半薄超薄切片技術ppt課件(參考版)
2025-05-09 12:50本頁面
【正文】 ※ 幼嫩材料用 50%酒精代替 70%酒精，防止材料收縮； ※ 加入 5%甘油可防固定液蒸發(fā)和材料變硬。 C, overnight,可以停下） 80%95%100%100%） 用丙酮置換乙醇： 乙醇 :丙酮 =1:1，純丙酮 2次， 每級 2030分鐘 6）滲透 丙酮 :樹脂 =2:1， 1:1（可以停下了， overnight） ， 1:2 23h/級 純樹脂 12h， 換純樹脂 12h （從進入樹脂開始更要嚴格防潮?。? 7）包埋聚合 60176。 C保存 2）漂洗： PBS 充分漂洗 34次， 2030Min/次 3）后固定 1%鋨酸固定 in PBS， 4176。 染色方法： (1) 組織塊染色 在脫水至 70%乙醇時，將組織塊放在用70%乙醇配制的飽和醋酸鈾溶液中，染色時間 2小時以上，或在冰箱中過夜。 皮膚盡量不要接觸包埋劑，以免引起皮炎； 5 超薄切片 削去表面的包埋劑，露出組織，然后在組織的四周以和水平面成 45度的角度削去包埋劑，修成金字塔形，頂面修成梯形或長方形，每邊的長度為 ～ 。 包埋時動作要輕巧，防止產(chǎn)生氣泡； 167。 所用 器皿 應烘干； 167。 包埋操作中的注意事項 167。 ◆ 環(huán)氧樹脂 (epoxy resin) ◆ 水溶性樹脂－丙烯酸類樹脂 LR White、 Lowicryls、 GMA、 PEG 等，適于進行組織化學和細胞化學研究的樣品制備。 包埋、聚合 包埋操作： 將組織塊包埋在多孔橡膠包埋模板中或膠囊中，一定條件下可聚合硬化，形成包埋塊。 4 滲透和包埋、聚合 滲透就是利用 包埋劑 滲入到組織內(nèi)部取代 脫水劑 的過程。長時間暴露空氣中會在組織內(nèi)外產(chǎn)生微小氣泡，影響滲透； ? 脫水過程中應在 70%脫水劑中 4℃ 停留或過夜 ,過度脫水不僅引起更多物質(zhì)的抽提，而且會使樣品發(fā)脆，造成切片困難 。（ 30% →50%→70%→80%→95%→100%→100% ） 。 ? 方法 用一種和水及包埋劑均能相混溶的液體來取代水 ,常用的脫水劑是乙醇 和 丙酮 。 (4)高錳酸鉀 ※ 強氧化劑，較好固定 脂蛋白 。 ▼ 缺點 :不能 保存脂肪，磷脂固定效果差，對細胞膜的顯示較差，沒有電子染色作用。
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