【正文】
1978年于武漢大學(xué)生物系畢業(yè),1982年1月獲得中科院遺傳所遺傳學(xué)碩士學(xué)位,1988年在美國俄亥俄大學(xué)獲分子與細(xì)胞生物學(xué)博士學(xué)位,19。曾獲得過美國Indiana大學(xué)獎(jiǎng)學(xué)金,美國糖尿病學(xué)會(huì)獎(jiǎng)學(xué)金,March of Dime基金會(huì)博士生獎(jiǎng)學(xué)金,Bayer Premier Circle獎(jiǎng),Bayer質(zhì)量管理優(yōu)秀獎(jiǎng),AMGEN年度特殊股票獎(jiǎng)以及AMGEN優(yōu)秀成就獎(jiǎng)等獎(jiǎng)勵(lì)。該藥在獲得FDA批準(zhǔn)后的兩季度已創(chuàng)收5千萬美元以上。20022003年負(fù)責(zé)EPOGEN全面質(zhì)量管理,包括FDA申報(bào)、生產(chǎn)、檢測(cè)技術(shù)更新,該藥年創(chuàng)收達(dá)40億美元;2003年以來,主管并完成了30多個(gè)不同形式的產(chǎn)品(包括小分子、重組蛋白、單克隆抗體、融合蛋白等藥物)從臨床前研究到商品化的不同發(fā)展時(shí)期的IND申報(bào)和發(fā)布。具有13年的藥物發(fā)現(xiàn)、發(fā)展、商業(yè)化、全球藥品許可報(bào)批,以及大型組織的管理經(jīng)驗(yàn)。1987年獲得南開大學(xué)生物化學(xué)專業(yè)學(xué)士學(xué)位,1994年獲得美國Indiana大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)博士學(xué)位。一種利用囊膜病毒出芽特性高效獲得動(dòng)物膜蛋白的方法五攻關(guān)張耀洲20浙江省省長基金張耀洲40浙江省科委重大項(xiàng)目張耀洲25省科委重點(diǎn)項(xiàng)目張耀洲15省科委重點(diǎn)項(xiàng)目張耀洲用蠶表達(dá)rhGMCSF生白藥物有效分子機(jī)制的研究教育部跨世紀(jì)人才基金張耀洲30用蠶表達(dá)EPO制備口服藥物研究教育部骨干教師基金張耀洲6省部級(jí)以上科技獎(jiǎng)勵(lì)一覽表序號(hào)獲獎(jiǎng)項(xiàng)目名稱等級(jí)完成的名次備注1蛋白質(zhì)雙向電泳中關(guān)鍵技術(shù)的研究浙江省高等學(xué)??蒲谐晒?jiǎng)第一名20072昆蟲桿狀病毒分子生物學(xué)研究浙江省科學(xué)技術(shù)進(jìn)步二等獎(jiǎng)第一名20063家蠶生物反應(yīng)器制備生物制品的方法國家技術(shù)發(fā)明二等獎(jiǎng)第一名20044家蠶生物反應(yīng)器高效表達(dá)的條件優(yōu)化和產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用研究浙江省政府二等獎(jiǎng)第一名20025昆蟲桿狀病毒基因研究國家教育部科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)第一名19976用蠶表達(dá)hGMCSF生產(chǎn)口服生白藥物研究浙江省政府二等獎(jiǎng)第一名19987用蠶表達(dá)丙肝抗原制藥口服藥物和檢測(cè)試劑研究國家教育部科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)第一名19998傳染性法氏囊病毒VP2的克隆及其在蠶體中的表達(dá)和疫苗功能研究浙江省政府二等獎(jiǎng)第二名2000獲得國家發(fā)明專利一覽表序號(hào)專利名稱專利號(hào)公開(公告)日專利權(quán)人(排序)發(fā)明人(排序)1用蠶表達(dá)丙肝抗原制備口服藥物的方法第一名第一名2用家蠶表達(dá)重組人血小板生成素制備藥物方法五攻關(guān)張耀洲100浙江省重大科技創(chuàng)新基地—生物醫(yī)學(xué)工程,浙江省教技發(fā)[05]1號(hào)浙江省人民政府張耀洲2000國家自然科學(xué)基金張耀洲8國家自然科學(xué)基金張耀洲14國家自然科學(xué)基金張耀洲8家蠶桿狀病毒P10基因和多角體基因互作調(diào)控30670095國家自然科學(xué)基金張耀洲8家蠶表達(dá)hGMCSF口服吸收協(xié)同蛋白因子的分子生物學(xué)Z204267浙江省基金重點(diǎn)項(xiàng)目張耀洲25用家蠶表達(dá)的生白藥物有效分子機(jī)制研究 浙江省自然科學(xué)基金張耀洲4浙江省自然科學(xué)基金張耀洲浙江省九獲得國家發(fā)明專利11項(xiàng),公開國家發(fā)明專利6項(xiàng),均為第一完成人。完成科研項(xiàng)目21項(xiàng),在研項(xiàng)目4項(xiàng),其中國家級(jí)13項(xiàng),省部級(jí)10項(xiàng)。主要從事家蠶基因組學(xué)和生物反應(yīng)器制藥平臺(tái)技術(shù)的研究?!渡锘瘜W(xué)研究與應(yīng)用》主編,中國藥學(xué)會(huì)高級(jí)會(huì)員,國家“百千萬人才工程”第一梯隊(duì)成員,國家教育部“跨世紀(jì)優(yōu)秀人才”計(jì)劃成員,國務(wù)院特殊津貼獲得者,霍英東優(yōu)秀青年教師基金獲得者,浙江省有突出貢獻(xiàn)中青年專家,浙江省中青年學(xué)術(shù)帶頭人,浙江省“151人才”工程第一梯隊(duì)成員。五、對(duì)家蠶蛹的cDNA,microRNA及其特種編輯蛋白的研究首次構(gòu)建家蠶蛹cDNA文庫,發(fā)現(xiàn)2000多條新的基因,對(duì)其中的100多條基因進(jìn)行了初步的功能研究;建立了一套新的家蠶蛋白組學(xué)研究方法――八孔道加樣和兩步法抽提法,大大提高圖譜蛋白點(diǎn)的檢出率;首次鑒定確認(rèn)46種家蠶蛹的microRNA及其表達(dá)模式,并獲得1000多條可能的microRNA調(diào)控靶基因;同時(shí)發(fā)現(xiàn)了一種全新的RNA編輯方式:A to I,揭示RNA編輯可能在進(jìn)化中行使一個(gè)雙重的角色,既產(chǎn)生蛋白表達(dá)的多樣性,又維持蛋白在進(jìn)化上的保守性。這種新的表達(dá)系統(tǒng)還可用于表達(dá)一些難表達(dá)難純化的蛋白,如膜蛋白。三、桿狀病毒出芽方式建立一個(gè)全新的膜蛋白分離技術(shù)利用桿狀病毒出芽時(shí)帶走宿主細(xì)胞膜成為病毒囊膜這一特征,發(fā)明了宿主細(xì)胞膜的分離技術(shù),獲得并鑒定了6880種家蠶蛹膜相關(guān)蛋白,確定了1883種為膜蛋白,其中333種為全新的首次報(bào)道的膜蛋白。由此研發(fā)的人用禽流感疫苗已經(jīng)完成臨床前所有研究工作,實(shí)驗(yàn)室效果顯著,可以作為一種高效,廉價(jià)的和安全的人用禽流感疫苗,具備了申報(bào)臨床研究條件。是蛋白質(zhì)藥物研究的一大突破。建立首個(gè)家蠶生物反應(yīng)器制品生物技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),并實(shí)現(xiàn)了規(guī)?;a(chǎn)。(2)首次高效表達(dá)hGMCSF細(xì)胞因子。研究方向和創(chuàng)新點(diǎn)總結(jié)以家蠶作為生物反應(yīng)器,利用分子生物學(xué)手段,構(gòu)建了系統(tǒng)的家蠶桿狀病毒高效表達(dá)藥用外源蛋白體系,建立了全方位的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化平臺(tái)。首次構(gòu)建家蠶蛹cDNA文庫,發(fā)現(xiàn)2000多條新的基因,對(duì)其中的100多條基因進(jìn)行了初步的功能研究,為闡明家蠶蛹期蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)和家蠶生長發(fā)育過程中的基因調(diào)控打下基礎(chǔ);建立了一套新的家蠶蛋白組學(xué)研究方法,該方法采用八孔道加樣方式,使得樣品蛋白質(zhì)回收率比傳統(tǒng)的水化上樣高出約20%,同時(shí)開發(fā)了一種新的家蠶卵蛋白樣品制備方法――兩步法抽提法,該方法與傳統(tǒng)的“一步提取法”相比,大大提高圖譜蛋白點(diǎn)的檢出率, 采用該方法我們獲得了迄今為止分離蠶卵樣品最多點(diǎn)的蛋白質(zhì)組圖譜,這將有利于更多生物相關(guān)蛋白的發(fā)現(xiàn)以及鑒定;首次鑒定確認(rèn)46種家蠶蛹的microRNA及其表達(dá)模式,并獲得1000多條可能的microRNA調(diào)控靶基因,為研究microRNA對(duì)家蠶生長發(fā)育中的基因調(diào)控打下基礎(chǔ),相關(guān)論文發(fā)表1個(gè)月被下載次數(shù)高達(dá)1000多次,被評(píng)為高訪問率論文。同時(shí)建立的家蠶生物反應(yīng)器多角體結(jié)晶特征表達(dá)技術(shù)平臺(tái)體系能高效真核表達(dá)和有效分離純化得到大量接近天然的重組膜蛋白,也為膜蛋白的研究提供了一個(gè)新的技術(shù)平臺(tái)。然而,由于其疏水特性和含量低,膜蛋白的分離純化是一個(gè)眾所周知的難題,也使得膜蛋白的研究陷入困境。通過該平臺(tái),我們已經(jīng)研發(fā)出人用禽流感疫苗并完成臨床前所有研究工作,實(shí)驗(yàn)室效果顯著,可以作為一種高效,廉價(jià)的和安全的人用禽流感疫苗,具備了申報(bào)臨床研究條件。一旦大規(guī)模爆發(fā)這類傳染性疾病,采用傳統(tǒng)的疫苗生產(chǎn)體系根本不可能及時(shí)生產(chǎn)出充足的疫苗來應(yīng)對(duì)突然出現(xiàn)的緊急疫情。預(yù)計(jì)明年將獲得3+5新藥證書(I類生物制品)。目前已經(jīng)高效表達(dá)60余種藥用基因蛋白。上述研究極大的推動(dòng)了家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用和基因工程生物制藥的發(fā)展,為實(shí)現(xiàn)基因工程藥物的產(chǎn)業(yè)化提供了新的思路。科學(xué)意義我們構(gòu)建的可救活家蠶桿狀病毒線性化重組病毒,使重組病毒篩選率幾乎為100%,同時(shí)表達(dá)效率提高40%,表達(dá)量極高,每kg蛹可以獲得外源蛋白或重組病毒量達(dá)到100mg,成本低,且表達(dá)產(chǎn)物和天然蛋白接近,生物活性高。結(jié)果證實(shí)了我們方法的可行性。另外,我們推測(cè),和基于歐幾里得距離的方法相比,基于相關(guān)角的序列相似性分析方法能夠更好地消除DNA序列長度的影響。(5) 基于一種2D圖形表示法的DNA序列的相似性和不相似性分析研究基于一種DNA序列的2D圖形表示法,我們進(jìn)行了敏感性分析,結(jié)果表明該表示法的高性能考慮了DNA序列小的修飾。該方法簡(jiǎn)單,方便快速。(4) 蛋白序列相似性分析研究基于所選氨基酸物理化學(xué)屬性,我們開發(fā)了一種動(dòng)態(tài)的蛋白序列2D圖形表示法。但是,磷細(xì)胞分化的其他一些元素如ASHl基因仍然能在突變型家蠶中正常表達(dá)。另外,我們同時(shí)研究磷家蠶ASH1基因,該基因被認(rèn)為在家蠶翅膀發(fā)育過程中起關(guān)鍵作用。在突變體中,Caspase3/7 蛋白的活性在化蛹后第1天達(dá)到最大,其活性是野生型的10倍多。在家蠶蛹的早期階段,程序性細(xì)胞死亡參與了家蠶娥翅膀磷的發(fā)育,在每一個(gè)階段,野生型和突變型家蠶都有很大的不同。相關(guān)研究成果發(fā)表在BMC Genomics上??偟脕碚f,基于基因內(nèi)容,基因組重排和編碼蛋白的相似性,AnpeNPV屬于Group I NPV,和HycuNPV, EppoNPV, OpMNPV與CfMNPV最相似。這些dr區(qū)AT含量高,存在于基因組的基因間區(qū),推測(cè)可能是非hr的復(fù)制起始區(qū),非hr的復(fù)制起始區(qū)在GrleGV, CpGV和AdorGV等GV中存在。另外,AnpeNPV編碼兩個(gè)conotoxinlike基因同源物ctl1和ctl2,其僅僅在HycuNPV、OpMNPV和LdMNPV中發(fā)現(xiàn)。 to 539。經(jīng)分析顯示,僅僅有6個(gè)基因存在于所有的鱗翅目NPV中,12個(gè)基因存在于所有的Group I NPV中。因此,仍然有29個(gè)保守基因存在與所有桿狀病毒中,仍然有33個(gè)保守基因存在于所有鱗翅目桿狀病毒中。我們對(duì)AnpeNPV的全基因組進(jìn)行了測(cè)定,該基因組全長126,629 bp,%,大于大部分的桿狀病毒。目前為止,還沒有柞蠶桿狀病毒AnpeNPV全基因組序列的報(bào)到。相關(guān)研究成果發(fā)表在J. Cellular 。 μM濃度下,agkistins能夠以劑量效應(yīng)有效的抑制BAECs的遷移、擴(kuò)增和生長。Agkistin的DNA序列分析表明,它有一個(gè)含有RGD序列的去整合素結(jié)構(gòu)域(12191467aa)。目前通過去整合素抑制血管生成已成為治療腫瘤的研究熱點(diǎn)之一。去整合素能夠通過其RGD三肽拮抗血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的整合素與細(xì)胞外基質(zhì)黏附,并誘發(fā)其凋亡,從而抑制血管新生血管的生長。六、其他研究(1) 蛇毒去整合素agkistins的表達(dá)及功能研究我們開展了蛇毒去整合素結(jié)構(gòu)域agkistins的表達(dá)及功能研究。此外,用熒光顯微鏡觀察dsRNA在細(xì)胞內(nèi)的定位,發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染24 h后dsRNA開始在細(xì)胞核的周圍呈不連續(xù)的聚集狀態(tài)。結(jié)果表明,在野生型病毒BmNPV感染家蠶細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,Ap2 和AH 這2個(gè)dsRNA能夠有效地抑制病毒DNA的復(fù)制,并且在轉(zhuǎn)染dsRNA后第4天抑制效果最佳,它們使病毒滴度(PFU/mL值)降低了103~104,而另外的dsRNA(Ap1)沒有明顯的抑制效果。相關(guān)研究成果發(fā)表在RNA上。我們同時(shí)闡述了一個(gè)非保守編輯位點(diǎn)的轉(zhuǎn)換模式。另外,比較分析表明,RNA編輯位點(diǎn)通常出現(xiàn)在蛋白編碼區(qū)高度保守的區(qū)域。令人驚奇的是,它們中有5個(gè)編輯位點(diǎn)在烏賊(軟體動(dòng)物)中是保守的,而且可能和其他物種中的起源無關(guān),這表明昆蟲和烏賊(軟體動(dòng)物)之間的RNA編輯在進(jìn)化上是保守的。我們分析了不同昆蟲3億多年進(jìn)化過程中Kv2 K+通道蛋白基因的A to I 編輯情況,這些昆蟲包括:Drosophila melanogaster, Culex pipiens (Diptera), Pulex irritans (Siphonaptera), Bombyx mori (Lepidoptera), Tribolium castaneum (Coleoptera), Apis mellifera (Hymenoptera), Pediculus humanus (Phthiraptera)和Myzus persicae (Homoptera)。相關(guān)研究成果發(fā)表在RNA上。我們不僅闡明了A to I RNA 編輯在進(jìn)化上可需要性的機(jī)制,同時(shí)證明怎樣預(yù)測(cè)核A to I 編輯位點(diǎn),在這些編輯位點(diǎn)中,RNA編輯發(fā)生將維持蛋白在相近物種中的保守性。進(jìn)化分析表明,DNA水平的G to A 突變可能被轉(zhuǎn)錄后修飾的A to I RNA編輯校正,編輯得到的I(G)可以以硬接線方式依次插入到基因組,導(dǎo)致A to G的突變。A to I RNA編輯作為一種遺傳基因重編碼能夠改變蛋白序列高度保守的編碼區(qū)域。相關(guān)研究成果發(fā)表在BMC Genomics上。在預(yù)測(cè)的miRNA靶基因中,有61個(gè)基因存在多個(gè)靶位點(diǎn),這61個(gè)預(yù)測(cè)的靶基因應(yīng)該作為將來功能研究的首選基因。我們通過生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)了1671個(gè)家蠶基因mRNA的3’UTR中存在的miRNA結(jié)合位點(diǎn),共發(fā)現(xiàn)547個(gè)基因存在986個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)。進(jìn)一步,我們發(fā)現(xiàn)在Northern blotting中,用來檢測(cè)miRNA的DNA探針甲基化能夠提高探針檢測(cè)的靈敏度。Northern blotting顯示某些家蠶miRNA只在家蠶某些特定的發(fā)育階段表達(dá),揭示這些miRNA可能呈發(fā)育時(shí)序特異性表達(dá)(如bmomiR277)。鑒定出的新的小RNA命名為bmomiR100like ,它是以miRNA agamiR100為探針,采用生物芯片和Northern blotting鑒定出,但是其前體序列不能折疊為miRNA前體常見的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。(3) 家蠶RNA相關(guān)研究(a)家蠶microRNA的鑒定與功能研究microRNA(miRNA)是一類能調(diào)控基因表達(dá)的小分子RNA,目前為止,在家蠶中只有l(wèi)et7 通過Northern blotting得到驗(yàn)證。這些研究為家蠶蛋白的表達(dá)和功能分析打下基礎(chǔ)。通過比對(duì)分析,上述構(gòu)建的三個(gè)蛋白庫中分別有6649, 250和868個(gè)蛋白能夠和質(zhì)譜序列進(jìn)行匹配,%, %, 和43%。家蠶基因組草圖預(yù)測(cè)得到的蛋白庫,共14,632 潛在蛋白;第二個(gè)蛋白庫為從我們構(gòu)建的家蠶蛹cDNA文庫得到的蛋白庫,共4,074個(gè)30個(gè)aa以上的潛在蛋白;第三個(gè)蛋白庫為UniProt蛋白庫中下載的家蠶蛋白,共2111個(gè)蛋白。本研究中我們通過質(zhì)譜鑒定了家蠶ORF庫和cDNA序列虛擬ORF庫。相關(guān)研究成果發(fā)表在BMC Genomics上。通過RTPCR,我們研究了