【正文】 ? 離子交換的有：季銨鹽、氨基、二氨基、苯磺酸基、羧基等。 ? 化學(xué)鍵合硅膠，用于正相的有：氨基、腈基、二醇基等。 ? ，收集洗脫液，揮發(fā)干溶劑后備用，或直接在線分析。 ? ，使樣品經(jīng)過小柱。 ? ，轉(zhuǎn)移過多甲醇，以便樣品和固體表面發(fā)生作用。 SPE操作步驟 ? ，活化填料，使固相表面易于和被分析物發(fā)生分子間相互作用，同時(shí)除去填料中可能存在的雜質(zhì)。 ? 另一種是存在的餓生物介質(zhì)與固相親和力更強(qiáng)，用溶劑直接洗脫。 ? 兩種洗脫模式：一種是被分析物與固相之間的親和力比其與所存在的生物介質(zhì)的親和力更強(qiáng)，因而被保留。 定量分析： 采用峰高或面積定量 固相萃取技術(shù)（ solid phase extraction SPE) ? SPE的基本模式；基本原理是樣品在兩相的差異，即在固相和液相分配系數(shù)不同。 峰的定性確認(rèn) ：電泳時(shí)間和淌度的測量常常作峰的定性分析方法。 峰純度的檢驗(yàn) ：組分和雜質(zhì)光譜不同，二極管陣列可以檢測出峰的純度。二極管陣列也可以定量。 二極管陣列的功能 ? 多波長信號檢測： 二極管陣列可以在不止一個(gè)波長下檢測樣品，對于個(gè)組分最大波長不同的情況很有用。二極管陣列可以同時(shí)選擇到一次電泳分離的整個(gè)波長范圍。一個(gè)消色差透鏡把光聚集在毛細(xì)管上，接著，光束被衍射光柵色散到光電二極管陣列上。一般時(shí)間偽 .1— 。一個(gè)完整的電泳峰至少需要20個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，數(shù)據(jù)采集速率應(yīng)該是 5— 10HZ。 檢測器數(shù)據(jù)采集速率和信號響應(yīng)時(shí)間 ? 毛細(xì)管的高效使溶質(zhì)區(qū)帶很窄， 5s甚至更小的峰很常見。 ? 增大狹縫可以增加二極管受光量，提高檢測限，降低噪音；狹縫使雜散光通過管壁會損失新星檢測范圍，增大狹縫會減少分離度。理想的情況是所有光都經(jīng)過毛細(xì)管軸而不經(jīng)過管壁。分析物濃度較高時(shí)表現(xiàn)為校正曲線斜率較小。 ? 較低的紫外波長可以獲得較高的靈敏度，如多肽和糖，完全可以在 200nm 或 200nm以下檢測，需用背景吸收小的磷酸鹽或硼酸鹽緩沖溶液。 ? 靈敏度： A= ε bc ,取決于光程 b，濃度 c和吸收系數(shù) ε 。檢測區(qū)的寬度小于區(qū)帶寬度。 ? 紫外 — 可見光檢測：可以使熔融石英管可以在 200nm以上到可見光范圍內(nèi)檢測。分析只需要 nL級樣品量，但是不是痕量分析技術(shù)，它需要相對較濃的樣品組分，或是采用預(yù)濃縮方法，以提高檢測區(qū)帶濃度。電解程度取決于電流大??；PH值變化取決于緩沖溶液的緩沖容量。水溶液中電解會在正極產(chǎn)生氫離子，負(fù)極產(chǎn)生氫氧根離子。 ? 更新緩沖溶液可以提高電泳分離重現(xiàn)性。試驗(yàn)結(jié)果表明 50μ m內(nèi)徑的毛細(xì)管有 2mm的高度差可以帶來遷移時(shí)間 2— 3%誤差。 ? 電極；化學(xué)惰性的鉑電極； ? 緩沖溶液池：特制的玻璃瓶和聚四氟乙烯小離心管； ? 緩沖溶液池的液面高度控制保證毛細(xì)管分離效率和遷移時(shí)間重現(xiàn)性的重要因素。使用雙極性電極可以由軟件控制直接切換電極。 ? 高壓電源應(yīng)該可以切換極性，正常毛細(xì)管電泳分離，電滲流總是從正到負(fù)，酒藥正極端進(jìn)樣，負(fù)極端檢測；但是電滲流被減弱，反轉(zhuǎn)或用了凝膠柱，則要把電極極性反轉(zhuǎn)，負(fù)極進(jìn)樣正極檢測。河南高溫系統(tǒng)采用告訴氣流或液體浴恒溫。粘度對進(jìn)樣和遷移時(shí)間影響很大。 毛細(xì)管恒溫系統(tǒng)和高壓電源 ? 溫度有效控制很重要，溫度變化 1度。也可以用強(qiáng)酸（ 1N鹽酸）和有機(jī)溶劑（甲醇、乙醇）清洗。一系列清洗過后，用緩沖溶液運(yùn)行 1— 2小時(shí)。 ? 一般用堿性溶液沖洗毛細(xì)管內(nèi)壁吸附層，使表面的硅醇去質(zhì)子化。為了恒定場強(qiáng)，增加柱長必須增加操作電壓，同時(shí)還會延長分析時(shí)間，實(shí)際上限制了毛細(xì)管的無限加長。 毛細(xì)管的理論塔板數(shù)和長度 ? 內(nèi)徑一般 25— 100微米。 ? 細(xì)內(nèi)徑的應(yīng)用有助于高電場下減少電流，降低焦耳熱，增大散熱面積，加快散熱速度，使在電泳過程中大大降低管心和管壁溫差，減少粘度和速度徑向分布差異，保持電滲流流型扁平性（柱塞流），實(shí)現(xiàn)毛細(xì)管電泳高效分離。 ? 目前有熔融石英、聚四氟乙烯（ Teflon)，玻璃等。 ? 毛細(xì)管的選擇：核心部件是毛細(xì)管電泳柱。將樣品池抬高5— 10cm，進(jìn)樣 10— 30mins即可。 高度差（虹吸）進(jìn)樣： Δ P = ρ g Δ h ? Q = ti ρ g Δ h л r 4C /8 η L ? 即進(jìn)樣量受進(jìn)樣時(shí)間、高度差、緩沖溶液的密度、毛細(xì)管內(nèi)徑、樣品濃度和緩沖溶液粘度影響。 ? 流體動(dòng)力學(xué)方式進(jìn)樣量基本不受樣品基質(zhì)影響。 ? 電遷移進(jìn)樣中存在一種歧視現(xiàn)象：電泳淌度大的組分進(jìn)樣量大，電泳淌度小的組分進(jìn)樣量少。 ? 樣品區(qū)帶長度由進(jìn)樣時(shí)間內(nèi)電泳速度和電滲速度確定： ? l inj = ti(ve + veo) ? ve = ueEi = ueVi / L ? veo = ueoEi = ueoVi / L ? Vi 為進(jìn)樣電壓， L為毛細(xì)管總長度， ue為電泳淌度， ueo為電滲淌度。 ? 進(jìn)樣時(shí)樣品組分同時(shí)受電泳和電滲作用，實(shí)際進(jìn)樣量與分析組分的表觀淌度有關(guān)。毛細(xì)管進(jìn)樣端首先置于樣品池中，并且在很短的時(shí)間內(nèi)施加進(jìn)樣電壓，使樣品通過電遷移方式進(jìn)入毛細(xì)管。 毛細(xì)管的進(jìn)技術(shù) ? 毛細(xì)管的內(nèi)徑限制了毛細(xì)管的進(jìn)樣技術(shù)，一般職能用電動(dòng)方式或流體動(dòng)力學(xué)方式進(jìn)樣。 ? 。 ? 。毛細(xì)管操作步驟 ? 毛細(xì)管操作步驟包括：進(jìn)樣、分離、檢測和數(shù)據(jù)處理 ? 。 ? CITP的溶質(zhì)濃度原理用于 CZE、 MECC和 CGE的柱前濃縮。 CITP通常是恒流操作，在每一區(qū)帶內(nèi)離子濃度與其淌度之比需保持恒定。如果一個(gè)離子擴(kuò)散到相鄰區(qū)帶，由于場強(qiáng)發(fā)生變化，速率改變，又使它回到原來區(qū)帶。在分離過程中場強(qiáng)會自動(dòng)調(diào)整，以維持該區(qū)帶的等速移動(dòng)（遷移速率 = 淌度 場強(qiáng)），淌度大的區(qū)帶場強(qiáng)較低。 ? 在 CITP中各種離子以獨(dú)立的區(qū)帶移動(dòng)，但是移動(dòng)速率相等，等于前導(dǎo)離子移動(dòng)的速度。兩個(gè)緩沖溶液稱為前導(dǎo)電解質(zhì)和尾隨電解質(zhì)，樣品加在兩個(gè)體系交界處。 毛細(xì)管等速電泳（ CITP） ? 毛細(xì)管等速電泳（ CITP）是一種界面移動(dòng)電泳技術(shù)。 ? 聚焦完成，溶質(zhì)和兩性電解質(zhì)被移動(dòng)，區(qū)帶通過檢測窗被檢測。 ? 同樣，蛋白質(zhì)由于等電點(diǎn)不同而分離。因此不同等電點(diǎn)的兩性電解質(zhì)在電場中從陽極到陰極按 pH逐漸增加的順序排列，從而形成穩(wěn)定的 pH梯度。 ? 當(dāng)在用溶質(zhì)和兩性電解質(zhì)化合液充滿的毛細(xì)管兩端加上電場時(shí)， pI＞ 兩性電解質(zhì)化合物溶液 pH值的的溶質(zhì)和兩性電解質(zhì)帶正電，向負(fù)極移動(dòng)； pI＜ 兩性電解質(zhì)化合物溶液 pH值的的溶質(zhì)和兩性電解質(zhì)帶負(fù)電，向正極移動(dòng)。 ? CIEF原理 是根據(jù)蛋白質(zhì) pI不同而進(jìn)行分離。由于毛細(xì)管的抗對流性， CIEF可以在自由溶液中進(jìn)行，也可以在凝膠中進(jìn)行。 ? 并且可以通過添加手性時(shí)機(jī)、離子對時(shí)機(jī)、漯河時(shí)機(jī)改變分離選擇性。荷電粒子在凝膠網(wǎng)絡(luò)中穿過，粒子越大，阻礙作用越大。 ? CZE中的分離主要依靠荷電離粒子荷質(zhì)比不同分離。此技術(shù)比 GC、 HPLC采用手性固定相更為方便實(shí)用。 ? 中性物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行分配，疏水性物質(zhì)與膠束作用較強(qiáng)，結(jié)合到膠束中也較穩(wěn)定，相對于疏水性弱的溶質(zhì)遷移慢，未結(jié)合的溶質(zhì)隨電滲流流出。常用的十二烷基硫酸鈉（ SDS），因其表面帶負(fù)電荷，與電滲流流動(dòng)方向相反，流向陽極。 并且與分離溶質(zhì)互相作用（膠束增溶過程）另一相是導(dǎo)電的水溶液相。 ? MECC是基于膠束增溶和電遷移過程進(jìn)行的。 ue ueo膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（ MECC） ? 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（ MECC或 MEKC）是電泳技術(shù)和色譜技術(shù)巧妙結(jié)合的分離技術(shù)。 CZE分離技術(shù)不需固體支持，不存在基質(zhì)效應(yīng)，能夠分離淌度差別很小的的組分。 毛細(xì)管區(qū)帶電泳（ CZE）或自由溶液毛細(xì)管電泳（ FSEC） ?