透射電鏡樣本的制備(參考版)
2025-05-03 12:10本頁面
【正文】 在漂浮期間，樣品和染色液被吸附在銅網(wǎng)的支持膜上，漂浮時間與懸滴法相近。但操作較麻煩，溶液混合時易產(chǎn)生沉淀，并且需要耗費較多的樣品和染色液，尤其容易造成病毒擴散，故此法不常用。 ? 噴霧法： 將染色液和懸液樣品等量混合，用特制的噴霧器噴到有膜的銅網(wǎng)上，待干后可用于電鏡觀察。 負(fù)染染色方法 ? 懸滴法：懸滴法 用一根細(xì)滴吸管吸一滴樣品懸液滴在有膜的銅網(wǎng)上，滴樣時要防止銅網(wǎng)被液體吸到管上來或翻轉(zhuǎn)而被污染。不要求樣品懸液的純度很高，但雜質(zhì)過多，如大量的細(xì)胞碎片，培養(yǎng)基殘渣，糖類及各種鹽類結(jié)晶的存在會干擾染色反應(yīng)和電鏡的觀察。磷鎢酸、磷鎢酸鈉、磷鎢酸鉀溶液通常用雙蒸水或磷酸緩沖液配制成 1％～ 3％的溶液，使用時應(yīng)用 1 mol／ L氫氧化鈉溶液將負(fù)染色液的 pH值調(diào)至 ～。 ? 分子小，容易滲入不規(guī)則表的凹陷處 ? 與樣品不起化學(xué)反應(yīng)。 ? 熔點高，在電子束的轟擊下不會升華 ? 溶解度大，不易析出沉淀。兩者之間的反差正好相反，故稱為負(fù)染色 負(fù)染 ? 簡單快速 ? 可顯示生物大分子、細(xì)菌、分離的細(xì)胞器以及蛋白晶體等樣品的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小及表面結(jié)構(gòu)的特征。而背景因未被染色而呈光亮，這種染色稱為正染色。 Hall在病毒研究中用磷鎢酸染色后，發(fā)現(xiàn)圖像的背景很暗，而病毒象一個亮晶的 空洞 被清楚地顯示出來。 ? 切片染色 ： 負(fù)染 ? 陰性染色，是相對于普通染色（稱正染色）而言。 100%丙酮： Epon812=1:1 1h 100%丙酮： Epon812=1:2 1h 純 Epon812 24h ? 浸透 ： Epon812包埋劑 35℃ 過夜 Epon812包埋劑 45℃ 24h Epon812包埋劑 60℃ 24h ? 包埋 ： 5%醋酸鈾 30min1h。 1%鋨 酸 2h 磷酸緩沖液漂洗 3次 ， 每次 15min。 超薄切片制樣程序 23%戊二醛固定液中 4℃ ， 2小時或更長時間 。 30min左右 與 CO2接觸會形成不溶性碳酸鉛沉
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