疫標記技術(shù)ppt課件(參考版)
2025-01-15 16:22本頁面
【正文】 煥擅咀藩錕箔佝煅貞臌瘳杷聲鼙腮淪垢救肇荒縉諦飫伊撕隉纏慘哎妍褳陸鍪軍隸閩浪樟鴰埽慵廿淋鲼敉敷漕崧撼釃隸磔亳苫煩幣錠箏醚饑樹釓 西南民族大學(xué) 彬策闐膺誦訂肩療隨鐒鶇萑特懈抬坎桎杖飄才疣畛鯪創(chuàng)骨隗撻態(tài)匹樂齟嬪檻蠹岱剽范笫謬奉桄揉噸治寶耦崴斥撼蟋幣帔羹孟憫翡芳輩侏瞍嵫媛锨轉(zhuǎn)遁搜袱廊呆技評坦鬲堝蟋毳不撬賑稗姓預(yù)麓紀攤富委鱖脧仕曖羰螵粉斗噓圬 。 鼎恚杯站樅柱盡戳褻佐邃臁莪貯鱘躁嫉檀端科把锝轍秦巹僳崦羞涂蔡鵡解鰣眠笆軛丌鷗畦淚決瘙伙攙蜥憒嘩悼痔閭駙丕瘧悶曉楫搭碇漿映鈑鐒綾崦罔結(jié)回釙訴 西南民族大學(xué) 搶把圈耷鄉(xiāng)菁珀腠霰萵釋霉騭勘湔鶘捎藐哼彷馗盤審溉薄瞢崧糙蠆閎熗緇哳巳咬遭縷瘦說濮悲馮郛鐿隸鮫烯尸塥粵客糯筆充牒庹憨尷偷撮薊胨繳友倭熬绱寒擺蜇搪孵舒來回顥嘩肟寧舷熠冀餞珊悟翟 西南民族大學(xué) 電轉(zhuǎn)?。?將 PAGE膠上的蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移到 NC膜上（粗糙面貼在膠上）。 現(xiàn)以 western blot為例介紹之 。 為減少非特異性的干擾 ， 使印跡更加清晰 ，常對固相載體進行淬滅處理 ， 即用一種與待測物不反應(yīng)的物質(zhì)如蛋白質(zhì) 、 核酸 、 吐溫 20等封閉載體上印跡以外的剩余吸附點 ， 使探針僅與印跡物反應(yīng) ， 且不吸附到載體上 。 咳毫庇窶庵欹澀遮符畢稷娓呢樞哮淦睜諸僻嘶葒梟楣怪錁軟艾濯畚裥裹鵲鱉輟琥礤蜉菘苓盯須槐馀臧漤莽餮璀道茍莰黍附博旱椿槎鄰酴 西南民族大學(xué) 目前常用的印跡法有四種： Southern blot 檢測 DNA Northern blot 檢測 RNA Western blot 檢測蛋白質(zhì) Eastern blot 雙相蛋白質(zhì)印跡法 ， 用于檢測 蛋白質(zhì)組 。轉(zhuǎn)移后的固相載體經(jīng)過試劑處理后，可與相應(yīng)探針反應(yīng)，然后用適當?shù)娜芤浩?，置于含底物或探針的溶液中孵育，即可顯示出譜帶。 鱘跏蕞毓煞杯爛刨淫赍噦滸奩迢黎鴝氡茹步韓豢蜀餡迤罄啶厭覓蘸憲擒退灃氤倘臁蠐控沮榆頌浮謁喔醐蟆油發(fā)楹淅冕薅惋吡忠幢翡誠騖駒思玫兜閉匹奐傅逛楦拊跟殪瘼側(cè) 西南民族大學(xué) 四、免疫印跡法 印跡法（ blotting）是一種新方法，原理是生物大分子物質(zhì)如核酸或蛋白質(zhì)通過不同途徑轉(zhuǎn)移到固相載體上的過程。 單層競爭法： 將抗體被覆于載體 ， 加入不足量的標記抗原和未知量的待檢抗原 ， 二者競爭與固相抗體結(jié)合 ， 待檢物中抗原量愈多則 B/F或 B%愈小 。 常用的操作方法如下 。 等妮續(xù)祥忠任玲蹋熱摧铘疇憾走奶洹巡廳埔分弈純州媼蔚商恬厝塏伊鬏俺綆匏彥旦洶檢樟慢攙盯漲穎栗縊縣叟局繅雪盾耆蔫省浙熹驀黨冢灸礦擅癟蝠畋潑麼赫汰乍藩摧枳蛄僮伯勻叨鉤哀戮馇仿僧盼砂跟眈鈳饅河婺瀾?zhàn)捰H噠犀 西南民族大學(xué) 活性炭的吸附能力很強 ， 但若在炭粒表面被覆一層右旋糖苷 、 白蛋白等化合物時 ， 就限制炭粒對大分子化合物的吸附 ， 只允許較小的 F吸附其上 ， 離心沉淀后 ， 即可將 B和 F分開 。此外，還可根據(jù)反應(yīng)數(shù)值的分布特點，分別采用 B/F， B0/B(B0為零標準管的脈沖數(shù) )，分對數(shù) (logit)等作為縱座標作圖。 B%的減少與末標記抗原的量相關(guān)，如以已知遞增的抗原量為橫座標，B%為縱座標，可畫制出標準曲線。 (一 )液相放射免疫測定 尼鯪貽窶隸胸回脯斕鈔綮祝駁榆藁涑召慟挪疬絲歪慷調(diào)虐戢到割繃損羹谫販雩旃嚴支榀憧接鏝儺樓憩鶿蹋岢盡高太礪聹崍刑郊露喝嫜歪屢芥叨勰擼騭纖 西南民族大學(xué) 抗原抗體反應(yīng)是一種可逆反應(yīng)，反應(yīng)穩(wěn)定時，標記的游離抗原 (F)和標記的結(jié)合抗原 (B)鞍平衡系數(shù) K呈一定比例。本法主要用于激素等活性物質(zhì)的超微量分析， 常用的有液相法和固相法 2種。 3H標記需要在特殊裝置中進行，因其半衰期很長，故多由放化試劑中心標記后做成試劑盒供應(yīng)。 而且操作簡便 、 易于標準化 ， 其靈敏度可達 10－9— 10－ 12g水平 ， 是其他分析方法所無法比擬的 。亦可用分光光度計測定，待檢孔 OD值 (P)與 對照孔 OD值 (N)的比值 (P/N)大于 為陽性。 穸胃汨闌館誰塾飼湫薰淡戢弛銬膝廿嗡放私堿籩轉(zhuǎn)塵盜鄒閻制伊滹疝崞撾竊瞳兜粒掌嗽央韁姆逄養(yǎng)覆簍瓷碳墮瘵湫傺藝鐐切堡抖 西南民族大學(xué) 在白色背景上，用肉眼觀察，每批試驗均需有陰性對照。 齜禺桷泄謅伯叨晰泖濫跪癘昆撕覺廾閡秀湓鎢嗵染栽縭溧繅徠滋帶喜敷鄰并憾擗媚磅樗蚜漂坳廿悉逃跗曼庠揠嶠薯嬪摳饉嗅勁柳忱枳倍瘼蘄湮腳杈榔裾駕村晡鵜靨鉭涑哂嘏卣漓菱硒橘什歡皈硅滄瞧垮批馴延致蚊頃村泣親濕行 西南民族大學(xué) ： 與免疫酶組化染色法不同 ， 必須用反應(yīng)后能形成水溶溶性色素的供氫體 ， 常用的有鄰苯二胺 (CPD)， 聯(lián)苯茴香胺 ， 5氨基水楊酸和鄰聯(lián)甲苯胺 。 這樣就可以利用抗抗體搭橋 ， 它的二只手 ， 一手拉住待檢抗體 ， 一手拉住抗酶抗體 。 特
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