【正文】 在論文即將完成之際，我的心情無法平靜，從開始進(jìn)入課題到論文的順利完成，有多少可敬的師長(zhǎng)、同學(xué)、朋友給了我無言的幫助，在這里請(qǐng)接受我誠摯的謝意！最后我還要感謝培養(yǎng)我長(zhǎng)大含辛茹苦的父母，謝謝你們！最后，再次對(duì)關(guān)心、幫助我的老師和同學(xué)表示衷心地感謝！ 感謝答辯委員會(huì)的老師們?cè)诎倜χ性u(píng)閱我的論文，參加我的論文答辨！ 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 24 參考文獻(xiàn) [1] 齊笛 .不同品種石榴多酚提取工藝及其抗氧化活性的研究 [D].陜西 :西北農(nóng)林科技大學(xué) ,2022. [2] 朱靜 .石榴皮中生物活性成分的提取純化 [D].北京 :北京化工大學(xué) ,2022. [3] 李國(guó)秀 ,李建科 ,李劼 .石榴汁多酚提取物抗氧化活性及其成分分析 [J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào) ,2022,35(4):397399. [4] 艾達(dá)文 ,依明 ,張慧等 .石榴皮中總黃酮含量的測(cè)定 [J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志 ,2022,1(82):287296. [5] 劉振平 ,陳祥貴 ,彭海燕等 .反相高效液相色譜法測(cè)定石榴籽中鞣花酸含量 [J].食品科學(xué) ,2022,33(18):220222. [6] 張茜 ,賈冬英 ,姚開等 .石榴皮提取物的抗氧化作用研究 [J].中國(guó)油脂 ,2022 年 ,31(8):5154. [7] 卡西姆 .石榴皮多酚的提取、抑菌活性及其在鮮牛奶儲(chǔ)藏中的應(yīng)用 [D].哈爾濱 :哈爾濱工業(yè)大學(xué) ,2022. [8] 李國(guó)秀 .石榴多酚類物質(zhì)的分離鑒定和抗氧化活性研究 [D].陜西 :陜西師范大學(xué) ,2022. [9] 李左龍 .石榴皮多糖免疫與抗氧化活性初步研究 [D].新疆 :新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) ,2022. 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[13] EmanueLe rind of the pomegranate fruit [J].,1992,(18):183185。馬超老師不僅在學(xué)業(yè)上給我以精心指導(dǎo)，同時(shí)還在思想、生活上給我以無微不至的關(guān)懷，在此謹(jǐn)向馬超老師致以誠摯和崇高的敬意。還需進(jìn)一步探究不同品種石榴皮殘?jiān)锌傸S酮及鞣花酸的含量、石榴皮殘?jiān)馊芤旱目寡趸钚?，及其抗氧化活性與結(jié)合態(tài)多酚含量的相關(guān)性。 由以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果，可以得出 在石榴皮游離態(tài)多酚提取液中，山東青皮的總酚、總黃酮及鞣花酸含量均最高， 且三種抗氧化性評(píng)定結(jié)果也顯示了山東青皮的抗氧化活性 最強(qiáng)；在結(jié)合態(tài)多酚提取液中，山東大馬牙的總酚含量最高， 而兩種提取液的總酚含量之和也顯示了山東青皮的總酚濃度最高 ；因此 ， 山東青皮相對(duì)其它五個(gè)品種的石榴皮應(yīng)用價(jià)值更大 ?？傊?，石榴為藥食同源植物，其功效越來越受到人們的重視。 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 22 4 總結(jié)與展望 總結(jié) 石榴在我國(guó)種植面積廣闊，分布廣泛，是一種具有很高的食用價(jià)值和藥用價(jià)值的食品，含有豐富的多酚類、黃酮類物質(zhì)及鞣花酸，這些都是抗氧化活性物質(zhì)，尤其是多酚類物質(zhì)具有很強(qiáng)的抗氧化活性，在延緩衰老、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和減緩癌變進(jìn)程方面起著重要作用。即石榴皮的抗氧化活性與總酚含量呈顯著相關(guān)性，與總黃酮含量、鞣花酸含量含量呈明顯相關(guān)性，這說明石榴皮的抗氧化活性與多酚含量密切相關(guān)，而黃酮類物質(zhì)、鞣花酸也具有一定的抗氧化活性 [26]。可見 DPPH、 ABTS 及 FRAP 三種測(cè)定方法結(jié)果一致，即各品種石榴皮提取液的抗氧化活性次序?yàn)樯綎|青皮 山東大馬牙 新疆和田 新疆喀什 新疆皮亞 曼 山東玻璃翠，山東青皮的抗氧化能力最強(qiáng)，高于維生素 E類似物，而山東玻璃翠的抗氧化性最低。在 FRAP 法中，各品種石榴皮提取溶液的維生素 E 類似物當(dāng)量次序?yàn)樯綎|青皮 山東大馬牙 新疆和田 新疆喀什 新疆皮亞曼 山東玻璃翠。 由有圖 313 可以知，到濃度達(dá)到一定值時(shí)，清除 DPPH 自由基的能力達(dá)到飽和。有圖 311 可以知，到濃度達(dá)到一定值時(shí)，清除 DPPH 自由基的能力達(dá)到飽和。 圖 310 不同品種石榴皮提取物的總黃酮含量 Fig310 The totaL fLavonoids content of different varieties of pomegranate peeL extract 石榴皮 游離態(tài)多酚提取液 的鞣花酸含量 各品種中石榴皮提取物中鞣花酸含量次序?yàn)樯綎|青皮 山東大馬牙 新疆喀什 新疆和田 新疆皮亞曼 山東玻璃翠， 其中山東青皮游離態(tài)多酚提取液的鞣花酸含量最高，且遠(yuǎn)高于其它品種，不同品種石榴皮提取物鞣花酸含量?jī)蓛芍g對(duì)比有極顯著性差異（ P）。 圖 37 不同品種石榴品提取物的浸膏得率 Fig37 The extraction yied of different varieties of pomegranate peeL extract 石榴皮游離與結(jié)合態(tài)提取液的總多酚 含量 從圖 38 中可以看出，各品種石榴皮提取液中可溶性多酚含量次序?yàn)樯綎|青皮 新疆喀什 山東大馬牙 新疆和田 新疆皮亞曼 山東玻璃翠，山東青皮提取液中的總酚含量最高，山東玻璃翠提取液中的總酚含量相對(duì)較少 ，不同品種石榴皮提取物的可溶性多酚含量?jī)蓛蓪?duì)比之間有顯著性差異（ P） ；石榴皮渣水解液中結(jié)合態(tài)多酚含量次序?yàn)樯綎|大馬牙 山東玻璃翠 新疆喀什 新疆和田 新疆皮亞曼 山東青皮，石榴皮渣水解液中的總酚含量相差不大，其中山東大馬牙的總酚含量最高，不同品種石榴皮水解液中結(jié)合態(tài)多酚含量?jī)蓛芍g對(duì)比，除山東青皮與新疆皮亞曼之間，均有顯著性差異（ P）； 提取液中的總酚含量比皮渣水解溶液中的總酚含量均高。方差分析結(jié)果表明，六個(gè)石榴品種提取物的浸膏得率兩兩之間對(duì)比有極顯著性差異（ p） 。 1 .0 2 .0 3 .0 4 .0 5 .0 6 .0 7 .0 8 .0 9 .0 1 0 .0 1 1 .0 1 2 .0 m i n 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 B mV EA min mV A 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 15 圖 35 為鞣花酸（ A） 色譜圖 ，圖 36 石 榴皮 提取物（ B） 色譜圖 ，其中， A 圖中鞋花酸的出，峰時(shí)間為 min， B 圖中相應(yīng)出峰位置為 min，二者出峰時(shí)間基本吻合。 圖 33 沒蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為： y = 239021x ，相關(guān)系數(shù) R2 = ， 鞣花酸 標(biāo)品溶液在 μg/m 范圍沒線性良好。 = OD值 TroLox濃度（ mg/mL） 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 14 圖 34 鞣花酸的高效液相色譜圖 Fig35 High performance Liquid chromatography (HPLC) figure of eLLagic acid 圖 36 石榴 皮提取物 的高效液相色譜圖 Fig 35 High performance Liquid chromatography (HPLC) figure of pomegranate peeL extract 圖 31 為沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 ： y = + ，相關(guān)系數(shù) R2 = ，沒食子酸標(biāo)品溶液在 16 μg/mL 范圍內(nèi)線性良好 。 = 0 吸光值OD 濃度 mg/mL 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 13 圖 33 鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)曲線 Fig33 ELLagic acid standard curve 圖 TroLox 標(biāo)準(zhǔn)曲線 Fig TroLox standard curve y =y = 239021x R178。 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 12 3 結(jié) 果 與分析 總酚、總黃酮、鞣花酸 、 TRoLox 含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線 圖 31 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線（總酚含量測(cè)定） Fig31 GaLLic acid standard curve (the determination of totaL phenoL content) 圖 32 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線（總黃酮含量測(cè)定） Fig32 Rutin standard curve (the determination of fLavonoids content) y = + R178。 (3) 鹽酸水溶液水解 2g 殘?jiān)? 50 mL 鹽酸水 溶液（ 10:90， v/v 注意安全 ）于 100mL 錐形瓶中 , 在 80℃ 水浴 7 h ，反應(yīng)結(jié)束后，用 10M 的 NaOH 中和，過濾后取濾液 ，測(cè)總酚含量。 結(jié)合態(tài)多酚酸提取方法的優(yōu)化 (1) 硫酸甲醇水解 2g 殘?jiān)? 50 mL 硫酸甲醇溶液（ 10:90， v/v 注意安全 ）于 100mL 錐形瓶中 ， 在 80℃ 水浴 7 h ，反應(yīng)結(jié)束后，用 10M 的 NaOH 中和，過濾后取濾液 ，測(cè)總酚含量。 結(jié)合態(tài)多酚酸、堿提取方法的比較 (1) 酸水解 5g 殘?jiān)?50 mL 硫酸甲醇溶液（ 10:90， v/v 注意安全 ）于 100mL 錐形瓶中 , 在 80℃ 水浴 7 h ，反應(yīng)結(jié)束后，用 10M 的 NaOH 中和，過 濾后取濾液 ，測(cè)總酚含量。 (3) 石榴皮提取液的鐵氰化鉀還原力測(cè)定 將 6 個(gè)品種的石榴籽提取液稀釋 800、 400、 200、 160、 1 80 倍 ，分別取 1mL，加入 磷酸緩沖液和 %的鐵氰化鉀溶液，在 50℃下保溫 20min，再加入 %的三氯乙酸溶液，混合靜置 10min，取 2mL 上清液，加入 2mL 蒸餾水，混勻后加入 %的三氯化鐵溶液，在700nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值，重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次求平均值。 三氯化鐵 [FeCL3]：取 三氯化鐵，用蒸餾水定容至 100mL，得到 %的三氯化鐵溶液。 鐵氰化鉀 [K3Fe(CN)6]溶液：取 1g 鐵氰化鉀粉末，用蒸餾水定容至 100mL，得到 1%的鐵氰化鉀溶液。 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 10 鐵氰化鉀還原力測(cè)定 （ FRAP） (1) 實(shí)驗(yàn)試劑的配制 磷酸緩沖液：首先應(yīng)配制 Na2HPO4和 NaH2PO4，取 ，用蒸餾水定容至 250mL；取 ，用蒸餾水定容至 250mL。重復(fù)三次求平均 ABTS+自由基清除率。 (2) TroLox 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將 1 mg/mLTroLox 溶液稀釋至 、 、 、 、 、 、 mg/mL，分別取這些不同濃度的 TroLox 溶液 mL 于 5mL 離心管中，再分別加入 mL 新鮮配置的 ABTS+工作液，混勻后避光靜置 6~10 min，最后在 734 nm 處測(cè)吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 ABTS+工作液：使用前將 ABTS+儲(chǔ)備液和無水甲醇以 1:48 的比例稀釋，得到 ABTS+工作液， 4 mL 工作液 +1 mL 無水甲醇混合后在 734 nm 波長(zhǎng)處吸光度為 177。稱量 g 的過硫酸鉀，用蒸餾水定容至 5 mL 容量瓶中，配得 140 mmoL/L 的過硫酸鉀溶液。 DPPH 自由基清除率： RSA(%)=(1AS/A0)*100% 其中， RSA(%)是 DPPH 自由基清除率， A0 是 mLDPPH+ mL 甲醇在 517 nm 處的吸光值，AS 是 mLDPPH+ mL 樣品溶液 +2mL 甲醇在 517 nm 處的吸光值。 (2) TroLox 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將 1 mg/mL 的 TroLox 溶液稀釋至 、 、 、 、 、 、 mg/mL，分別取 mL于 5 mL 離心管中，加入 mL 用甲醇新鮮配置的 DPPH 溶液，再加入 2 mL 甲醇，搖勻后避光靜北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 9 置 20 min，在 517 nm 波長(zhǎng)處測(cè)吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體步驟為 : (1) 實(shí)驗(yàn)試劑的配制 DPPH 溶液：取 gDPPH 粉末，用甲醇溶解至 50mL，得到 DPPH 溶液（ 1 mmoL/L） 。m濾膜，進(jìn) HPLC 測(cè)定。g/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制鞣花酸 標(biāo)準(zhǔn)曲線 [25]。進(jìn)樣量： 20 181。分別吸取 2 mL、 1 mL、 mL、 mL、 mL 的標(biāo)準(zhǔn)液置于 100 mL 容量瓶中，同樣 用 色譜甲醇稀釋至刻度，搖 勻 ，配制成一系列濃度的鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液 (， ， ， ， 181。 (2) 鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 精 密稱取 10mg 鞣花酸對(duì)照品，置于 100 m