色譜分析中國藥科大學第2章色譜法的基本參數(shù)及理論(參考版)
2025-01-09 23:16本頁面
【正文】 Cs Cs Cs Cm Cm Cm 線性等溫線 凸形等溫線 凹形等溫線 Cm/Cs ?? 不變 Cm/Cs ?? 變小 Cm/Cs ?? 變大 tR不隨進樣量而變 tR隨進樣量增加而減少 tR隨進樣量增加而變大 正則峰 拖尾峰 伸舌峰 。拖尾峰的保留值隨進樣量增加而減小，伸舌峰的保留值隨進樣量增加而增加。 對稱峰的保留值與進樣量無關，非對稱性峰的保留值與進樣量有關。保留值隨濃度的增加而減小。 19 （ 1）線性等溫線： 整個工作濃度范圍 K 都保持不變，為一常數(shù)，譜帶移動速度與濃度無關，故色譜峰的前沿與后沿是對稱的，呈高斯分布。 以 mC 為橫坐標， sC為縱坐標，即得 色譜等溫線。 十、色譜等溫線 色譜等溫線是分配系數(shù) K 的圖示方法，它反映了在柱溫不變的情況下，樣品組分的分配系數(shù) K 隨進樣量的增加而變化的情況。再分別進樣 供試品溶液及對照品溶液。 不加校正因子的主成分自身對照法 該法用于估算藥物中的雜質(zhì)的含量 。 首先測定各雜質(zhì)校正因子，再同“不加校正因子的主成分自身對照法”一樣開展試驗。標準曲線不一定過零點。 標準曲線法 18 采用 5 個以上濃度點制備隨行標準曲線，將待測樣品的響應值代入標準曲線，計算含量。 面積歸一化法 該方法是測量各物質(zhì)峰的面積和色譜圖上除溶劑色譜峰以外的總色譜峰面積，計算各峰面積占總峰面積的百分率即得。 外標法測定含量 按各品種項下配制對照品溶液和供試品溶液，進樣分析， 計算含量： Cx = CRSSXCAA/ 式中， AX為供試品（或雜質(zhì)）峰面積或峰高； Cx為供試品（或雜質(zhì)）的濃度。 再取各品種項下，含有內(nèi)標的供試品溶液進樣分析。 內(nèi)標法加校正因子測定含量 按各品種項下規(guī)定，配成含內(nèi)標的校正因子測定用對照溶液，進樣分析，計算校正因子： 校正因子 f = RRSS CA CA // 式中： AS 為內(nèi)標的峰面積或峰高， AR 為對照品的峰面積或峰高。 九、測定法 定量測定時，可根據(jù)具體情況采用峰面積法或峰高法。 重復性 取各品種項下的對照品溶液，連續(xù)進樣 5 次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值 17 的相對標準偏差應不大于 %。 除另有規(guī)定， T 應在 ～ 之間。 拖尾因子（ tailing factor） 為保證測量精度，特別當采用峰高法測量時，應檢查待測物峰的拖尾因子（ T）是否符合該品種項下的規(guī)定，或不同濃度進樣的校正因子誤差是否符合要求。 分離度 定量分析時，為便于準確測量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標峰之間有較好的分離度。 ③ 減小進樣量 八、系統(tǒng)適應性試驗（ System suitability test） 16 用規(guī)定的對照品對儀器進行試驗和調(diào)整，應達到規(guī)定的要求；或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論塔板數(shù)、分離度、重復性和拖尾因子。 （ 2）減小譜帶寬度（峰寬） W ① 提高柱效，減小塔板高度 （ a） 使用顆粒更細的填料 （ b） 更小心、均勻的填充色譜柱 ② 減小色譜系統(tǒng)的死體積 如在填充經(jīng)典的制備柱（植化中用）時，經(jīng)常采用濕法裝柱。22kk? ↑ → R ↑ （ c）降低柱溫 對分離因子 α而言：㏑ α = CTR? （ Tb2 Tb1） + c’ 式中， Tc為 柱溫， Tb1和 Tb2 分別為組分 2 的沸點， c’為常數(shù)， R 為熱力學常數(shù)。 （ b）增加固定相的量 增加固定相的量，則 k2’↑ → 39。)(1(4 22kkn ????可以推導出對于長度不同的同一種色譜柱： 12RR = 12nn = 12LL （ L L2分別為兩根柱的長度） R2 = R1 改善分離的一般原則： （ 1） 增加⊿ tR（ = tR2 tR1） （ a） 增加柱長 （ b） 增加固定相的量 （ c） 選擇分離因子較大的色譜條件 ⅰ . 降低柱溫 ⅱ . 選擇不同的固定相（填充柱 GC 中常用） 高柱效（ n） 低分離因子（ α） 低柱效（ n） 高分離因子（ α） 15 ⅲ . 選擇不同的流動相（ HPLC 中常用） 改善分離（ a）、（ b）、（ c）三種措施的理論基礎如下： （ a）增加柱長 由公式 R = )39。 在 GC 中： （ 1）填充柱分離 （ 2）毛細管分離 GC 中， ① 對于填充柱，其柱效低，因而為了達到預期的分離度，選擇性是最重要的因素，因此，在填充柱 GC 色譜中，需提供許多種性質(zhì)不同的固定相供選擇。(12kk k1’， k2’分別為兩組分的容量因子。tR1R2 = )39。 上式稱“分離度方程”，式中 n 為理論塔板數(shù)，表示柱效； 1 2 W1 W212 tR1 tR2 14 α稱分離因子（表示分離選擇性）， α = 39。1 39。1 39。 影響分離度的因素 由上式可知，分離度不僅取決于兩組分的保留時間，也
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