【正文】 在實驗的過程中，滑國華師姐、于俊娜師姐和楊菲菲師姐在實驗過程中教給我很多知識和技能，給了我很好的指導(dǎo)和很大的幫助，在此表示感謝。28（ 2） 7779 [11] 焦傳珍．褪黑激素及其生理功能研究進展．生物學(xué)教學(xué) ， 2020， 30（ 2） 23 [12] 楊 利國． 湖北馬頭山羊 ． 2020～ 2020 年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會議論文集， 111113 [13] [ 6 ] 季從亮，儲明星，陳國宏等 . 4 個綿羊品種褪黑激 素受體 1a 基因第二外顯子 PCRRFLP 分析 [J ]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 ,2020,22（ 2） : 105109 [14] Barrett P, Conway S, Jockers R, et al. Cloning and functional analysis of a polymorphic variant of the ovine Mel 1amelatonin receptor[J]. Biochimica etBiophysica Acta,1997,1356（ 3） : 299307 [15] ChuM X, Ji C L, Chen G H. Association between PCRRFLP of melatonin receptor 1a gene and high prolificacy in Small Tail Han sheep [J ]. Asian2Aust J Anim Sci,2020,16(12 ): 17011704MesserL A, LizhengWang, Tuggle C K, et al Mapping of the melatonin receptor 1a （ M TNR1A） gene in pigs, sheep, and cattle[J ]. Mammalian Genome, 1997, 8（ 5） :368370 [16] NotterD R,CockettN E,Hadfield T S. Evaluation of melatonin receptor 1a as a candidate gene influencing reproduction in an autumnlambing sheep flock [J ]. J Anim Sci,2020,81 4 :912917 [17] PelletierJ,BodinL,Hanocq E, et al. Association between expression of reproductive seasonality and alleles of the gene for Mel1a receptor in the ewe[J]. Biology of Reproduction,2020,62 4 : 10961101 致 謝 本實驗是在楊利國導(dǎo)師的悉心指導(dǎo)下順利完成的。 3． 2 MTNR1A 不同基因型對波爾山羊產(chǎn)羔數(shù)的影響 本研究結(jié)果顯示：在山羊樣本中，無論是頭胎還是經(jīng)產(chǎn)山羊，褪黑激素受體1A 不同的基因型對性狀的影響表現(xiàn)都為 AA＞ GG，由于受到樣本含量限制，該差異并未達到顯著水平，但是該結(jié)果初步揭示褪黑激素受體 1A 基因可能與山羊繁殖性狀相關(guān)，而該基因是 否能夠作為分子標(biāo)記應(yīng)用于山羊繁殖性狀標(biāo)記輔助選擇，則需進一步擴大樣本含量，增加品種個數(shù)進行驗證。 波爾山羊是引入品種 ， 平均窩產(chǎn)羔數(shù)為 頭 ，低于馬頭山羊。這可能與兩個品種的育成史有關(guān)。 在本研究所檢測的兩個山羊群體中，基因型頻率及基因頻率存在較大差異。 GG 177。標(biāo)準(zhǔn)誤 Least squares means177。 GG 177。標(biāo)準(zhǔn)誤 Least squares means177。 表 8 波爾山羊 MTNR1A 基因型對經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)羔數(shù)性狀的最小二乘均值及基因效應(yīng)分析 Table 8 Least squares means and allele substitution effects for litter size in multiparous boar goat 3 討論 3． 1 不同山羊品種基因型頻率及基因頻率差異 利用 熒光原位雜交方法和遺傳連鎖分析方法， 褪黑激素受體 1A 已經(jīng)在綿羊等多種動物中得到精細定位。 表 7 波爾山羊 MTNR1A 基因型對頭胎產(chǎn)羔數(shù)性狀的最小二乘均值及基因效應(yīng)分析 Table 7 Least squares means and allele substitution effects for litter size at first kidding in boar goat MTNR1A 基因型與 經(jīng)產(chǎn) 產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 由表 8可知，波爾山羊的 AA型經(jīng)產(chǎn)羔數(shù)比 GG 型多 只；加性效應(yīng)值為，顯性效應(yīng)值為 。 表 6 山羊 MTNR1A 基因 HinfⅠ酶切基因型和基因頻率分布表 Table 6 Genotype and allele frequencies of HinfⅠ RFLP for the Goat M TNR1A gene MTNR1A 基因型與波爾山羊頭胎產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 由表 7可知，波爾山羊的 AA基因純合型頭胎平均產(chǎn)羔數(shù)比 GG基因雜合型多品種 Breed 數(shù)量 N 基因型 Geype 基因型頻率 Geype frequency 等位基因頻率 Allele frequency 波爾山羊 65 AA A GG G 馬頭山羊 51 AA 1 A 1 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 16 只，加性效應(yīng)值為 ，顯性效應(yīng)值為 。 圖 2 波爾山羊酶切圖譜 注： M， pBR322/Msp 1 Marher； 1～ 13為酶切產(chǎn)物條帶 genotypes of the M TNR1A fragment defined by PCRRFLP 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 15 圖 3 馬頭山羊酶切圖譜 注： M， pBR322/Msp 1 Marher1～ 8為酶切產(chǎn)物條帶 genotypes of the M TNR1A fragment defined by PCRRFLP 褪黑激素基 因頻率和基因型頻率分析結(jié)果 分析兩種山羊品種的褪黑激素基因型頻率發(fā)現(xiàn)，在該酶切位點，馬頭山羊只出現(xiàn) AA 基因型，波爾山羊雖然出現(xiàn)兩種基因型，但 AA 型頻率高于 GG型。 在 197 bp 的擴增片段在 118bp 處存在另一 HinfⅠ酶切位點 ， 酶切后產(chǎn)生 118 bp和 79bp 片段 ， 其中波爾山羊在 118 處的酶切位點存在多態(tài)性 ， 酶切位點的存在與缺失產(chǎn)生 2 種基因型，分別命名為 AA 和 GG:AA （ 118bp /118 bp ） 、 GG（ 118bp /79bp ） ， 酶切圖譜見圖 2 ； 而馬頭山羊在 118 處的酶切位點則無多態(tài) 性 ， 基因型均為 AA型。 基因效應(yīng)分析： 加性效應(yīng) =（ GGAA） /2 顯性效應(yīng) =AG（ AA+GG） /2 2 結(jié)果與分析 PCR 擴增結(jié)果 擴增 波爾山 羊和馬頭山羊 基因組，產(chǎn)物用 %瓊脂糖凝膠電泳檢測，得到的片段與預(yù)期片斷大小一致（ 197bp），條帶清晰（圖 1），特異性高，滿足后續(xù)分析要求。 1. 拆下 電泳裝置，剝下聚丙烯酰胺凝膠，放到一個塑料盤內(nèi)，用雙蒸水沖漂洗2 次； 2. 加入 500ml 10％乙醇固定液，在搖床上固定 8～ 10 min，棄去反應(yīng)液； 3. 加入 500ml 1％ HNO3 氧化，在搖床上輕