半薄超薄切片技術(shù)ppt課件-閱讀頁
2025-05-21 12:50本頁面
【正文】 染 :細(xì)胞核及結(jié)締組織染色 鉛染 :提高細(xì)胞質(zhì)成分的反差 1）前固定 （ 固定液體積是固定材料的十倍以上，材料不堆積 ） 3%戊二醛 in PBS ,，室溫 56h，后 4176。 C overnight 4）漂洗： PBS 充分漂洗 34次， 2030Min/次 5）系列脫水 ： 30%50%70%（ 4176。 C 24hr 注意：免疫電鏡時(shí)不用鋨酸固定，樹脂換成 LRWhite等水溶性樹脂，固定液可以是 %戊二醛 +%多聚甲醛 in PBS Ph 超薄切片圖片 二、半薄切片技術(shù)介紹 半薄切片主要步驟 ★ 取材 ★ 固定 ★ 漂洗、脫水 ★ 滲透、包埋 ★ 半薄切片 ★ 半薄切片染色 每一步都是關(guān)鍵 ,任何 環(huán)節(jié)的疏忽 都會(huì)導(dǎo)致制片的 失敗 FAA固定液 （福爾馬林 5冰醋酸 570%酒精 90）半薄 /石蠟切片 ※ 一般固定根、莖、葉、花藥、子房組織切片。 卡諾固定液 1 2 純酒精 15ml 30ml 氯仿 5ml 冰醋酸 5ml 1ml 滲透迅速，固定根尖和花藥只需 3060分鐘，但固定時(shí)間不能太久，一般不超過一天 切片厚度： ~5um 切片撈到 載玻片 上 半薄切片 ▲ 半薄切片染色 染色方法 現(xiàn) 象 番紅－固綠對(duì)染法 木質(zhì)化的細(xì)胞壁及細(xì)胞核－ 紅 纖維素的細(xì)胞壁及細(xì)胞壁－ 綠 鐵礬蘇木精法 細(xì)胞一般結(jié)構(gòu)及細(xì)胞分裂時(shí)期的優(yōu)良染劑，細(xì)胞分裂時(shí)期的染色體染成 黑色 高碘酸－席夫反應(yīng)法 （ PAS法） 植物組織染成不同程度的紅色，可將纖維素細(xì)胞壁及淀粉粒染成 紅色 染料介紹 細(xì)胞壁的染料 酸性品紅 番紅 固綠 甲苯胺藍(lán) 蘇木精 結(jié)晶紫 亮綠 蘇丹 IV 細(xì)胞核染料（堿性） 堿性品紅 蘇木精 洋紅 番紅 地衣紅 結(jié)晶紫 細(xì)胞質(zhì)染料（酸性） 酸性品紅 甲苯胺藍(lán) 曙紅 固綠 苦味酸 各種熒光染料 染色原則：先用堿性染料染再用酸性染料染 半薄切片：免疫熒光 （ LRWhite包埋） 半薄切片圖片 三、刀具介紹 玻璃刀 鉆石刀 超薄切片機(jī) 型號(hào)： LEICA ULTRACUT R 謝謝！
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