分析試樣的采取和預(yù)處理(參考版)
2025-05-16 15:42本頁面
【正文】 四、利用微波法預(yù)處理試樣 1. 微波的特點(diǎn)： ① 容易被某些極性物質(zhì)（水、酸、堿及含水分的物 質(zhì)等）吸收； ② 可以穿透玻璃、石英、陶瓷、塑料及紙張等； ③ 金屬（如銅、鐵、鋁等）、 ④ 合金只能反射微波 2. 微波法預(yù)處理試樣的特點(diǎn)： ① 加熱速度快，消解能力強(qiáng)，縮短熔樣時(shí)間 ② 試劑用量少，空白值低 ③ 可避免揮發(fā)損失和試樣的污染，提高分析結(jié)果 的準(zhǔn)確度和精密度 ④ 環(huán)境友好 ⑤ 有利于實(shí)現(xiàn)試樣預(yù)處理自動(dòng)化 。預(yù)制備具有活性的蛋白質(zhì)和酶， 提取操作一般要求在 5℃ 以下的低溫進(jìn)行。 提取的溫度 對(duì)提取效果有明顯的影響。 溶液的 pH對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度和穩(wěn)定性影響很大，應(yīng)盡量避免酸、堿度過高。但中性鹽的濃度增加至一定時(shí)，蛋白質(zhì)的溶解度又逐漸下降，直至有沉淀析出，稱為“鹽析”現(xiàn)象。 （三）生物大分子的提取 影響提取的因素 ： 目標(biāo)物在提取溶劑中的溶解度的大??； 由固相擴(kuò)散到液相的難易； 溶劑的 pH和提取時(shí)間； 稀鹽溶液和緩沖溶液對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性好且溶解度大，是最常用的蛋白質(zhì)和酶的提取液。 無機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)是可逆的，即將蛋白質(zhì)稀釋后仍具有生理活性，而有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)是不可逆的。 中性鹽：氯化銨或硫酸銨的飽和溶液 透析法和超濾法也可以除去試樣中的蛋白質(zhì)。 （二）蛋白質(zhì)的除去 在含蛋白質(zhì)的試樣中加入適當(dāng)?shù)某恋韯ㄈ缬袡C(jī)溶劑或中性鹽），使蛋白質(zhì)脫水而沉淀，離心后取上清液用于分析。 常用的化學(xué)試劑有：氯仿、甲苯、丙酮或丁醇等有機(jī)溶劑，以及十二烷基硫酸鈉與氯化十二烷基吡啶等表面活性劑。 常用的方法： 反復(fù)凍融法 急熱驟冷法 超聲波破碎法 化學(xué)破碎法： 通過各種化學(xué)試劑對(duì)細(xì)胞膜的作用使細(xì)胞破碎的方法。 （一）生物組織細(xì)胞的破碎方法 機(jī)械法： 通過機(jī)械運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的剪切力的作用使組織細(xì)胞破 碎的方法。 如果測(cè)定的是生物試樣中的生物或有機(jī)小分子以及生物大分子組分，就不能采用消化法處理樣品。 三、生物試樣的預(yù)處理 生物試樣的預(yù)處理方法與測(cè)定對(duì)象有關(guān)。 優(yōu)點(diǎn)： 是速度快 缺點(diǎn)： 是因加入試劑而引入雜質(zhì) 因此宜盡可能使用高純度的試劑 。 （二）濕式消化法 將試樣與硝酸和硫酸混合物一起置于克氏燒瓶?jī)?nèi)，在一定溫度下進(jìn)行煮沸，其中硝酸能破壞大部分有機(jī)物，在煮解過程中，硝酸逐漸揮發(fā)，最后剩余硫酸。將燃燒生成的 CO2和 H2O分別用預(yù)先稱量并盛有適當(dāng)吸收劑的吸收管吸收，由吸收管增加的質(zhì)量，可分別計(jì)算出有機(jī)試樣中碳和氫的含量。 燃燒法： 用于測(cè)定有機(jī)試樣中的碳及氫元素。 氧瓶燃燒法： 將試樣包在定量濾紙內(nèi)，用鉑金片夾牢，放入充滿氧氣 并盛有少量吸收液的錐形瓶中進(jìn)行燃燒，試樣中的鹵素、硫、磷及金屬元素分別形成鹵素離子、硫酸根、磷酸根及金屬氧化物或鹽類等而被溶解在吸收液中。 硝酸鎂是常用的助劑之一。 不足：因少數(shù)元素?fù)]發(fā)或器壁上沾附金屬可能造成損失。 二、有機(jī)試樣的分解 通常采用的方法：干式灰化法，濕式消化法 （一）干式灰化法 依靠加熱或燃燒使試樣灰化分解，將所得灰分溶解后分析測(cè)定。 燒結(jié)法通常在瓷坩堝中進(jìn)行。 （ 三）燒結(jié)法（半熔法） 將試樣和溶劑混合，小心加熱至熔結(jié)。 Na2CO3和 K2CO3 (1:1)的混合物，熔點(diǎn)降低至 700℃ 左右。 適用對(duì)象：堿性試樣或中性氧化物 2. 堿熔法 常用熔劑： Na2CO K2CO NaOH、 KOH、 Na2O2等。 常用熔劑：焦硫酸鹽 (K2S2O7)。 （二）熔融法 1. 酸熔法 將試樣與 固體熔劑 混合，在
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