毛細管電泳課件(2)(參考版)
2025-05-04 02:52本頁面
【正文】 第五節(jié) 毛細管電泳的應用與進展 陰離子分析 陰離子電泳方向和電滲流方向相反、速度接近，分析時間長、效率低； 質(zhì)量小、電荷密度大的離子如： SO4 Cl、 F等，電泳速率大于電滲流，陽極端流出，在陰極端無法檢測； 加入電滲流改性劑，十六烷基三甲基溴化胺等，使電泳方向和電滲流方向一致，可在 min內(nèi)分離 36種陰離子；陰極進樣，陽極檢測； 離子價態(tài)及存在形態(tài)分析； 二、藥物分析 檢測體液或細胞中某些代謝產(chǎn)物的分析； 尿液中的氨基酸含量作為臨床診斷糖尿病的輔助手段； 采用毛細管區(qū)帶電泳方式，在 11 min內(nèi)分離 17種藥物； 采用 MEKC模式，鑒定違禁藥物；效果優(yōu)于 HPLC法 三、手性化合物分析 合成獲得單一手性化合物相當困難； 528種手性合成藥物， 61種以單一對映體形式銷售，其他為外消旋體；檢測分析也相當困難，研究熱點； R反應停是安眠藥， S式致胎兒畸形； CE分離分析手性化合物的方法：加入手性選擇劑； 形成配合物的穩(wěn)定常數(shù)有差異，結(jié)合 CE的高效率； 常用手性選擇劑：環(huán)糊精及其衍生物；手性冠醚；手性表面活性劑（氨基酸衍生物、膽酸鈉、?；敲撗跄懰峒捌溻c鹽、低聚糖等天然手性表面活性劑） 四、氨基酸與蛋白質(zhì)分析 采用 MEKC模式，在 25 min內(nèi)分離了 23種丹酰化氨基酸； HPCE可取代傳統(tǒng)的氨基酸分析儀； 問題：吸附和檢測； 蛋白質(zhì)分析 五、核酸分析及 DNA排序 酶解的雙螺旋 DNA限制性片段的分離； 六、新進展 整體化學分析系統(tǒng)（ TAS）及 TAS微型化 在硅片上光刻出矩形槽作為毛細管 ， 理論塔板數(shù) 105/m； ： CEMS； 應用于人類基因 DNA測序； 5～ 10萬個基因， 30億個堿基對，目前最有效的 DNA序列分析儀， 10小時 /次；可同時電泳24個樣品；速度 1200堿基對 /小時，提高速度！ 100支毛細管陣列電泳；速度 280堿基對 /小時 /支 。假設“ 2” 號中離子擴散到“ 3” 號，該區(qū)電場強度大，離子被加速，返回到“ 2” 區(qū)；當“ 2” 號中離子跑到“ 1” 號區(qū)，離子被減速使之歸隊； 4. 特點：界面明顯，富集、濃縮作用。 五、毛細管等速電泳 Capillary isotachophoresis， CITP 3. 不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強度不同 (ν=μE )，淌度大的離子區(qū)帶電場強度小。所有試樣都按前導離子的速度等速向陽極前進，逐漸形成各自獨立的區(qū)帶而分離。 1. 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導離子 (充滿毛細管 )和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，并以同一速度移動。 （水相）間分配，疏水性強的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時間長； ，擴展了高效毛細管電泳的應用范圍； ； （合成的具有不同等電點范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當施加直流電壓（ 6～ kV）時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升高的 pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液 pH有關，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負電荷。 三、 膠束電動毛細管色譜（ MECC， MEKC） Micellar electrokiic capillary chromatography, MEKC 在電場力的作用下，膠束在柱中移動。 無膠篩分技術 ： 采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺，柱便宜、易制備。 蛋白質(zhì)、 DNA等的電荷 /質(zhì)量比與分子大小無關， CZE模式很難分離，采用 CGE能獲得良好分離， DNA排序的重要手段。
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1