原生質(zhì)體培養(yǎng)ppt課件(參考版)
2025-03-25 06:21本頁面
【正文】 NOVA + SUCCARI SOMATIC HYBRID FRUIT 篩選商用品種 PINK MARSH GRAPEFRUIT + MURCOTT TANGOR SOMATIC HYBRID FRUIT Succari + Minneola somatic hybrid fruits taken on Oct 8, 2022 八、體細(xì)胞雜交面臨的困難 ? 融合特性的高效性 ? 雜種細(xì)胞的培養(yǎng)和選擇 ? 雜種的遺傳穩(wěn)定性控制 九、體細(xì)胞雜交研究的發(fā)展趨勢 ? 誘導(dǎo)融合及雜種細(xì)胞的各種生理、生化、遺傳機(jī)理的研究 ? 電融合的程序化控制研究 ? 各種類型原生質(zhì)體（胞質(zhì)體、核質(zhì)體、細(xì)胞器）的制備技術(shù)研究 ? 雜種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的程序化研究 小 結(jié) ? 植物體細(xì)胞雜交即原生質(zhì)體融合，是獲得胞質(zhì)雜種的理想途徑 ? 體細(xì)胞雜交在遠(yuǎn)緣育種與新物種、新資源創(chuàng)造中具有深遠(yuǎn)意義 ? 原生質(zhì)體融合技術(shù)主要有 PEG融合和電融合 ? 雜種的成功培養(yǎng)是建立在原生質(zhì)體的培養(yǎng)技術(shù)上的，選擇和鑒定是獲得細(xì)胞雜種的關(guān)鍵 ? 提高融合效率和培養(yǎng)重復(fù)性是該技術(shù)研究的重點 ? 細(xì)胞雜種是體細(xì)胞遺傳研究的良好體系 思考題 原生質(zhì)體定義 原生質(zhì)體培養(yǎng)概念意義 原生質(zhì)體分離、純化方法 原生質(zhì)體融合方法及原理 原生質(zhì)體融合的意義 植物體細(xì)胞雜交的概念和類型 體細(xì)胞雜種鑒定方法 體細(xì)胞雜種應(yīng)用 植物原生質(zhì)體培養(yǎng)的實驗流程 。 3．體細(xì)胞雜種遺傳上的不穩(wěn)定性 ? ? 體細(xì)胞雜種后代在遺傳上常常不穩(wěn)定，這可能涉及到多方面的因素，如親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近、培養(yǎng)過程中的染色體變異、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)的重組等。 2．基因轉(zhuǎn)移與性狀表達(dá) ? ? 由于染色體的部分丟失，常常使某個親本的部分或個別基因與另一親本的染色體發(fā)生整合，其結(jié)果是實現(xiàn)了親本間的基因轉(zhuǎn)移。 2形態(tài)學(xué) 比較再生植株與融合親本在形態(tài)上的異同 2細(xì)胞學(xué) 染色體形態(tài)和數(shù)目的比較 18條染色體 36條染色體 五、體細(xì)胞雜種的特點 ? ? 形態(tài)上的趨中性 ? 變異幅度大 ? 非整倍性 ? 雙親性狀的共顯性 ? 偏親現(xiàn)象 六、體細(xì)胞雜種的遺傳特性 ? 1．細(xì)胞分裂與染色體丟失 ? 如果細(xì)胞分裂而核不發(fā)生融合，在以后的發(fā)育過程中就會有兩種結(jié)果，一是細(xì)胞分裂幾次以后即停止生長從而導(dǎo)致死亡；二是在發(fā)育過程中某一親本的細(xì)胞核部分或全部丟失。 生化鑒定：同功酶鑒定。 體細(xì)胞雜種的鑒定 形態(tài)鑒定：根據(jù)雙親的形態(tài)學(xué)性狀觀察進(jìn)行鑒定。 親本 1： 異硫氰酸熒光素（ FITC）標(biāo)記 親本 2： 堿性蕊香紅熒光素標(biāo)記 在熒光顯微鏡下，親本 1為綠色，親本 2為紅色，雜種細(xì)胞可以區(qū)分 ?4） 利用生長特性篩選法： 利用原生質(zhì)體對培養(yǎng)基成分要求與反應(yīng)的差異選擇雜種細(xì)胞。 ? 如親本 1：葉綠體缺陷型 親本 2：光致死型 兩親本在光照下一種死亡，另一種呈白 色，融合細(xì)胞長成植株呈綠色，并能成長 ?2） 抗性互補(bǔ)篩選法： 利用親本細(xì)胞原生質(zhì)體對抗生素、除草劑及其它有毒物質(zhì)抗性差異選擇雜種細(xì)胞。 ? 1）親本 ? 2） 同核體： 同源原生質(zhì)體的融合體 ? 3） 異核體 ：非同源的原生質(zhì)體的融合體 ? 4） 多核體： 含有雙親不同比例核物質(zhì)的融合體 ? 5） 異胞質(zhì)體 ：具有不同胞質(zhì)來源的雜合細(xì)胞。 ? 其次，融合方法首選電融合、如果沒有條件進(jìn)行電融合，可以考慮 PEG融合 ? 其三是融合參數(shù)，包括各種融合液都應(yīng)選擇適當(dāng)。 電融合法原理 ? 交流電場使原生質(zhì)體表面電荷偶極化，沿著電極排列，形成串珠 + + + + + + 負(fù)極 正極 + + + + + ?施加直流電場后，形成串珠的原生質(zhì)體在質(zhì)膜接觸處發(fā)生穿孔，開始遺傳物質(zhì)的交流 + + + + + + + + + + + + + + + 二、原生質(zhì)體融合的過程 ? 包括 3個主要階段： ? 凝聚作用階段，其間兩個或兩個以上的原生質(zhì)體的質(zhì)膜彼此靠近； ? 在很小的局部區(qū)域質(zhì)膜緊密粘連，彼此融合，在兩個原生質(zhì)體之間細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)連續(xù)狀態(tài)，或是出現(xiàn)橋； ? 由于細(xì)胞質(zhì)橋的擴(kuò)展，融合完成，形成球形的異核體或同核體。 ? 電融合的基本過程： ? 細(xì)胞膜的接觸：當(dāng)原生質(zhì)體臵于電導(dǎo)率很低的溶液中時，電場通電后，電流即通過原生質(zhì)體而不是通過溶液，其結(jié)果是原生質(zhì)體在電場作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接觸排列成串； ? 膜的擊穿：原生質(zhì)體成串排列后，立即給予高頻直流脈沖就可以使原生質(zhì)膜擊穿，從而導(dǎo)致兩個緊密接觸的細(xì)胞融合在一起。 融合液： CaCl2〃2H 2O 8~10mmol KH2PO4 甘露醇或山梨醇 ~ pH 誘導(dǎo)液：融合液＋ PEG 20～ 45％ 稀釋液： A液（ g/100ml） B液（ g/100ml） 葡萄糖 甘氨酸 CaCl2〃2H 2O NaOH DMSO（ 二甲亞砜） 10ml P 1 融合液 P 2 混合靜止 1min.
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