【正文】 （五） HPLC法 茶苯海明片 離子抑制色譜法 內(nèi)標法定量 例 1. 氨基醚衍生物類藥物的鑒別反應是 （ ABCD） A. 硫酸呈色反應 B. 水解反應 C. 與硝酸銀反應 D. 吸收光譜法 E. 三氯化鐵反應 例 2. 鹽酸苯海拉明的含量測定可用（ CDE） A. 電泳法 B. X— 射線衍射法 C. 非水溶液滴定法 D. 酸性染料比色法 E. 陰離子表面活性劑滴定法 例 3. 陰離子表面活性劑滴定法的終點指示原理是 （ B） A. 堿性藥物和滴定劑反應 ， 所生成的配位化合物溶于有機溶劑而顯色 B. 滴定劑和堿性染料反應 ， 所生成的配位化合物溶于有機溶劑而顯色 C. 堿性藥物和酸性染料反應 ， 所生成的配位化合物溶于有機溶劑而顯色 D. 酸性藥物和堿性染料反應 ， 所生成的配位化合物溶于有機溶劑而顯色 E. 滴定劑和酸性染料反應，所生成的配位化合物溶于有機溶劑而顯色 。 4. 測定方法 精密量取本品適量 （ 約相當于鹽酸苯海拉明 20mg） ， 置具塞錐形瓶中 ， 加水 20m1， 加氯仿 50ml與稀硫酸 5m1。 (書中有錯 ) 測定法 四、含量測定 （ 一 ） 酸 堿 滴定法 (二 )HPLC法 ： C8柱 ：氰基硅烷鍵合硅 膠 柱 ， 水 乙腈 甲 磺 酸(72:28:) 天天好心情！ （ 3） 滴定劑 陰離子表面活性劑 （ 4） 指示劑 堿性染料 二甲基黃或二甲基黃 +亞甲蘭（混合指示劑可提高靈敏度） 標標標 mVc ??樣樣標 mVc ??標樣標樣VVmm ??（ 5） 本法用對照法定量 因此雖用標準溶液，但標準溶液濃度不用標定。 ? 毛細管柱頂空進樣系統(tǒng)程序升溫法： 分別精量標準溶液和供試品溶液 頂空氣體約 1ml，注入 GC儀，記錄譜圖，測主要色譜峰的面積。 ? 系統(tǒng)適用性 溶液 1的 GC圖，其中二氯甲烷和乙醇的 相對保留時間 分別為 、 ，兩峰 R≥ ；按二氯甲烷峰計算 n≥ 4900， T≥ 。 程序升溫： 初始溫度 35℃ ，保持 10min，以 7℃ ／ min升至 150℃ ，保持 4min；進樣口溫度 180℃ ，檢測器溫度 240℃ 。分流速度約l00ml／ min，反壓 。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 ? 色譜條件 ： 聚乙二醇 20M的毛細管柱(30m ?m) ； FID檢測器， 頂空分流 進樣。 ? 標準 溶液： 精量標準儲備液 50ml量瓶，加二甲基甲酰胺定容。 ? 系統(tǒng)適用性試驗溶液 1： 每 lml含 無水乙醇 14nl (11?g)和 二氯甲烷 10nl( ?g)的二甲基甲酰胺溶液。 2 ? 理論板數(shù) 按乙腈峰計算不低于 10000。 ? 對照液： 含 40?g /ml乙腈的二甲基甲酰胺液。 1 ? 殘留溶劑的檢查均采用氣相色譜法： 第一法毛細管柱頂空進樣等溫法 、 第二法毛細管柱頂空進樣系統(tǒng)程序升溫法 和 溶 液 直接進樣法 。有機溶劑均存在不同的 毒性和危害性 ，各國藥典都對相關的有機溶劑進行分類，并規(guī)定限度。 ? 供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰 (馬來酸峰除外 )， 各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積 (L≤%) 。馬來酸峰與依那普利拉峰的 R 應符合要求 ，依那普利拉、依那普利與依那普利雙酮各峰的 R≥ 。進樣量： 20?1。 ()(2022)和 BP(2022)均規(guī)定 各雜質(zhì)成分總量不得大于 ％。溴代反應液 加間苯二酚硫酸溶液 , 水浴加熱顯棕紅色。 3. 水解特性 本類藥物大多數(shù)是前體藥物，在體內(nèi)經(jīng)血漿脂酶水解生成活性代 謝產(chǎn)物。具有烴氨基側(cè)鏈，顯弱堿性，可用于非水滴定法測定含量。 第 三 節(jié) 苯 丙 胺 類 藥 物 的 分 析 第三節(jié) 苯丙胺類藥物的分析 一 、 苯丙胺類藥物的 基本結構 與主要性質(zhì) 典型藥物 C O O R 1NHR 2? ? ? 1 2. 大孔 網(wǎng)格 樹脂的活化與洗滌 ： 用 甲醇 2ml、水 5ml依次通過固相萃取 小柱 ，再用 p 磷酸鹽緩沖液 5ml 通過小柱。 ? ? ④ 定性定量方法 ? (1)定性： tR樣品 ─ tR標樣 不多于 2s, 人工比較選擇離子的豐度，其中試樣峰的選擇離子相對強度 (與基峰的比例 )不超過標準相應選擇離子相對強度的 20％ (m/z 262)和 50%(m/z 212, 227) ? 2)定量方法 選樣峰 (m/z 86的峰面積進行單點或多點校準定量 據(jù)情況而定。 ? (2)GC／ MS測定參數(shù)設定： HP5MS 5％苯基甲基聚硅氧烷色譜柱 (30m 25?m)；進樣溫度： 220℃ ；進樣方式： 不分流 ；進樣體積： 1?l； 柱溫 ： 70℃ (保持 )，以 25 ℃ ／ min升溫至 200℃ (保持 6min)，以 25 ℃ ／mi。 ? ② 凈化 SCX小柱 依次用 甲醇 5ml、 水 5ml和 30mmol／ L鹽酸 5m1活化 ，萃取液 上 樣小 柱 中 , 依次用 水 5 ml和 甲醇 5ml淋洗，在溶劑過萃取柱后， 抽干 小柱 ，再用 4%氨化 甲醇 液 5ml洗脫，收集洗脫液于帶塞試管 。 聚四氟乙烯 離心管中，加 乙酸乙酯 15ml，再加入 ％ Na2CO3溶液 3ml，然后以 10000r／ min以上的速度 勻質(zhì) 60s， 5000r／ min, 離心 2分鐘， 取上層有機相 于離心管中，殘渣再加 乙酸乙酯 10ml， 旋渦 1min，離心 , 取有機相 , 合并提取液。 2022年中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準(NY／ T4682022)對動物組織中的鹽酸克侖特羅規(guī)定了如下測定方法 ： ? ① 而鹽酸克侖特羅易在動物組織，特別是在肝臟中形成殘留 ，當人們食用后發(fā)生中毒，所以我國已 禁止作為生長促進劑使用 。 3. 動物組織中鹽酸克侖特羅的氣相色譜．質(zhì)譜法測定 ? 鹽酸克侖特羅是廣用于 治療支氣管炎 。 測定法 ? 硫酸沙丁胺醇對照加流動相制成約含 96?g/ml的溶液，同法測定。 )甲醇 (85:15)； ? 檢測波長： 276nm。 含共軛體系的平面剛性結構可產(chǎn)生熒光 （ 六 ） HPLC法 《 中國藥典 》 (2022年版 )采用高效液相色譜法含量測定 鹽酸腎上腺 素注射液、 重酒石酸去甲腎上腺 素注射液、 硫酸沙丁胺醇 片、緩釋片與緩釋膠囊、 鹽酸氨溴索口服 溶液、片劑、膠囊與緩釋膠囊等 1. 重酒石酸去甲腎上腺素注射液 ? 離子對反相高效液相色譜法 ? 外標法 定量 ? 固定相 ： ODS，藥物 n＞ 3000 ? 流動相 ： %庚烷基磺酸鈉 甲醇 (65:35)， ? H3PO4調(diào)節(jié)溶液 pH=3. 177。 ? 精密量取 對照品溶液和供試品溶液 各 5ml，分別置 l00ml量瓶中，各加新制的硫酸亞鐵一酒石酸鹽溶液 (取 硫酸亞鐵 lg，加 酒石酸鉀鈉 2g與亞硫酸氫鈉 ，用水稀釋至1000m1)5ml，再加緩沖液 (取 醋酸銨 50g，溶于 20％乙醇 1000ml中，并以氨試液調(diào)節(jié)pH值至 8． 5)稀釋至刻度，搖勻；照紫外一可見分光光度法，在 520nm的波長處測定吸光度，計算，即得。 終點（過量）乙醚層（苯丙胺）苯丙胺硫酸苯丙胺滴定甲基紅、低溫蒸去乙醚定量過量的乙醚提取、?????? ?????? ???????? ????? ?????? ??N a O H42N a C lN a O H