生物化學研究技術--3sds-page鑒定菠蘿蛋白酶的純度(參考版)
2025-01-19 13:28本頁面
【正文】 ? 4. 思考題： （ 1）電泳時，上下電泳槽產生的氣體是什么？用過一次的電極緩沖液是否可以混合后再用？為什么？ （ 2）樣品上樣前為什么要沸水浴加熱 3～ 5分鐘？ （ 3） SDSPAGE是否需在低溫下進行？為什么？ （ 4）做好本實驗關鍵是什么？ （ 5）如果電泳圖譜模糊，有些電泳帶不出現或拖尾，試分析原因。 2. 做好電泳圖譜的繪制及數據記錄。 ，使用前水浴加熱使之溶解。 (X)，標準蛋白質分子量的對數為縱坐標 (Y)，繪標準蛋白質的標準曲線，再根據樣品相對遷移率在曲線上求出其蛋白質的分子量。 ：高甲醇 60~80ml， 25min；高甲醇 40~60ml 20min；低甲醇 80~100ml完全脫凈 剝膠時要小心 ,保持膠完好無損 ,染色要充分 ，計算標準蛋白、待測樣品的相對遷移率（蛋白相對遷移率＝蛋白遷移距離/指示劑遷移距離）。 ~1cm處，結束電泳。 表 2 點樣方式 孔 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 加樣 粗酶 標準蛋白 過柱 1 過柱 2 過柱 3 體積μL 30～40 30 35 35 35 *微量注射器不可過低 ,以防刺破膠體；也不可過高 , 樣品下沉時易發(fā)生擴散，溢出加樣孔 ，下槽接正極。 ep管取 100μl粗酶樣品與 100μl樣品溶解液混合均勻，與蛋白質分子量標準一起置于 沸水浴 5min）。 12%分離膠 5%濃縮膠 30%凝膠貯液 4000μl 810 μl 上層膠緩
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