【正文】 ?固定化酶在催化反應(yīng)中以固相狀態(tài)作用于底物 ， 并保持酶的高度特異性和催化的高效率 。透明質(zhì)酸酶可作為藥物擴(kuò)散劑并治療青光眼。超氧化物歧化酶用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和放射病。谷氨酰胺酶也有類似作用。 二、酶在治療上的應(yīng)用 蛇毒降纖酶，蚓激酶、組織纖溶酶原激活劑也是近年研究成功的有效抗栓劑。 4．止血酶和抗血栓酶 止血酶有凝血酶和凝血酶激活酶。 3．防治冠心病用酶 胰彈性蛋白酶具有 β脂蛋白酶的作用，能降低血脂、防治動(dòng)脈粥樣硬化。蛋白酶水解炎癥部位纖維蛋白及膿液中粘蛋白，溶菌酶水解細(xì)菌細(xì)胞壁主要成分 — 肽聚糖中的糖苷鍵。 用于治療疾病的酶類藥物主要有以下幾類： 1．助消化酶 該類藥物中有胃蛋白酶、胰酶、纖維素酶及淀粉酶等。 3．工具酶廣泛地應(yīng)用于分子克隆領(lǐng)域 ?除上述酶偶聯(lián)測(cè)定法外 ， 人們利用酶具有高度特異性的特點(diǎn) ， 將酶做為工具 ， 在分子水平上對(duì)某些生物大分子進(jìn)行定向的分割與連接 。 通過(guò)測(cè)定酶的活性來(lái)判斷被其定量結(jié)合的物質(zhì)的存在和含量 。 1．酶法分析是以酶作為工具對(duì)化合物和酶活性進(jìn)行定量分析的一種方法 2．酶標(biāo)記測(cè)定法是酶學(xué)與免疫學(xué)相結(jié)合的一種測(cè)定方法 ?酶標(biāo)記測(cè)定法是利用酶檢測(cè)的敏感性對(duì)無(wú)催化活性的蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的一種方法 。 ?這種具有催化功能的抗體分子稱為抗體酶 (abzyme)。該抗體便具有能催化該過(guò)渡態(tài)反應(yīng)的酶活性 。其作用特點(diǎn)是：切割效率低，易被 RNase破壞；催化類型包括 RNA的轉(zhuǎn)核苷酰反應(yīng)、水解反應(yīng)（ RNA限制性內(nèi)切酶的反應(yīng)）和連接反應(yīng)（聚合酶活性）等；還可能具有氨基酸酯酶，氨基酰 tRNA合成酶和肽基轉(zhuǎn)移酶活性，表明核酶在翻譯過(guò)程中和核糖體發(fā)揮功能中起著重要作用。 酶的磷酸化與脫磷酸化 OH Thr Ser Tyr 酶蛋白 H2O Pi 磷蛋白磷酸酶 ATP ADP 蛋白激酶 Thr Ser Tyr OPO32 酶蛋白 1 核酶 核酶（ ribozyme） 又稱催化 RNA，是具有生物催化活性的 RNA。 （二）酶的化學(xué)修飾調(diào)節(jié)是通過(guò)某些化學(xué)基團(tuán)與酶的共價(jià)結(jié)合與分離實(shí)現(xiàn)的 在其他酶的催化作用下 ， 某些酶蛋白肽鏈上的一些基團(tuán)可與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆的共價(jià)結(jié)合 ， 從而改變酶的活性 ， 此過(guò)程稱為共價(jià)修飾 。 （一）變構(gòu)酶通過(guò)變構(gòu)調(diào)節(jié)酶的活性 一、調(diào)節(jié)酶實(shí)現(xiàn)對(duì)酶促反應(yīng)速率的快速調(diào)節(jié) ? 變構(gòu)酶常為多個(gè)亞基構(gòu)成的寡聚體，具有協(xié)同效應(yīng)。調(diào)節(jié)酶一般可分為 共價(jià)調(diào)節(jié)酶 (covalently regulatory enzyme)及 變構(gòu)酶 (allosteric enzyme)兩類。它的含量在誘導(dǎo)物存在下顯著增高，這種誘導(dǎo)物往往是該酶底物的類似物或底物本身 四、調(diào)節(jié)酶 調(diào)節(jié)酶是對(duì)代謝調(diào)節(jié)起特殊作用的酶類。這為同工酶用來(lái)診斷不同器官的疾病提供了理論依據(jù)。 ? 定義 ? 根據(jù)國(guó)際生化學(xué)會(huì)的建議，同工酶是由不同基因編碼的多肽鏈，或由同一基因轉(zhuǎn)錄生成的不同 mRNA所翻譯的不同多肽鏈組成的蛋白質(zhì)。 2．含不同亞基的寡聚酶 3．寡聚酶的意義 由于寡聚酶的多重亞基結(jié)構(gòu)，所以在機(jī)體代謝活動(dòng)中具有重要作用?，F(xiàn)已證實(shí)單體酶 (如胃蛋白酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶 )為數(shù)不多，而寡聚酶則普遍存在。寡聚酶可分為含有相同亞基的寡聚酶和含有不同亞基的寡聚酶兩大類。在酶的純化工作中還要計(jì)算純化倍數(shù)和產(chǎn)率％，即回收率。 (二 ) 純化 分離純化的方法很多，常用的有鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法及吸附分離法等。 抑制劑 ↑ 1/V 1/[S] 無(wú)抑制劑 ? 各種可逆性抑制作用的比較 動(dòng)力學(xué)參數(shù)表觀 Km Km增大 不變 減小最大速度 Vma x不變 降低 降低林 貝氏作圖斜率 Km/ Vmax增大 增大 不變縱軸截距 1 /Vmax不變 增大 增大橫軸截距 1/Km增大 不變 減小與 I 結(jié)合的組分 E E 、 ES ES作用特征 無(wú)抑制劑 競(jìng)爭(zhēng)性抑制 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制六、激活劑可加快酶促反應(yīng)速率 ? 定義 使酶由無(wú)活性變?yōu)橛谢钚曰蚴姑富钚栽黾拥奈镔|(zhì)稱為激活劑 (activator)。 這種抑制作用稱為反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用 。 抑制劑 ↑ 1 / V 1/[S] 無(wú)抑制劑 iiK [ I ] 1 1 [ I ]1 m ( 1 ) ( 1 )VV K [ S ] V Km a x m a x? ? ? ?抑制劑僅與酶和底物形成的中間產(chǎn)物(ES)結(jié)合 ， 使中間產(chǎn)物 ES的量下降 。 這種抑制作用稱作非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用 。底物和抑制劑之間無(wú)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系 。 ? 定義 ? 反應(yīng)模式 + I EI E + S E + P ES I S + + + E S I ES EI P E E ? 特點(diǎn) ?抑制程度取決于抑制劑與酶的相對(duì)親和力及底物濃度； ?I與 S結(jié)構(gòu)類似 ， 競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心； ?動(dòng) 力 學(xué) 特 點(diǎn) ：Vmax 不變 ， 表觀Km增大 。 的活性中心 有些抑制劑與底物的結(jié)構(gòu)相似 ， 能與底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心 ， 從而阻礙酶－底物復(fù)合物的形成 。 OPOX+ H O ER OR 39。 ? 抑制作用的類型 ?不可逆性抑制 (irreversible inhibition) ?可逆性抑制 (reversible inhibition) ?競(jìng)爭(zhēng)性抑制 (petitive inhibition) ?非競(jìng)爭(zhēng)性抑制 (nonpetitive inhibition) ?反競(jìng)爭(zhēng)性抑制 (unpetitive inhibition) 根據(jù)抑制劑和酶結(jié)合的緊密程度不同，酶的抑制作用分為： 有機(jī)磷化合物 ?? 羥基酶 解毒 解磷定 (PAM) 重金屬離子及砷化合物 ?? 巰基酶 解毒 二巰基丙醇 (BAL) ? 概念 ? 舉例 抑制劑通常以共價(jià)鍵與酶活性中心的必需基團(tuán)相結(jié)合，使酶失活。 ? pH對(duì)某些酶活性的影響 ? 最適 pH不是酶的特征性常數(shù) ， 它受底物濃度 、 緩沖液種類與濃度 、 以及酶純度等因素的影響 。溫度回升后，酶又恢復(fù)其活性。 ? 溫度對(duì)淀粉酶活性的影響 ? 酶的最適溫度不是酶的特征性常數(shù)，它與反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間有關(guān)。 ? 關(guān)系式為： V = k3 [E] 0 V [E] 當(dāng) [S][E]時(shí)， Vmax = k3 [E] 酶濃度對(duì)反應(yīng)速率的影響