醫(yī)學(xué)第七組ppt課件(參考版)
2025-03-25 06:22本頁(yè)面
【正文】 圖中無(wú)法明顯分辨是否有其他條帶，由 1號(hào)泳道可知一抗和二抗特異性很好，因而理論上是無(wú)其它條帶的； ? 4號(hào)泳道由于被剪去而無(wú)法分析，但理論上 3號(hào)泳道由于含有 GFP會(huì)出現(xiàn)一條條帶； 4號(hào)泳道因?yàn)榇┝鞣逯缓s蛋白，即使轉(zhuǎn)膜成功，一抗不會(huì)特異結(jié)合， HRP所連的二抗也不會(huì)結(jié)合一抗，因而 DAB也就不會(huì)顯示出棕色條帶。 ? 從上圖可以看出，剪膜時(shí)出現(xiàn)差錯(cuò)，將 4號(hào)泳道剪掉，原因是 marker并非點(diǎn)在最左端，為方便標(biāo)記分子量圖中未畫出 PVDF膜左側(cè)的膜，因而剪膜時(shí)對(duì)點(diǎn)樣在 marker左側(cè)還是右側(cè)判斷失誤，當(dāng)時(shí)以為點(diǎn)樣在左側(cè)，結(jié)果將右側(cè) PVDF膜剪掉，因而錯(cuò)失了 4泳道的條帶。 50mM咪唑洗脫蛋白和穿流峰洗脫蛋白被不幸剪掉。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 170 130 95 72 55 43 34 26 17 10 M KD 從上圖可以看出， marker條帶位于最左端， marker泳道中 10KD和17KD兩條帶幾乎重合，但還是可以看出上面的藍(lán)色及下方的綠色條帶； 7號(hào)泳道 GFP條帶最深最寬，位于 2634KD左右，該結(jié)果與其約 27KD的分子量相符，其條帶又深又寬，與其經(jīng)過(guò) 300mM咪唑洗脫純化的實(shí)驗(yàn)過(guò)程相符； 6號(hào)泳道為經(jīng) 50mM咪唑洗脫，可以看出許多其他條帶及隱約的一條GFP條帶，證明有少量 GFP被洗脫； 5號(hào)泳道為雜蛋白，為層析時(shí)的穿流峰，含有許多不同分子量的條帶，但不含 GFP； 4號(hào)泳道為離心上清，由于超破后離心，上清中含有許多蛋白，包括 GFP，因而電泳結(jié)果中不僅含雜蛋白，也含 GFP； 3號(hào)泳道分別為重組大腸桿菌 GFP的本底水平表達(dá)、葡萄糖降解物阻遏效應(yīng)后的表達(dá)及誘導(dǎo)表達(dá)，因而只有 3號(hào)泳道有 GFP的出現(xiàn)，當(dāng)然， 3號(hào)泳道還有其他雜蛋白的表達(dá)，上圖中可以看出幾條隱約出現(xiàn)的細(xì)細(xì)的條帶。 ? blot:蛋白質(zhì)樣品經(jīng) SDSPAGE電泳
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