【正文】 （3）、如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。解決辦法如下：（1）、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。色譜柱在使用中最常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正?，F(xiàn)象。（2）、正相柱的再生：依次以2030倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。色譜柱的保存 在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來所使用的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。（2）、流動相：流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。 對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。（V/V），乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。 　　 6．壓力升高是需要更換預柱的信號因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。 　　 4．流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理 　　 2．大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－，盡量不超過該色譜柱的pH范圍 　　 色譜柱的維護 　　 **如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)。 在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。 　　 注意： 　　用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時間來平衡） 　　如何平衡色譜柱？ 　　硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析樣品之前，應使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水過渡。 　反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。 6．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端 4．將子彈頭預柱放入卡套片內(nèi) 2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯（見下圖） 卡套柱的安裝（加預柱）不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時候都不能將卡套取下來，否則會造成填料的流失。 　　*參考(標準JB522691)液相色譜儀測試用標準色譜柱。 　　記錄并計算測試結(jié)果。 　　使用出廠測試時使用的流動相組成及測試樣品。 　　　　　　　　　　b、UV檢測器波長設定為254nm。 　　啟動液相色譜儀：a、流動相流速設定為1ml／min。 　　c．含水流動相最奸在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。用水最好使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。 　　注意：可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。 流動相流速的選擇：除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。 　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點： 樣品的前處理：但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。二、液相色譜柱的使用：如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手繼續(xù)順時針擰1／4圈，直至不漏液為止。在接管時一定要設法降低柱外死體積。、。 　　c、 b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。 　　a、拆開柱包裝盒，確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。 　　反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10 　　b、柱填料：但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。 　　在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應嚴格控制在2．5mm長或其他固定尺寸)。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸()的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。 　　柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化)。 　　a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。 　　檢定周期：2年液相色譜柱使用及保養(yǎng)液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。 　　檢定原理：依據(jù)JJG7001999《氣相色譜儀計量檢定規(guī)程》。 　　主要檢定項目：載氣流速穩(wěn)定性、柱箱溫度穩(wěn)定性、基線噪聲、基線漂移、靈敏度、檢測限。氣相色譜儀由氣源、氣路控制系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、電氣系統(tǒng)、記錄及處理系統(tǒng)組成。 　　氣相色譜儀是根據(jù)試樣中各組分在氣固或氣液兩相間的吸附或分配系數(shù)的不同隨載氣移動而進行分離的儀器。 　　檢定周期：兩年 　　檢定原理：依據(jù)JJG70590《實驗室液相色譜儀計量檢定規(guī)程》。單位AU是一個紫外吸收的單位，一般它與單位MV是相對應的，如果儀器色譜圖上顯示的單位是MV，可以通過查找儀器說明書找到換算關(guān)系。若儀器的進樣筏小于20ΜL應把測得的峰高換算成20ΜL時的峰高（20ΜL/進樣筏容量*所測峰高）。因而，原來規(guī)程所規(guī)定的檢測方法已不在適用。 　　關(guān)于最小檢測濃度的檢定，規(guī)程規(guī)定“在靜態(tài)條件下，用注射器注入標準物質(zhì)”然后用最小檢測限公式計算，得出結(jié)論（所謂靜態(tài)條件，即在不開泵的情況下，把樣品直接注入樣品池）。 　　定性、定量重復性 　　泵流量設定值誤差SS、流量穩(wěn)定性誤差SR圖3是典型的液相色譜儀組成方框圖。 　　液相色譜儀 　　E) 分布不均衡 　　D) 標準物質(zhì)是主要的計量裝置 　　色譜儀的內(nèi)部電路非常復雜，而且零部件的更換必須使用相應廠家生產(chǎn)的配套產(chǎn)品，因而維修比較困難。 　　色譜儀在運行前，需要更換色譜柱、流動相，啟動泵和檢測器，并對衰減、流速、紙速等進行設置，所以操作比較復雜。色譜儀在運行前首先要進行12小時的預熱，否則儀器的基線難以穩(wěn)定。 　　A) 檢定時間長色譜儀器檢定標準②樣品溶劑比流動相的UV吸收值低。1在U V色譜圖中，靠近死時間處出現(xiàn)負峰。 ②檢查所用的色譜條件是否合適。 柱中固定相流失所致。1柱使用一段時間后保留值逐漸縮短。 強溶劑將弱溶劑洗不出的雜質(zhì)沖出來。1流動相洗滌強度由弱漸強時出現(xiàn)很多雜質(zhì)峰。 柱床層出現(xiàn)干裂。 1長時間放置的色譜柱，出現(xiàn)雙峰。 可用乙腈／水體系使柱壓降低，分離效率更好。micro。②實驗結(jié)束后先用純水后用MeOH各沖洗2030ml后關(guān)機。 霉菌生長所致。1使用緩沖液作流動相時，柱壓降升高很快。②樣品的濃度不宜太大。 柱入口床層被污染。1柱使用—段時間后，柱效下降，出現(xiàn)峰拖尾。 柱入口床層被污染使柱填料變質(zhì)。1[b]柱使用一段時間后，柱效下降出現(xiàn)雙峰。 如柱床層塌陷，用相同型號填料填補。 ①柱填料被流動相溶解而流失。使用—段時間后，柱效下降，分離不好。 ②推薦使用流動相溶解樣品。micro。②樣品在流動相中析出微小結(jié)晶。m過濾膜過濾流動相除去微小顆粒物。 更換或清洗柱入口濾片；用0．45amp。 ②配好流動相后一定要進行脫氣處理。② 流動相脫氣不徹底特別是MeOH／H20體系由于氫鍵作用很容易出現(xiàn)氣泡。 繼續(xù)開泵，用流動相將柱內(nèi)氣體置換掉。 用扳手順時針方向擰緊1／4圈直到不漏液為止。 刮除被污染的床層，用同型的填料填補柱效可部分恢復。 入門填料被污染變質(zhì)所致。舊色譜柱柱效低分離不好，有時出現(xiàn)雙峰。 用同型填料填補柱效可部分恢復。 更換連接管，重新連接色譜柱，降低死體積。新柱柱效低 m濾膜除去微量雜質(zhì)。樣品及流動相使用0．45amp。 色譜柱入U濾片被流動相或樣品中顆粒堵住。, a和tr的確定 2. Wash column 沖洗柱子3. Test new column note lot number 試驗新柱 記錄一批數(shù)據(jù)4. Review column equilibration procedures 觀察柱平衡過程5. Make up fresh mobile phase4 and test 配制新鮮流動相再試驗6. Check instrument performance 檢查儀器性能 Change in Retention/Selectivity Columnto Column柱與柱之間保留時間/選擇性的改變Different column histories (aging) 不同的柱歷史(老化)Insufficient/inconsistent equilibration平衡不夠 /不一致Poor column/mobile phase bination 柱/流動相差Change in mobile phase流動相改變Change in flow rate 流速改變Other instrument issues其他儀器問題Slight changes in column bed volume (tr only) 柱內(nèi)體積輕微改變LottoLot Selectivity Change (pH) 批與批之間選擇性改變(pH)pH Lot 1 pH Lot 1pH Lot 2 pH Lot 2pH shows selectivity change from lottolot for basic pounds pH 顯示批與批之間對堿性化合物的選擇性改變pH shows no selectivity change from lottolot, indicating silanol sensitivity at pH pH ,表明在pH Conclusions 結(jié)論HPLC column problem are evident as: 高效液相色譜柱問題明顯的為:High pressure 高壓Undesirable peak shape 不希望得到的峰形Changes in retention/selectivity 保留時間/選擇性的改變 Often these problems are not associated with the column and may be caused by instrument and experimental condition issues.經(jīng)常遇到的這些問題不一定與柱有關(guān),而與儀器和實驗條件方面的問題有關(guān)色譜常見故障及排除方