透射電鏡樣本的制備(已修改)
2025-05-12 12:10 本頁面
【正文】 透射電鏡樣本的制備 ?超薄切片制樣 ?負(fù)染 超薄切片 ? 由于電子的穿透能力弱，一般的組織細(xì)胞的切片，無法在電鏡下獲得清晰的圖像。阻礙了電子顯微鏡的發(fā)展。 ? 1957年，英國 Huxley發(fā)明超薄切片機。 超薄切片制片過程 取材 固定 脫水 浸透 包埋 切片 染色 取材 快 迅速放入固定液中 小 1mm3 冷 低溫操作 準(zhǔn) 取材部位準(zhǔn)確避免機械損傷 凈 少帶血液及組織液 取材具體方法 ? 將動物麻醉或急性處死，暴露的所需臟器。 ? 用鋒利剪刀剪下一小塊組織，放到滴有預(yù)冷固定液的蠟片上。 ? 將組織切成細(xì)長條，再將其切成小塊（ 1mm3）。 ? 將小塊移至裝有預(yù)冷固定液的清潔小瓶內(nèi)。 ? 若組織塊帶有血液而使小瓶內(nèi)固定液渾濁，應(yīng)更換新鮮固定液，然后置于 4℃ 冰箱內(nèi)固定。 固定 ? 目的：盡可能完整保存細(xì)胞在活體狀態(tài)時的超微結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)，避免自身酶的分解而出現(xiàn)自溶，或因外界微生物的侵入繁殖而產(chǎn)生腐敗，致使細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)遭受破壞。同時使細(xì)胞內(nèi)的各種成分固定下來，避免在以后的沖洗和脫水時溶解和流失。 固定方法 ? 化學(xué)固定：浸泡固定，原位固定，灌注固定 ? 物理固定：冷凍固定，微波固定，臨界點干燥固定 灌注固定 ? 通過血液循環(huán)的途徑將醛類固定液灌流到所要男友定的組織中，待組織適度硬化后，切取所需組織。此法固定迅速而均勻，可同時保存酶的活性和組織超微結(jié)構(gòu)。 ? 適用于取材柔軟組織或難以浸透、死后變化快的組織和器官，如對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、視網(wǎng)膜和腎臟等組織的固定。 理想固定劑 能迅速均勻的滲透到組織結(jié)構(gòu)內(nèi) 穩(wěn)定細(xì)胞各種結(jié)構(gòu)成分，不致溶解和丟失 對細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)沒有損傷，保證電鏡圖像的真實性 能供細(xì)胞化學(xué)測定并能增強圖像反差 能保留細(xì)胞的抗原性，一定的酶活性 常用固定劑 ?優(yōu)：滲透能力強，組織塊可長期保存，能固定核酸，安全。
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