? 改變洗脫液組成和極性是改善分離的最直接的因素。 ? 固定相粒度： 降低固定相粒度可提高柱效。 先在載體表面鍵合上一種具有一般反應(yīng)性能的所謂間隔臂 (環(huán)氧、聯(lián)胺等 )，再連接上配基 (酶、抗原等 )，這種固載化的配基只能和具有親和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。 充填劑多采用：一定孔徑的多孔性聚合物。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故
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