毛細(xì)管電泳法ppt課件(參考版)
2025-05-04 03:29本頁(yè)面
【正文】 毛細(xì)管電色譜 整合了毛細(xì)管電泳與微徑液相色譜的優(yōu)點(diǎn)，大大提高了樣品的分離能力， 代表了分析學(xué)界高效微分離的趨勢(shì)，尤其適用于復(fù)雜生物及化學(xué)體系的研究 樣品在毛細(xì)管柱中的保留行為同時(shí)受到 電泳 及其在流動(dòng)相與固定相之間 分配系數(shù) 的影響 pCEC對(duì)被分離樣品細(xì)微之處的分辯能力得到極大的提高 毛細(xì)管電泳儀 ? 電壓： 0～ 30kV； ? 分離柱不涂敷任何固定液； ? 紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器； （ 可檢測(cè)到： 1019～ 1021 mol/L） 儀器流程與主要部件 （ 1） 0～ 30 kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源； （ 2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出； （ 3）電場(chǎng)強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)； （ 4）電壓穩(wěn)定性： %； （ 5）電源極性易轉(zhuǎn)換； 2. 毛細(xì)管柱 （ 1）材料：石英：各項(xiàng)性能好；玻璃：光學(xué)、機(jī)械性能差； （ 2）規(guī)格：內(nèi)徑 20～ 75μ m， 外徑 350～ 400μ m； 長(zhǎng)度 =1m 化學(xué)惰性，機(jī)械穩(wěn)定性好； 4. 檢測(cè)器 要求：具有極高靈敏度，可柱端檢測(cè)； 檢測(cè)器、數(shù)據(jù)采集與計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理一體化； 類型 檢測(cè)限 /mol 特點(diǎn) 紫外 可見 1013～ 1015 加二極管陣列，光譜信息 熒光 1015～ 1017 靈敏度高，樣品需衍生 激光誘導(dǎo)熒光 1018～ 1020 靈敏度極高，樣品需衍生 電導(dǎo) 1018～ 1019 離子靈敏，需專用的裝置； 毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣方式 1. 流體力學(xué)進(jìn)樣方式 （ 1）進(jìn)樣端加壓 （ 2）出口端抽真空 （ 3）虹吸進(jìn)樣 進(jìn)樣量：毛細(xì)管長(zhǎng)度的 1%2%；納升級(jí)、非常小 毛細(xì)管一端插入樣品瓶，加電壓； 2. 電動(dòng)進(jìn)樣方式 進(jìn)樣不均 ：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度大的進(jìn)樣量大； 離子丟失 ：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進(jìn)不去； 特別適合黏度大的試樣 ； 3. 擴(kuò)散進(jìn)樣 試樣通過擴(kuò)散作用進(jìn)入分離柱端口處。 無(wú)膠篩分技術(shù) ：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。 蛋白質(zhì)、 DNA等的電荷 /質(zhì)量比與分子大小無(wú)關(guān)， CZE模式很難分離，采用 CGE能獲得良好分離， DAN排序的重要手段。 其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜 2. 電泳流和電滲流的方向相反，且 u電滲流 u電泳 ，負(fù)電膠束以較慢的速度向負(fù)極移動(dòng)； ，擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍； 合。 1個(gè) pH單位 ?盡量使用酸性緩沖液，減少吸附和電滲流 4. 緩沖液的 pH 5. 添加劑 3. 緩沖液的濃度 ，其濃度達(dá)到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶電的膠束。 正離子 ：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向一致，在負(fù)極最先流出； 中性粒子 ：無(wú)電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽(yáng)離子后流出； 陰離
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