【正文】 （ 4）配制菌懸液和制備菌片時(shí)，嚴(yán)格按無菌要求操作，以防污染雜菌，影響隨后殺。 （ 3） 細(xì)菌繁殖體在烤干過程中，可引起部分死亡，如銅綠假單胞菌在 37℃ 干 燥 過程中，滴度最高可下降 1個(gè)對數(shù)值。 作為菌懸液含菌濃度或菌片染菌量的正式報(bào)告（如殺菌試驗(yàn)中陽性對照組菌懸液或菌片所含菌量），必須以活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)的實(shí)測結(jié)果為準(zhǔn)，不得使用根據(jù)比濁法判定的估計(jì)值。 （ 5）每個(gè)菌片的回收菌數(shù)，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所得結(jié)果，應(yīng)為 5105 cfu/片～ 5106 cfu/片。用 10μl移液器接滅菌塑料吸頭滴染菌液，并用接種環(huán)涂勻整個(gè)載體表面。 滴染法染菌時(shí)，將經(jīng)滅菌的載體片平鋪于無菌平皿內(nèi)，逐片滴加菌液。細(xì)菌繁殖體，可直接使用經(jīng) 18h～ 24h培養(yǎng)的斜面 培養(yǎng)物，細(xì)菌芽孢可使用 4℃ 冰箱貯存液。 （ 4）載體經(jīng)壓力蒸汽滅菌后，使用滴染法 染菌 。此法制成的載體大小一致，且無毛邊。 （ 3）布片用白平紋棉布制作。 （ 2）所用載體（除濾紙片外）于染菌前，應(yīng) 進(jìn)行脫脂處理。載體可以為方形，大小為 10mm10mm。載體應(yīng)根據(jù)消毒對象選擇，常用的有金屬、玻璃、濾紙、線、 棉 布等。 11）懷疑有雜菌污染時(shí)，應(yīng)以菌落形態(tài)、革蘭染色與生化試驗(yàn)等法進(jìn)行鑒定。 有效使用期為半 年。 9）將芽孢液放于 80℃ 水浴中 10min（或 60℃ ， 30min），以殺滅殘余的細(xì)菌繁殖體。再離心和重新懸浮清洗，先后共 3遍。 7）將過濾后的芽孢懸液，置無菌離心管內(nèi)，以 3000 r/min 速度離心 30min。 5）必要時(shí)，將盛裝菌懸液的三角燒瓶置 45℃ 水浴中 24h，使菌自溶斷鏈，分散成單個(gè)芽孢。吸出第一批洗下的菌懸液，再向瓶內(nèi)吸加 無菌蒸餾水，重復(fù)洗菌一遍。芽孢呈綠色，菌體呈紅色。 ③ 加 % 沙黃水溶液，染 1min。將平皿蓋好，放 54℃ ～ 56℃ 條件下，加熱 30min。而后通過火焰加熱將菌固定于玻片上。否則， 應(yīng)繼續(xù) 在室溫下放置 一定時(shí)間，直至達(dá)到上述芽孢形成率后再進(jìn)行以下處理。 3）用接種環(huán)取菌樣少許涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在顯微鏡（油鏡） 下進(jìn)行鏡檢。挑取上述第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，于 37℃ 培養(yǎng) 18h～ 24h，即為第 3 代培養(yǎng)物。取含 5 ml～ 10ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，置 37℃ 培 養(yǎng) 18h～ 24h。 5）懷疑有污染時(shí)，應(yīng)以菌落形態(tài)、革蘭染色 與生化試驗(yàn)等法進(jìn)行鑒定。 4）細(xì)菌繁殖體懸液應(yīng)保存在 4℃ 冰箱內(nèi)備用。隨后，用 移至另一無菌試管中，用電動(dòng)混合器混合 （振蕩） 20s，或在手掌上振敲 80次，以使細(xì)菌懸浮均勻。挑取上述第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面，于 37℃ 培養(yǎng) 18h～ 24h，即為第 3代培養(yǎng)物。取含 ml～ 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，置 37℃ 培養(yǎng) 18h～ 24h。 （ 14）電動(dòng)混合器 （ 15）濁度計(jì)。 （ 12）數(shù)字可調(diào)移液器（ 10μl， 20μl， 100μl， 200μl， 1000μl）及配套用一次性塑料吸頭。 （ 10）玻璃漏斗。 （ 8）芽孢染色液：見附錄 A。 （ 6）細(xì)菌培養(yǎng)基 ： 胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（ TSA），胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（ TSB） 等，見附錄 A。 （ 4）無菌蒸餾水。 （ 2） 有機(jī)干擾物：見附錄 A。 試驗(yàn)器材 （ 1）菌種 :金黃色葡萄球菌 ATCC 653銅 綠 假單胞 菌 ATCC 1544 大腸桿菌 809 枯草桿菌黑色變種 ATCC 937 龜 分枝 桿菌膿腫亞種 ATCC 9332 白色葡萄球菌 803 白色念珠菌ATCC1023 黑曲霉菌 ATCC16404。不能反映消毒劑的全面特性。 — 22— 消毒 產(chǎn)品消毒效果檢 驗(yàn)技術(shù) 規(guī)范 消毒劑殺微生物試驗(yàn) 適用范圍 主要適用于消毒劑鑒定和日常監(jiān)測，用來評價(jià)各種用途的消毒劑對微生物的殺滅效果。 7)清點(diǎn)所消耗的藥品器材，加以整修、補(bǔ)充。嚴(yán)格區(qū)分已消毒和未消毒的 物品，勿使已消毒的物品被再次污染。 5)消毒應(yīng)有條不紊，突出重點(diǎn)。要注意自我保護(hù)，既要防止或減少受到消毒因子的傷害又要避免受到微生物感染。在用化學(xué)法消毒時(shí)應(yīng)盡量選擇對相應(yīng)致病微生物殺滅作用良好，對人、畜安全，對物品損害輕微，對環(huán)境影響小的消毒劑。 2）應(yīng)主動(dòng)取得病家合作和相關(guān)人員的配合。 18)離開病家前，讓病家開窗通風(fēng)，擦拭打掃。 16)必要時(shí)，到達(dá)規(guī)定的消毒作用時(shí)間后，由檢驗(yàn)人員對不同消毒對 象進(jìn)行消毒后采樣。將衣物污染面向內(nèi)卷在一起，放在布袋中帶回消毒。 14)對傳染源密切接觸者進(jìn)行人員衛(wèi)生處理。對污染重、經(jīng)濟(jì)價(jià)值不大的物品和廢棄物，在征得病家同意后焚燒。 作浸泡消毒時(shí)，必須使消毒液浸透被消毒物品。 11)對室內(nèi)地面、墻壁、家具和陳設(shè)物品消毒時(shí)，應(yīng)按照先上后下，先左后右的方法，依次進(jìn)行消毒 。 9)如系呼吸道傳染病，應(yīng)對室內(nèi)空氣進(jìn)行消毒 。 7)必要時(shí)，由檢驗(yàn)人員對不同消毒對象進(jìn)行消毒前采樣。 5)進(jìn)入疫點(diǎn) 時(shí)，應(yīng)先消毒有關(guān)通道 。 4)仔細(xì)了解病員患病前和患病期間居住的房間、活動(dòng)場所，用過的物品、家具，吐瀉物、污染物傾倒或存放地點(diǎn)，以及污水排放處等，據(jù)此確定消毒范圍和消毒對象。穿隔離服、膠鞋， — 21— 戴上口罩、帽子。 2)消毒人員到達(dá)疫點(diǎn)，首先查對門牌號和病人姓名，并向有關(guān)人員說明來意，做好防疫知 識宣傳，禁止無關(guān)人員進(jìn)入消毒區(qū)域內(nèi)。 2)病人陪伴和護(hù)理人員，除做好病人的隨時(shí)消毒外，應(yīng)做好本人的衛(wèi)生防護(hù)，護(hù)理病人后， 應(yīng)消毒雙手?！叭珠_”是指：①分住室（條件不具 備可用布簾隔開，至少要分床）；②分飲食；③分生活用具（包括餐具、洗漱用具、便盆、痰罐等）。 7)填報(bào)消毒工作記錄，必要時(shí)進(jìn)行消毒效果評價(jià)。 6)注意與其它傳染病控制措施配合：搞好傳染源的管理，疫區(qū)的封鎖、隔離，殺蠅、防蠅 ，滅鼠、防鼠，滅蚤，搞好飲用水、污水、食品的消毒及衛(wèi)生管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生。 4)疑似傳染病疫源地的消毒：可按疑似的該類傳染病疫源地進(jìn)行消毒處理或按下一條進(jìn)行 處理。 3)消毒方法的選擇：以消毒因子的性能、消毒對象、病原體種類為依據(jù) 選擇消毒方法。 技術(shù)要求 (1)疫區(qū)消毒 1)消毒范圍和對象：以傳染源排出病原體可能污染的范圍為依據(jù)確定消毒范圍和對象。 (3)消毒劑：儲(chǔ)備一定量的消毒劑并與有關(guān)廠家建立聯(lián)系，確保處理突發(fā)疫情的需要。 30cm179。 (1)消毒工具：背負(fù)式噴霧器、氣溶膠噴霧器、機(jī)動(dòng)噴霧器、配藥桶（ 10L）、刻度量杯（筒）、工具箱、消毒車。 時(shí)限要求 接到甲類傳染病疫情報(bào)告和乙類傳染病中的肺炭疽和艾滋病的疫情報(bào)告后，城市應(yīng)在 6 h 內(nèi)，農(nóng)村應(yīng)在 12 h 內(nèi)采取消毒措施，其他傳染病按病種不同應(yīng)在 24h 至 48h 內(nèi)采取消毒措施。 （ 5）在醫(yī)院中對傳染病病人的終末消毒由醫(yī)院安排專人進(jìn)行。 （ 3）對丙類傳染病中的急性出血性結(jié)膜炎、感染性腹瀉等由病人或其陪護(hù)人進(jìn)行消毒處理。 疫源地消毒基本要求 組織執(zhí)行與人員 （ 1）對甲類傳染病和肺炭疽、艾滋病等乙類傳染病必須在當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督機(jī)構(gòu)的監(jiān)督指導(dǎo)下，由有關(guān)單位和個(gè)人及時(shí)進(jìn)行消毒處理，或由當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)進(jìn)行終末消毒。 (4) 液體化學(xué)消毒劑：應(yīng)防止過敏和可能對皮膚、黏膜的損傷。 (2) 紫外線、微波消毒：應(yīng)避免對人體的直接照射。 消毒工作中的個(gè)人防護(hù) 消毒因子大多對人是有害的，因此，在進(jìn)行消毒時(shí)工作人員一定要有自我保護(hù)的意識和采取自我保護(hù)的措施，以防止消毒事故的發(fā)生和因消毒操作方法不當(dāng)可能對人體造成的傷害。 消毒、滅菌基本程序 被甲類傳染病病人，以及肝炎、結(jié)核、艾滋病、炭疽病等病人的排泄物、分泌物、血液等污染的器材和物品，應(yīng)先消毒再清洗，于使用前再按物品危險(xiǎn)性的種類，選擇合理的消毒、滅菌方法進(jìn)行消毒或滅菌處理。 3）器械的浸泡滅菌，應(yīng)選擇對金屬基本無腐蝕性的消毒劑。應(yīng)遵循以下基本原則： 1）耐高溫、耐濕度的物品和器材，應(yīng)首選壓力蒸汽滅菌；耐高溫的玻璃器材、油劑類和干粉類等可選用干熱滅菌。 5）消毒物品上微生物污染特別嚴(yán)重時(shí)，應(yīng)加大消毒藥劑的使用劑量和 /或延長消毒作用時(shí)間。 3）對受到一般細(xì)菌和親脂病毒等污染的物品，可選用中水平或低水平消毒法。 — 19— （ 3）根據(jù)物品上污染微生物的種類、數(shù)量和危害性選擇消毒、滅菌的方法 1） 對受到細(xì)菌芽孢、真菌孢子、分枝桿菌和經(jīng)血傳播病原體（乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒等）污染的物品，選用高水平消毒法或滅菌法。 3）低度危險(xiǎn)性物品，一般可用低水平消毒方法，或只作一般的清潔處理即可，僅在特殊情況下，才作特殊的消毒要求。 2）中度危險(xiǎn)性物品，一般情況下達(dá)到消毒即可，可選用中水平或高水平消毒法。 （ 2）根據(jù)物品污染后的危害程度選擇消毒、滅菌的方法。 （ 7）朊毒（感染性蛋白質(zhì)）。 （ 5）分枝桿菌，例 如結(jié)核分枝桿菌、龜分枝桿菌等。 （ 3）真菌。 微生物對消毒因子的敏感性 一般認(rèn)為，微生物對消毒因子的敏感性從高到低的順序?yàn)椋? （ 1）親脂病毒（有脂質(zhì)膜的病毒），例如乙型肝炎病毒、流感病毒等。這類物品和器 材僅直接或間接地和健康無損的皮膚相接觸，包括生活衛(wèi)生用品和病人、醫(yī)護(hù)人員生活和工作環(huán)境中的物品。例如，呼吸機(jī)管道、胃腸道內(nèi)窺鏡、氣管鏡、麻醉機(jī)管道、子宮帽、避孕環(huán)、壓舌板、喉鏡、體溫表等。根據(jù)其危害程度將其分為三類： （ 1）高度危險(xiǎn)性物品：這類物品是穿過皮膚或黏膜而進(jìn)入無菌的 組織或器官內(nèi)部的器材，或與破損的組織、皮膚、黏膜密切接觸的器材和用品，例如，手術(shù)器械和用品、穿刺針、輸血器材、輸液器材、注射的藥物和液體、透析器、血液和血液制品、導(dǎo)尿管、膀胱鏡、腹腔鏡、臟器移植物和活體組織檢查鉗等 。如單鏈季銨鹽類消毒劑 (苯扎溴銨等 )、雙胍類消毒劑如氯己定、植物類消毒劑和汞、銀、銅等金屬離子消毒劑等進(jìn)行消毒的方法。 （ 3）中水平消毒法：是可以殺滅和去除細(xì)菌芽孢以外的各種病原微生物的消毒方法，包括超聲波、碘類消毒劑 (碘伏、碘酊等 )、醇類、醇類和氯已定的復(fù)方，醇類和季銨鹽（包括雙鏈季銨鹽）類化合物的復(fù)方、酚類等消毒劑進(jìn)行消毒的方法。這類消毒 — 18— 方法應(yīng)能殺滅一切細(xì)菌繁殖體（包括結(jié)核分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢。屬于此類的方法有：熱力滅菌、電離輻射滅菌、微波滅菌、等離子體滅菌等物理滅菌方法，以及用甲醛、戊二醛、環(huán)氧乙烷 、過氧乙酸、過氧化氫等消毒劑進(jìn)行滅菌的方法。 醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)消毒、滅菌基本要求 消毒因子作用的水平 根據(jù)消毒因子的適當(dāng)劑量（濃度）或強(qiáng)度和作用時(shí)間對微生物的殺滅能力，可將其分為四個(gè)作用水平的消毒方法。使用原形（原液）對皮膚、黏膜進(jìn)行消毒的消毒劑，則采用消毒劑原形（原液）作為試驗(yàn)受試物，不需 對消毒劑原形再進(jìn)行濃縮。對于二元或多元包裝的消毒劑，以按比例混合配制后作為消毒劑原形。 1）在急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、急性吸入毒性試驗(yàn)、亞急性毒性試驗(yàn)、致突變試驗(yàn)、亞慢性毒性 試 驗(yàn)、致畸胎試驗(yàn)、慢性毒性試驗(yàn)和致癌試驗(yàn)時(shí)，一般采用消毒劑原形樣品。 （ 2）提供受試樣品與毒性有關(guān)的物理、化學(xué)性質(zhì)的資料，以及消毒劑的配方、主要成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)和含量、 pH 值等，但植物成分組配的消毒劑可不提供化學(xué)結(jié)構(gòu)。如果偶爾使用或間隔數(shù)日使用的消毒劑，采用一次陰道黏膜刺激試驗(yàn)；如果每日使用或連續(xù)數(shù)日使用的消毒劑，采用多次陰道黏膜刺激試驗(yàn)。根據(jù)消毒劑的成分 ， 估計(jì)可能有致敏作用者，還需增做皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)。接觸皮膚傷口的消毒劑，還必須增做一次破損皮膚刺激試驗(yàn)；接觸創(chuàng)面的消毒劑，應(yīng)增做眼刺激試驗(yàn)。 (5)手和皮膚 消毒劑：除按第一類、第二類或第三類消毒劑的要求進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)外 ， 還必須進(jìn)行完整皮膚刺激試驗(yàn)。 (4)室內(nèi)空氣消毒劑：除按第一類、第二類或第三類消毒劑的要求進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)外，還必須 做急性吸入毒性試驗(yàn)和急性眼刺激試驗(yàn)。首先必須做急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)和一項(xiàng)致突變試驗(yàn) (反映體細(xì)胞基因水平或染色體水平類型 的試驗(yàn) ) ；若消毒劑（皮膚黏膜消毒劑）直接用于人體，并有可能重復(fù)接觸的，還必須增做亞 急性毒性試驗(yàn)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果 ，判定是否需繼續(xù)做其它項(xiàng)目試驗(yàn)。 — 17— (2)第二類消毒劑：指國外已批準(zhǔn)生產(chǎn)、現(xiàn)由我國首次生 產(chǎn)或首次進(jìn)口的消毒劑。首先必須做急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) (包括小鼠和大鼠 )、亞急性 毒性試驗(yàn)、亞慢性毒性試驗(yàn)、致畸胎試驗(yàn)和三項(xiàng)致突變試驗(yàn) (包括反映體細(xì)胞基因水平、體細(xì)胞染色體 水平和性細(xì)胞染色體水平三種類型試驗(yàn) )。 (1)第一類 消毒劑：指我國首創(chuàng)或根據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道首次生產(chǎn)的消毒劑。 消毒產(chǎn)品毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)評價(jià)程序 消毒劑安全性毒理學(xué)評價(jià) ， 可分為 4 個(gè)階段。 — 16— 對于本規(guī)范中測定方法不適用的產(chǎn)品，有效成分的測定，由廠家提供檢測方法及方法可靠性的論證報(bào)告，經(jīng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)認(rèn)可后方可采用 。 如果選用色譜法或分光光度法，進(jìn)行方法可靠性論證時(shí)應(yīng)附空白樣品（不含被測成分的其它成分所構(gòu)成的樣品）、模擬樣品（空白樣品加有效成分的標(biāo)準(zhǔn)品）以及待測樣品的色譜圖或光譜圖。每批取 1 個(gè) 樣品平行測定 2 次，取平均值報(bào)告結(jié)果。 容量分析實(shí)驗(yàn)室工作溫度應(yīng)控制在 20℃～ 25℃。玻璃儀器清洗干凈，用蒸餾水沖洗 3 遍。所使用的滴定液應(yīng)按要求在有效使用期