【正文】 。 試劑與培養(yǎng)基的配制：按附錄 A 進(jìn)行。 1℃18h~24h，有抑菌帶者為陽性。 桿菌肽敏感試驗(yàn)：將被檢菌濃菌液涂于血平板上，用滅菌鑷子取含菌 單位桿菌肽紙 片放在平板表面上。 鏈激酶試驗(yàn)：吸取草酸鉀血漿 ( 草酸鉀加 5ml 人血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清 )，加入 滅菌生理鹽水混勻后再加入待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物 和 %氯化鈣 ，混勻，放入 36℃177。 (3)鏡檢：挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，鏡下為革蘭陽性、呈鏈狀排列的球菌。 1℃培養(yǎng) 24h。 乙型溶血性鏈球菌檢測(cè) (1)增菌、分離：取樣品 1ml，接種于 1%葡萄糖肉湯， 37℃增菌 24h。②試管法：吸取 1： 4新鮮血 ，放在滅菌小試管中，再加入等量待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物，混勻后放入 36℃177。 1℃培養(yǎng) 24 h，發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。 (4)生化反應(yīng)：取可疑菌落作觸酶、葡萄糖發(fā)酵、血漿凝固酶、甘露醇 發(fā)酵、新生霉素敏感試驗(yàn) ,均為陽性者即為金黃色葡萄球菌。 (2)觀察菌落特征：在血瓊脂平板上菌落形態(tài)為金黃色、圓形凸起、表面光滑、周圍有溶血圈。取 1 白金耳上述增菌液，在血平板上作劃線分離， 36℃177。 (1)增菌、分離 取采樣液 1ml，接種于 5ml SCDLP 液體培養(yǎng)基中，于 36℃177。 致病菌的檢測(cè) 檢測(cè)原則：致病菌的檢測(cè)依據(jù)污染情況進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。 檢測(cè)方法：按 的原則檢測(cè)致病菌。 織物消毒效果監(jiān)測(cè) 采樣時(shí)間：在消毒烘干后進(jìn)行采樣。 (2)檢測(cè)方法：將采樣管在混勻器上振蕩 20s或用力振打 80 次，取采樣液按 原則檢測(cè)致病菌。 其它消毒因子消毒效果監(jiān)測(cè)。消毒后 30min 檢查 pH 值，若 pH=12，繼續(xù)作用 24h 為消毒合格。 焚化 消毒效果監(jiān)測(cè)：可焚化物品的消毒效果監(jiān)測(cè)，以污物燃燒充分、徹底為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行直接檢查。 注意事項(xiàng)：采樣面積按 執(zhí)行。 結(jié)果判定：滅菌后內(nèi)鏡，未檢出任何微生物為合格。 檢測(cè)方法 (1)細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)：按 .(1)執(zhí)行。 (4)結(jié)果判定：未檢出致病菌為消毒合格 . 內(nèi)鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè) 采樣時(shí)間：在消毒滅菌后、使用前進(jìn)行采樣。 3cm，直接投入 5ml 含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水中，立即送檢。 (2)采樣方法：便器、尿壺等容器可用沾有含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水的棉拭子，反復(fù)涂擦容器的內(nèi)表面及內(nèi)口處，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入5ml 無菌生理鹽水試管中 ,立即送檢。 注意事項(xiàng)：餐具若用化學(xué)消毒劑消毒，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。如果有疑慮則進(jìn)行分離培養(yǎng)。 檢測(cè)方法 (1)細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)：按 .(1)執(zhí)行。 采樣方法：將 179。 (3)注意事項(xiàng)： 采樣后 1h內(nèi)檢測(cè)。 消毒液染菌量 (cfu/ml)=每個(gè)平板上的菌落數(shù)179。 50 2)傾注法：用無菌吸管吸取消毒液 ,加入到 含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水采樣管中混勻 ,分別取 放入 2只滅菌平皿內(nèi) ,加入已熔化的 45℃ ~48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml~18ml,邊傾注邊搖勻 ,待瓊脂凝固 ,一平板置 20℃培養(yǎng) 7d,觀察霉菌生長(zhǎng)情況；另一個(gè)平板置 36℃177。 使用中消毒液染菌量測(cè)定 (1)檢測(cè)方法： 1)涂抹法：用無菌吸管吸取消毒液 ，加入 含有相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻，用無菌吸管吸取上述溶液 ，滴于干燥普通瓊脂平板，每份樣品同時(shí)做 2個(gè)平行樣，一平板置 20℃培養(yǎng) 7d，觀察霉菌生長(zhǎng)情況，另一個(gè)平板置 35℃溫箱培養(yǎng) 72h 記數(shù)菌落數(shù)，同時(shí)按 的原則檢測(cè)致病菌。 (10)臭氧含量測(cè)定：按 的方法進(jìn)行。 (9)醋酸氯己定 (C22H30Cl2N10178。 (7)二溴海因含量測(cè)定：按 的方法進(jìn)行。 (5)過氧乙酸 (C2H4O3)濃度的測(cè)定：按 的方法進(jìn)行。 (3)戊二醛 (C5H8O2)含量的測(cè)定：按 的方法進(jìn)行。 (2)有效碘含量的測(cè)定：按 的方法進(jìn)行。 注意事項(xiàng) 采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動(dòng)的情況下，靜止 10min 進(jìn)行采樣。 T) 式中 A 為平板面積 (cm2)； T 為平板暴露時(shí)間 (min)； N 為平均菌落數(shù) (cfu)。 檢測(cè)方法：按照 要求進(jìn)行。 采樣方法：平板暴露法 (1)布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積≤ 30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線 3 點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁 1M 處；室內(nèi)面積 30m2，設(shè) 4 角及中央 5點(diǎn)， 4角的布點(diǎn)部位距墻壁 1m 處。 (2)樣本量及處理：按 (1)執(zhí)行。 母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。 Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤ 10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 (2)致病菌檢測(cè)：檢測(cè)方法按 原則執(zhí)行。 檢測(cè) 方法 (1)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：檢測(cè)方法按 (1)執(zhí)行。 5cm 的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積≥ 100cm2，連續(xù)采樣 4 個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。 物品和環(huán)境表面消毒效果的監(jiān)測(cè) 采樣時(shí)間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。 注意事項(xiàng) 皮膚粘 膜采樣處 ,若表面不足 5cm179。 母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。 Ⅲ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤ 10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。稀釋倍數(shù) 細(xì)菌總數(shù) (cfu/cm2)=──────────────── 采樣面積 (cm2) (2)致病菌檢測(cè)：按 的原則執(zhí)行。 1℃溫箱培養(yǎng) 48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。不規(guī)則的粘膜皮膚處 可用棉拭子直接涂擦采樣。 (2)皮膚粘膜采樣：用 5cm179。 手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測(cè) 采樣時(shí)間：在消毒后立即采樣。 6)結(jié)果判定：在初試 3 只家兔中，體溫升高均低于 ℃，并且 3只家兔體溫升高總數(shù)低于 ℃，或在復(fù)試的 5 只家兔中，體溫升高 ℃或 ℃以上的兔數(shù)僅有 1只，并且初試，復(fù)試合并 8只家兔的體溫 升高總數(shù)為 ℃或℃以下，均認(rèn)為供試品符合熱原檢查條例規(guī)定。 5)檢查法：取適用的家兔 3 只，測(cè)定其正常體溫后 15min 內(nèi)，自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s 38℃的供試品溶液，然后每隔 1h 按前法測(cè)量其體溫 1 次，共測(cè) 3次，以 3次體溫中最高一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高度數(shù)。當(dāng)日使用的家兔，正常體溫應(yīng)在 ℃ ~℃的范圍內(nèi)，且各兔間正常體溫之差不得超過 1℃。 ℃的肛溫計(jì)，或其他同樣精確 的測(cè)溫裝置。家兔在試驗(yàn)前至少 1h開始停止給食并置于適宜的裝置中，直至試驗(yàn)完畢。用于熱原檢查后的家兔，如供試品判定為不符合規(guī)定，且其組內(nèi)家兔平均升溫達(dá) ℃或更高時(shí)，則組內(nèi)全部家兔不再使用，每一家兔的使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過 10次。挑選試驗(yàn)的條件與檢查供試品時(shí)相同，僅不注射藥液，每隔 1h測(cè)量體溫 1 次，共測(cè) 4次， 4 次體溫均在 ℃ ~℃的范圍內(nèi)，且最高最低體溫的差數(shù)不超過 ℃的家兔，方可供熱原檢查用。在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄 等不得有異?，F(xiàn)象。 2)供試家兔：試驗(yàn)用的家兔應(yīng)健康無傷，體重 kg~，雌兔應(yīng)無孕。供試品陽性對(duì)照均應(yīng)為 (+)，陰性對(duì)照均應(yīng)為 ()，否則試驗(yàn)無效。若第一次試驗(yàn)時(shí)供試品的稀釋倍數(shù)小于 MVD 而結(jié)果出現(xiàn) 2 管均為 (+)或 2管中 1管為 (+)， 1管為 ()時(shí)，按同樣方法復(fù)試和判定，復(fù)試時(shí)要求將其稀釋至 MVD。供試品 2管均為 ()，應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定。 5)結(jié)果判斷：將試管從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn) 180176。 2min。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口 ,垂直放入 37℃177。 4)檢查法：取裝有 鱟試劑溶液的 10mm179。每個(gè)品種要求至少對(duì)三個(gè)批號(hào)的供試品進(jìn)行干擾試驗(yàn)，若鱟試劑的來源、供試品的配方或生產(chǎn)工藝有變化時(shí)，須重復(fù)進(jìn)行干擾試驗(yàn)。 Es=lg1(∑ Xs/4) Et=lg1(∑ Xt/4) 式中 Xs、 Xt分別為用 BET水和供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值 (lg)。用 BET 水和供試品溶液或稀釋液制成的每一濃度平行做 4管，另取 BET 水和供試品溶液或稀釋液各做 4管 陰性對(duì)照。 鱟試劑靈敏度定義為在本檢查法規(guī)定的條件下能檢測(cè)出標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液中的最低內(nèi)毒素濃度，用 EU/ml 表示。 當(dāng)λ c 在 ~ (包括 )時(shí)，方 可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以λ為該批鱟試劑的靈敏度。 λ c=lg1(∑ X/4) 式中 X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值 (lg)。試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止微生物的污染。 1)試驗(yàn)準(zhǔn)備：試驗(yàn)所用器皿，需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，常用的方法是 250℃干烤至少 1h 或 180℃干烤至少 2h，也可用其他適宜的方法。每毫微克 (1ng)CSE 的效價(jià)應(yīng)不小于 2EU，不大于 50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù) 據(jù)。 RSE 用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度和標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(以下簡(jiǎn)稱 CSE)。細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品 (以下簡(jiǎn)稱 RSE)系自大腸桿菌提取精致得到的內(nèi)毒素。 熱原檢查法： (1)鱟試驗(yàn) 本法系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)理，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。 (2)被采樣本表面積 100cm2 取全部表面；被采樣本表面積≥ 100cm2，取100cm2。 (4)結(jié)果判定：陽性對(duì)照在 24h內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無菌生長(zhǎng)，如需 厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格；如需 厭氧 菌及霉菌培養(yǎng)管中任何 1 管顯混濁并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試 2次，除陽性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為滅菌不合格。接種量為 1ml/管 ,培養(yǎng)基用量為 15ml/管。接種量： 1ml 注射器為 ， 2ml 注射器為 1ml， 5ml~10ml 注射 器為 2ml，20ml~50ml 注射器為 5ml,培養(yǎng)基用量：接種量為 2ml 以下為 15ml/管，接種量5ml 為 40ml/管。培養(yǎng)基用量為 15ml/管。 2)陽性對(duì)照管菌液制備： ①在試驗(yàn)前一天取金黃色葡萄球菌 [CMCC(B)26003]的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種 1 環(huán)至需 厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在 30℃ ~35℃培養(yǎng) 16h~18h 后，用 %無菌氯化鈉溶液稀釋至 10 cfu/ml~100cfu/ml； ②取生孢梭菌 [CMCC(B)64941]的需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物 1 接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于 30℃ ~35℃培養(yǎng) 18h~24h 后，用 %無菌氯化鈉溶液稀釋至 10 cfu/ml~100cfu/ml； ③取白色念珠菌 [CMCC(F)98001]真菌瓊脂 培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物 1接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于 20℃ ~25℃培養(yǎng) 24h 后，用 %無菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml~100cfu/ml。 無菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為 100 級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染；對(duì)單向流空氣區(qū)域及工作臺(tái)面，必須進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。 醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測(cè) 采樣時(shí)間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。 (2)表面消毒效果監(jiān)測(cè)：監(jiān)測(cè)按 的原則執(zhí)行。 5V，溫度 20℃ ~25℃，相對(duì)濕度 60%，紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門檢定的有效期內(nèi)使用；指示卡應(yīng)獲得衛(wèi)生許可批件，并在有效期內(nèi)使用。 (2)結(jié)果判定：普通 30w 直管型紫外線燈，新燈輻照強(qiáng)度≥ 90μ W/cm2 為合格；使用中紫外線燈輻照強(qiáng)度≥ 70μ W/cm2 為合格； 30W 高強(qiáng)度紫外線新燈的輻照強(qiáng)度≥ 180μ W/cm2 為合格。 紫外線消毒效果的監(jiān)測(cè) 紫外線燈管輻照度值的測(cè)定 (1)檢測(cè)方法： 1)紫外線輻照計(jì)測(cè)定法：開啟紫外線燈 5min 后 ,將測(cè)定波長(zhǎng)為 的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離 1m 的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。 結(jié)果判定：經(jīng)培養(yǎng)，陽性對(duì)照在 24h 內(nèi)有菌生長(zhǎng)；監(jiān)測(cè)樣品若連續(xù)培養(yǎng)觀察 5 天，全部無菌生長(zhǎng)，可報(bào)告生物指示物培養(yǎng)陰性，滅菌合格。 每