實(shí)驗(yàn)52高效毛細(xì)管電泳電導(dǎo)檢測法分離檢測水中陰離子(參考版)
2025-04-16 23:28本頁面
【正文】 謝 謝 ！ 。 明確本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。 學(xué)習(xí)和了解高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍。 了解毛細(xì)管電泳中的參數(shù)及其關(guān)系式。 注意事項(xiàng) 預(yù)習(xí)要求 學(xué)習(xí)高效毛細(xì)管電泳的基本理論和基本知識。 ● 檢測池和進(jìn)樣瓶在使用前和使用后須在超聲波清洗器中超聲清洗5min， 并用超純水沖洗干凈 。 ● 毛細(xì)管管中以及毛細(xì)管端口應(yīng)避免引入空氣泡 。 ● 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí) ， 須先配制較高濃度的溶液 ， 再稀釋至所需濃度 。 實(shí)驗(yàn)用的EDTA為乙二胺四乙酸 ， 而非其鈉鹽 。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 本實(shí)驗(yàn)采用四乙烯五胺作為毛細(xì)管電泳的電滲流抑制劑，以 10mmol/L Tris（三羥甲基氨基甲烷）+10mmol/L H3BO3（硼酸） + + %（ V/V) 四乙烯五胺為電泳運(yùn)行液，分離電壓： － 15kV，電導(dǎo)檢測，對飲用水中的 Cl、 NO SO42三種陰離子進(jìn)行了直接分離測定 。 ● 熟悉高效毛細(xì)管電泳法分析的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法。毛細(xì)管內(nèi)徑一般為 10～ 100μm，其截面結(jié)構(gòu)圖標(biāo)意圖如圖 。 ? 毛細(xì)管數(shù)據(jù)工作站 （ 1） 0～ 30 kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源； （ 2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出； （ 3）電場強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)； （ 4）電壓穩(wěn)定性： %； （ 5）電源極性易轉(zhuǎn)換 ； （ 1）材料：石英：各項(xiàng)性能好；玻璃：光學(xué)、機(jī)械性能差； （ 2）規(guī)格：內(nèi)徑 20～ 75μ m，外徑 350～ 400μ m；長度 =1m 毛細(xì)管是 CE分離的心臟。 靈敏度高，要求有電活性。 3. 不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同(ν =μ E)，淌度大的離子區(qū)帶電場強(qiáng)度?。? 沿出口到進(jìn)口，將不同區(qū)帶依次排序 4? ? ? ?電場強(qiáng)度依次增大。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽極前進(jìn)，逐漸形成各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。 4. 毛細(xì)管等電聚焦（ CIEF） 5. 毛細(xì)管等速電泳（ CITP） 1. 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子 (充滿毛細(xì)管 )和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，并以同一速度移動。 中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時(shí)間長； 可用來分離中性物質(zhì)，擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍； 1. 根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)； 2. 毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點(diǎn)范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（ 6～ 8V）時(shí)，管內(nèi)將建立一個(gè)由陽極到陰極逐步升高的 pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液 pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負(fù)電荷。 3. 膠束電動毛細(xì)管色譜（ MECC ， MEKC） 緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。 無膠篩分技術(shù) ： 采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。 蛋白質(zhì)、 DNA等的電荷 /質(zhì)量比與分子大小無關(guān)， CZE模式很難分離，采用 CGE能獲得良好分離， DAN排序的重要手段。 其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。 正離子 ：兩種效應(yīng)的運(yùn)動方向一致，在負(fù)極最先流出； 中性粒子 ：無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出； 陰離子 ：兩種效應(yīng)的運(yùn)動方向相反； ν 電滲流 ν 電泳 時(shí) ,陰離子在負(fù)極最后流出 ,在這種情況下 ,不但可以按類分離 ,同種類離子由于 差速遷移 被相互分離。 5. 注射器進(jìn)樣方式 采用特殊裝置，通過注射器使樣品組分進(jìn)入毛細(xì)管中。 3. 擴(kuò)散進(jìn)樣方式 樣品中的組分通過擴(kuò)散作用進(jìn)入毛細(xì)管中。 tL ctrVefeo2π)mm ??（進(jìn)樣量 特點(diǎn)： 進(jìn)樣不均 ：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度大的進(jìn)樣量大； 離子丟失 ：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進(jìn)不去； 特別適合黏度大的試樣。分離度可按譜圖直接由下式計(jì)算： 1212 )(2WWttR???圖 1323 吸附等溫線的類型 圖 吸附等溫線的類型 電泳過程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計(jì)算： 22π EcΛLrIVQbm????m— 電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo)； I—
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