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高效液相色譜儀ppt課件(更新版)

2025-06-13 07:32上一頁面

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【正文】 C應用 1. 分析方法如何建立? 色譜柱和檢測器的選擇 根據被分離物質性質選擇;參考文獻類似物質 疏水性的樣品 ——反相鍵合色譜 ; 親水性的樣品 ——正相鍵合色譜; 流動相組成 ,配比 ,流量 ,梯度洗脫的選擇 根據分析樣品的結構、性質,并查閱相關文獻確定流動相組成。 ? 對 儀器 :溶劑和樣品中的細小顆粒會增加進樣閥的堵塞和磨損,同時也會增加泵頭內的藍寶石活塞桿和活塞的磨損。 ? 流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。 常用溶劑 : 正己烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、異丙醇、乙腈、水。 特點 :通用型檢測器,對各物質有幾乎相同的響應。 許多藥物和生命活性物質 (多環(huán)芳烴,維生素 B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等 )具有天然熒光,能直接檢測。 光電二極管檢測器( PDA) 缺點 :只能檢測有紫外吸收的物質。 作用不同 :預柱則只能起到過濾顆粒物作用,防止顆粒物堵塞色譜柱篩板引起柱壓升高。 C18較 C8極性小, C18更適合分析中等到小極性的化合物, C8更適合中等偏大極性 化合物。 將樣品環(huán)裝滿后進樣,進樣量即為樣品環(huán)的容積,此種進樣方式稱為“滿環(huán)進樣”或“定量環(huán)進樣”。 氣動放大泵 往復柱塞泵 (2) 進樣裝置 手動進樣閥通常使用耐高壓的六通閥 (美國 Rheodyne 公司專利技術 ), 其結構如圖所示: 進樣裝置 (正面) 進樣裝置 (背面) 圖中 a為進樣閥處于“裝樣 load”位置的情況,此時流動相直接進入色譜柱, 樣品注入口與樣品環(huán)連接,用微量進樣針將一定體積的樣品溶液從樣品 注入口注入,裝于樣品管內。高 效 液 相 色 譜 2022/8/21 一、高效液相色譜儀 Agilent 1100 Waters 2487 借助氣相色譜的理論演變 二、高效液相色譜法的特點 經典的柱色譜 高效液相色譜的模塊 20世紀 70年代后發(fā)展迅速,它在技術上采用 高壓泵 , 高效固定相 和 高靈敏度的檢測器 , 實現(xiàn)了 分析速度快 , 分離效率高 和 操作自動化 。 往復泵的優(yōu)點是泵頭內腔體積小,容易洗凈,故更換 溶劑十分方便,尤其適合做色譜條件試驗時使用。 作用:用來貯液,也用來測量樣品溶液的體積。 C8是修飾的帶 8個碳原子的硅烷, C18是修飾的帶 18個碳原子的硅烷。 正相柱和反相柱 預柱和保護柱 從泵來的流動相 預柱 進樣口 保護柱 分析柱 檢 測 器 預柱是針對流動相來保護色譜柱 保護柱是針對樣品來保護色譜柱 precolumn——預柱 , guard column——保護柱 安裝位置不同: 預柱是泵后進樣口前,途經流動相;保護柱是進樣口后分析柱前,途經樣品和流動相。 線性范圍寬, 對流速和溫度波動不靈敏, 適用于梯度洗脫。 b. 示差折光 檢測器 (RID) 原理 : 利用某些溶質在紫外光激發(fā)后能發(fā)射可見光 (熒光 ) 的性質進行檢測。 d. 蒸發(fā)光散射檢測器 (evaporative lightscatting detector, ELSD) 適用范圍 : 適用檢測揮發(fā)性低于流動相的組分 ,主要用于檢測糖類,高級脂肪酸,磷脂, 維生素,氨基酸,甘油三酯及甾體等。 2. 流動相類別 按流動相組成成分 :單組分和多組分; 按極性分 :極性、弱極性、非極性; 按使用方式分 :固定組成淋洗和梯度淋洗。 如使固定液溶解流失;酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。 ? 對 色譜柱 :由于填料顆粒很細,色譜柱內腔很小, 溶劑和樣品中的細小顆粒會使色譜柱和毛細管容易堵塞。 ? 超聲脫氣法:流動相放在超聲波容器中,用超聲波振蕩1015min。 在目前已知的有機化合物中,若事先不進行化學改性, 只有 20%的化合物用氣相色譜法可以得到較好的分離, 而 80%的有機化合物需 HPLC分析。 ( 3) 使用定量環(huán)的定量:六通閥進樣器的進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。 切忌直接用甲醇置換緩沖液 2. 色譜柱的維護與保養(yǎng) 硅膠柱或極性色譜柱在經過出廠測試后是保存在 正庚烷 中的。
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