產(chǎn)漆酶菌株的篩選與酶活性的測定論(參考版)
2025-01-18 00:47本頁面
【正文】 在此感謝徐波老師的指導(dǎo)和幫助，感謝實驗室的同伴侯玉林、夏宇、佐明的幫助，在此表示深深的感謝，沒有他們的幫助和支持是沒有辦法順利完成我的畢業(yè)論文的，愿同學(xué)之間的友誼永遠(yuǎn)長存。同時感謝李燁青學(xué)姐和實驗同伴對我的幫助。感謝生工院為我們提供了實驗的平臺，讓我能順利完成這次的畢業(yè)論文。有了他們的支持、鼓勵，我才能充實的度過了四年的學(xué)習(xí)生活。感謝我的家人對我的默默支持，感謝在大學(xué)中陪在我身邊的朋友。在他們的指導(dǎo)下，我才能順利地完成畢業(yè)論文。,2007 致謝首先，誠摯的感謝我的論文指導(dǎo)老師徐波老師，對我的論文的指導(dǎo)和修改。北京大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2005,41(4）:1722[15]丁莉?；瘜W(xué)通報,2007(9):622670[14]陳輝,張劍波,劉小鵬。,2006[13]萬云洋,杜予民。,(6):3841[12]王劍鋒。食品與發(fā)酵工業(yè),2006,32(2):2024[10]張瑞福,曹慧,崔由利等。1微生物學(xué)通報,2002,29(3):37421[9]王建鋒,蘇國成,劉建玲等。北京:中國輕工業(yè)出版社, [8]張敏,肖亞中,王怡平等。1菌種研究,2004,2(3):436321[6]Baldrain laccasesoccurrence and properties[J].FEMS Microbiology Reviews 2005,30(2):215242[7]諸葛健,王正祥。1微生物學(xué)報,2000,40(6):6286321[5]初華麗，梁宗琦，韓燕峰。1微生物學(xué)通報,1998,25(4):233236[4]鈔亞鵬,葉軍,錢世鈞。參考文獻[1]Couto S R,Herrera J L and bioteachnological applications of Laccases:A review[J].Bioteachnology Advance,2006,24:500513[2]Riva S Laccases:blue enzymes for green chemistry[J].Trends,in Biotechnology,2006,24(5):219226[3]王佳玲,余惠生,付時雨等。由于本人實驗水平的限制，本實驗還有諸多不完善的地方，只能初步得出上述結(jié)論，如果想要得到更好的結(jié)論，需要進一步做實驗，這樣才能更清楚的了解產(chǎn)漆酶菌株的生化性質(zhì)。在采集來的土壤中能夠產(chǎn)漆酶的菌株本身就甚少，同時增加了篩選的困難。 本實驗篩選出了產(chǎn)漆酶的菌株，并對其進行了菌株鑒定。實驗結(jié)果非常直觀，大大縮短了篩選時間和篩選工作量。本實驗根據(jù)漆酶能催化其特征性底物，生成一種具有顏色反應(yīng)的氧化產(chǎn)物這一特性，選擇了一種簡便且有效地初篩方法，即以漆酶的特性氧化產(chǎn)物愈創(chuàng)木酚制成PDA篩選平板，進行漆酶高產(chǎn)菌株的篩選。6 討論和小結(jié)1. 討論 在整個篩菌過程中需要保證無菌操作，避免雜菌的污染。圖4 瓊脂糖凝膠電泳圖譜分析用改良CTAB法提取待測菌株全基因組后，進行瓊脂糖凝膠電泳，在紫外照射下可以看到DNA電泳圖譜。在測漆酶活的過程中。圖3 吸光值的變化注：橫坐標(biāo)每間隔反應(yīng)時間為15s，縱坐標(biāo)為OD值變化 根據(jù)上述酶活計算方法，得出三種酶活分別為：。適宜的培養(yǎng)條件：50ml/250ml發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為3ml，培養(yǎng)溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為200r/min，培養(yǎng)時間為7d。經(jīng)過篩選培養(yǎng)基篩選得到產(chǎn)漆酶的菌株形態(tài)如下：圖1 菌株在含有愈創(chuàng)木酚的PDA平板上的菌落情況 在實驗過程中需要優(yōu)化漆酶合成的發(fā)酵條件，才能提高發(fā)酵液中漆酶的產(chǎn)量，其中影響產(chǎn)酶的主要因素有初始pH值、搖瓶轉(zhuǎn)速、和接種量，碳源、氮源以及溫度等。如圖1為在加愈創(chuàng)木酚的PDA
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