超薄切片技術(shù)ppt課件(2)(參考版)
2025-05-07 13:17本頁(yè)面
【正文】 方法： 1％的 KMnO4室溫下染色 10min 生物電子顯微技術(shù) 染色的方法 : : 鉛鹽單染 ,鈾鹽單染 鉛鹽比鈾鹽好 ,注意 CO2的干擾 : ① 醋酸雙氧鈾前染 20～ 30min ② 漂洗掉多余染液 ③ 檸檬酸鉛后染， 15min 生物電子顯微技術(shù) 返回 生物電子顯微技術(shù) 返回 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 思考題 : 超薄切片 半薄切片 脫水 固定 緩沖液 電子染色 包埋 2. 簡(jiǎn)述普通超薄切片樣品制備技術(shù)的基本過(guò)程 . 3. 超薄切片機(jī)的基本構(gòu)造及其工作原理。 2) 原理： 結(jié)合重金屬多的區(qū)域， △ ?t大 → 電子散射 能力強(qiáng) → 電子密度大 → 圖像深暗 反之 ….. 生物電子顯微技術(shù) 常用染色劑 (Pb,U鹽） 1)鈾鹽 ：醋酸鈾（醋酸雙氧鈾） UO2(CH2COO)22H2O 特點(diǎn) : ，可以提高核 酸、蛋白質(zhì)和結(jié)締組織的反差，對(duì)膜的染色差 ，發(fā)射熒光，有毒，見光分解 配方及染色 A. 常用 1－ 5％的醋酸雙氧鈾，室溫下染色30min－ 1h； 4070℃ 用時(shí) 20－ 30min. B. 12%醋酸雙氧鈾的 50%， 70％或 95％的乙醇溶液，穿透力強(qiáng)， 20－ 30min. 生物電子顯微技術(shù) 2)鉛鹽 ： 檸檬酸鉛（枸櫞酸鉛） 特點(diǎn)： A、 密度大，對(duì)細(xì)胞各種結(jié)構(gòu)都有親和力， 尤其提高細(xì)胞膜系統(tǒng)和脂類物質(zhì)的反差， 對(duì)核糖體、糖元等著色。) 切片 厚度 分辨 率 反差 暗灰色 400197。專用制刀機(jī)制刀（ LKB7800) 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 鉆石刀 生物電子顯微技術(shù) （三） 裝水槽 1. 方法 : ⑴ 裝塑料模具水槽 ⑵ 自制膠帶水槽 2. 槽液的要求 ⑴ 不與材料發(fā)生化學(xué)反應(yīng) ⑵ 干凈無(wú)雜質(zhì) ⑶ 液面與刀口基本平行 ⑷ 低粘度 ,蒸發(fā)量小 ⑸ 有一定的表面張力 ,有利于漂浮切片 ： 雙蒸水、二甲基亞砜（ DMSO）、 甘油水溶液等 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 玻璃刀口的選擇 生物電子顯微技術(shù) 玻璃刀、載網(wǎng)、包埋塊及塑料模具水槽 生物電子顯微技術(shù) （四）修塊 ⑴ 除去組織周圍多余的包埋介質(zhì)和 不感 興趣的部分，以提供較大的有效觀察面積 ⑵ 含組織塊的區(qū)域和不含組織塊的區(qū)域硬度 不同，經(jīng)過(guò)修塊，盡可能除去組織塊外的 空白包埋介質(zhì)，使要切的部分硬度一致， 切出高質(zhì)量的切片 ⑶ 修成一定形狀、大小的包埋塊截面，便于 連續(xù)切片 生物電子顯微技術(shù) 2. 修塊的方法 ⑴ 手工修塊 ： 粗修：四棱臺(tái)型 細(xì)修：小四棱臺(tái)塔型或二層四棱臺(tái)型 （ Mesa型），頂面積 ， 四個(gè)側(cè)面要整齊、規(guī)則 ⑵ 機(jī)械修塊 ： （專用修塊機(jī)或超薄切片機(jī)） 先修頂面暴露樣品 后修四個(gè)側(cè)面 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) （五）、切片 超薄切片機(jī) (Ultramicrotome) ⑴ 按進(jìn)刀原理分為： 機(jī)械推進(jìn)式： AO型 熱膨脹式： I↗ 膨脹 ↗ 切片厚 ↗ LKB(Ⅲ ， Ⅳ ， Ⅴ ）， CQR－ 1 冷縮式 ⑵ LKB切片機(jī)構(gòu)造 ⑶ 切片的原理 加熱線圈 → 金屬臂膨脹 → 推進(jìn)樣品 → 電動(dòng)機(jī)驅(qū)動(dòng)樣品臂上下運(yùn)動(dòng) → 切削 切片操作步驟： 裝塊 → 裝刀 → 對(duì)刀 → 加水 → 切片 → 撈片 生物電子顯微技術(shù) 返回 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 切片原則： 1）刀角、前角，切速參數(shù)的選擇原則： ⑴ 軟硬適中的包埋塊， 45刀角， 3~5前角， 2~5mm/s ⑵ 包埋塊硬 ,小刀角 ,切速小； 包埋塊軟 ,大刀角 ,切速大 ⑶ 較薄樣品 ,切速大 20mm/s 要獲得較大面積的切片，切速 1mm/s 生物電子顯微技術(shù) 2) 預(yù)先制作半薄切片的原則 : ⑴ 半薄切片的定義 ： 切片的厚度介于普通切片和超薄切片 之間的切片 ,~2181。顯微鏡下刀刃有明亮的應(yīng)力線 ④ 制刀的手段 187。中左端平直無(wú)缺損 187。 制成小方塊，對(duì)角折斷 187。） ⑥ 微孔支持膜 (微篩 )： 高分辨率用 哈氣法、甘油法、 氣壓法 生物電子顯微技術(shù) 返回
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