【正文】 感謝在整個(gè)畢業(yè)設(shè)計(jì)期間和我密切合作的同學(xué)，和曾經(jīng)在各個(gè)方面給予過(guò)我?guī)椭幕锇閭?，在此，我再一次真誠(chéng)地向幫助過(guò)我的老師和同學(xué)致以感謝 ! 。這幾個(gè)月以來(lái)，季曉暉老師不僅在學(xué)業(yè)上給我以精心指導(dǎo)，同時(shí)還在思想給我以無(wú)微不至的關(guān)懷，在此謹(jǐn)向季曉暉老師致以誠(chéng)摯的謝意和崇高的敬意。每次遇到難題，我最先做得就是向季曉暉老師尋求幫助，而季曉暉老師每次不管忙或閑，總會(huì)抽空來(lái)找我面談，然后一起商量解決的辦法。同學(xué)們?cè)趯W(xué)習(xí)中的認(rèn)真熱情，生活上的熱心主動(dòng)，所有這些都讓我的四年充滿了感動(dòng)。感謝季曉暉、劉軍海、李志洲等老師和同學(xué)們?nèi)陙?lái)的關(guān)心和鼓勵(lì)。感謝我的家人對(duì) 我大學(xué)四年學(xué)習(xí)的默默支持 。此方法具有快速、簡(jiǎn)單、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可大黃中有效成分的分析與測(cè)定提供一定的參考價(jià)值。 圖 1 大黃素對(duì)照品液相色譜圖 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 第 9 頁(yè) 共 20 頁(yè) 圖 2 大黃樣品 1 液相色譜圖 圖 3 大黃樣品 2 液相色譜圖 線性關(guān)系考察 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照液 1 20 按上述色譜條件進(jìn)行液相色譜測(cè)定峰面積（ Y），以峰面積分別對(duì)各進(jìn)液量 (X)回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：大黃素 A=100C+ R178。5 ℃ 下干燥恒重并將大黃樣品粉碎后過(guò) 200 目篩，準(zhǔn)確稱取 1g 并加入 50mL 分析純氯仿加熱回流 120min，冷卻，蒸干氯仿，用 20%硫酸溶解殘?jiān)?，以色譜純甲醇定容至 50mL，用 針頭過(guò)濾器過(guò)濾，即制得樣品試液。 實(shí)驗(yàn)方法 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置 準(zhǔn)確稱取大黃素標(biāo)準(zhǔn)品 ，以色譜純甲醇溶解定容至 50mL 的濃度分別為 100μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，進(jìn)樣前以純甲醇稀釋并用 過(guò)濾 。 （ 2） 波長(zhǎng)的選擇 大黃中的蒽醌成分多屬于大黃素型和茜草素型 [27]，這兩類蒽醌衍生物主要為三取代和四取代蒽醌 [28]，研究表明用 254nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)曲線關(guān)系良好，因此選擇波長(zhǎng)為 254nm，考慮到分析速度和分離度，流動(dòng)相的流速為 。實(shí)驗(yàn)表明：隨著磷酸體積的增加各組分的保留時(shí)間也增加，但對(duì)分離度的影響不大。 （ 1）流動(dòng)相的選擇 本 次研究選擇大黃素為分析對(duì)象，這種大黃蒽醌類化合物均為極性化合物，固選擇以甲醇為流動(dòng)相，用微柱高效液相色譜進(jìn)行分離。 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 實(shí)驗(yàn)儀器 Agilent 1200 高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司） 色譜柱 250mm， 5μm基本系統(tǒng)包括快速高分離液相系統(tǒng)、二元液相系統(tǒng)、四元液相系統(tǒng)、單元液相系統(tǒng)、純化系統(tǒng)、 HPLCChip/MS 系統(tǒng)、納流液相系統(tǒng)、毛細(xì)液相系統(tǒng)，檢測(cè)分為二極管陣列檢測(cè)器 SL、熒光柱檢測(cè)器、多波長(zhǎng)檢測(cè)器 SL、示差折光檢測(cè)器、可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、多波長(zhǎng)檢測(cè)器 SL， DGG9140B 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)有限公司），電熱恒溫水浴鍋 (北京科偉興漢有限公司 )，電熱套（北京科偉永興儀器有限公司） ， AL204IC 型電子天平 (日本 AND)， FW177 型中草藥粉碎機(jī) (津泰斯特儀器有限公司 ） 試劑 大黃素標(biāo)準(zhǔn)品（購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司，純度 ≥98％ ）。黎艷 [26]等人利用毛細(xì)管電色譜法也成功分離出大黃中大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚這四種有效成分。 Li[25] 等人用微乳膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法，用磷酸鹽的緩沖溶液也分離出大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素和大黃酚。 Sheu 等 [23]人用毛細(xì)管電泳法不但成功分離出上述三種蒽醌甙元，而且還分離出了番瀉甙 A 與番瀉甙 B。 這項(xiàng)方法為近年來(lái)發(fā)展最快的一種分離分析技術(shù)，具有分離效率高、分析速度快和樣品用量少等特點(diǎn)，尤其適用于藥味較多、化學(xué)成分較復(fù)雜的中藥復(fù)方化學(xué)成分的分析。 與上面的 3 種方法相比高效液相色譜法具有高壓、高效、高靈敏度、應(yīng)運(yùn)范圍廣、分析速度快、載液流速快的特點(diǎn)，高效液相色譜法是在中藥有效成分分析中用的最多也是比較成熟的方法。 Liu 等 [21]人把計(jì)算機(jī)輔助軟件 Dry Lab 運(yùn)用于反相高效液相色譜分離大黃中五種羥基蒽醌衍生物的實(shí)驗(yàn)中，成功模擬出了五種化合物保留時(shí)間與梯度洗脫條件之間的模型，并優(yōu)化出分離測(cè)定的最佳條件，在此條件下通過(guò)對(duì)兩種不同產(chǎn)地的大黃樣品的測(cè)定，成功找出了萃取效率最高的樣品制備方法。袁萍、周東斌 [19]等人用高速逆流色譜法 成功的分離并測(cè)定出了大黃中大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚和蘆薈大黃素這五種蒽醌衍生物的含量。何麗一 [17]等在硅膠 G 薄 層上用四種不同展開(kāi)劑分離了大黃中大黃酚、大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素及大黃素甲醚這五種蒽醌甙元。吸附劑載體最常用的是硅膠 G、硅膠 GF、硅膠 H，其次有硅藻土、氧化鋁 和聚酰胺等。 柱色譜的主要優(yōu)點(diǎn)是相對(duì)的低成本和可處理的固定相，后者可以避免重復(fù)利用的交叉污染和固定相的分解。大 黃酚和大黃素甲醚結(jié)構(gòu)相似，極性相近，用一般層析方法很難分離，李軍林 [14]等人用柱層硅膠，石油醚作洗脫劑制備性分離出大黃素甲醚和大黃酚，并與纖維素柱層析進(jìn)行了比較。 大黃有效成分的分離及含量測(cè)定方法 大黃中有效成分的分離測(cè)定常用方法有如下： （ 1） 紙色譜法 紙色譜法又叫紙層析法， 它適用于一些精度不高的分析， 蘇學(xué)良 [13]等人用紙層法研究了蒽醌衍生物的紙上層析取得了一定的進(jìn)展，由于紙色譜法分離效率較低，所以逐漸被其它層析方法所代替。 除上述三種主要方法外，還有通過(guò)吸附脫附法 [12]提取分離大黃蒽醌甙成分的研究報(bào)道。茍奎斌 [11]等人把超臨界萃取法用于首烏喘息靈膠囊中大黃素的定量測(cè)定中，用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選超臨界萃取工藝，并用反相高效液相色譜法進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果快速、準(zhǔn)確而且效率較高。 （ 3） 超臨界萃取法 超臨界流體萃取分離過(guò)程的原理是利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關(guān)系，即利用壓力和溫度對(duì)超臨界流體溶解能力的影響而進(jìn)行的， 借助于處于超臨界條件下的流體所具有的高溶解性，使天然植 物中的許多成分溶解在超臨界流體中，操作過(guò)程中采用降壓的方法，將溶解到超臨界流體中的溶質(zhì)“脫溶”，從而達(dá)到分離的目的。當(dāng)大量的超聲波微作用于介質(zhì)時(shí)介質(zhì)會(huì)被撕裂成多個(gè)小空穴，這些空穴瞬間閉合會(huì)產(chǎn)生高達(dá)幾千個(gè)大氣壓的瞬間壓力，壓力將植物組織中細(xì)胞破裂瞬間完成以利于溶劑浸透到植物細(xì)胞內(nèi)部，使細(xì)胞中的有效成分溶于溶劑中。所用溶劑多以水和乙醇為主， 提取方法分為冷浸法和熱提法。溶劑提取法提取大黃是將大黃樣品用適當(dāng)溶劑于索氏提取器中回流提取至無(wú)色， 減壓除去溶劑后進(jìn)行氧化、水解、用氯仿等有機(jī)溶劑多次提取經(jīng)處理后所生成的全部蒽醌甙元， 然后進(jìn)行分離以及含量測(cè)定。大黃中有效成分的提取方法主要有溶劑提取法、 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 第 6 頁(yè) 共 20 頁(yè) 超聲提取法和超臨界萃取法。還可引起性腺退化及萎縮，使妊娠大鼠死胎率增加，胎仔體重受抑制，但未見(jiàn)胎仔畸形，孕婦慎用。 （ 13） 毒性作用 生大黃，尤其是鮮大黃服用過(guò)量可引起惡心、嘔吐、腹痛、頭暈。同時(shí)對(duì) D半乳糖所致小鼠亞急性衰老模型記憶減退有較好的改善作用，還能明顯延長(zhǎng)果蠅的平均壽命和最高壽命。 （ 12） 抗衰老 大黃在抗衰老方面有很大的藥用價(jià)值。 （ 11） 對(duì)泌尿系統(tǒng)的影響 大黃素能抑制腎小管細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞的增殖。 （ 10） 免疫抑制作用 大黃能抑制紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生。有報(bào)道稱大黃抗腫瘤 作用主要是通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增生、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞色素 P450lAl(CYPlAl)和抗突變作用，以及抑制 N乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性實(shí)現(xiàn)的。 （ 8） 隆血脂作用 大黃可使蛋黃及高脂飼料誘導(dǎo)的高脂血癥的小鼠血清及肝臟膽固醇、甘油三酯和過(guò)氧化脂質(zhì)明顯降低，其有效成分可能是蒽醌類、兒茶素類及多糠。止血有效成分是大黃酚、大黃素甲醚及沒(méi)食子酸等。改善血管脆性，使纖維蛋白原增加，降低抗凝血酶Ⅲ的活性，使血管收縮活動(dòng)增加，促進(jìn)骨體制造血小板．因而促進(jìn)血液凝固。對(duì)危重癥患者胃腸功能衰竭也有防治作用。 （ 6） 對(duì)胃和十二指腸的影響 大黃對(duì)大鼠應(yīng)激性及幽門結(jié)扎性胃潰瘍均有治療和防止出血作用，作用類似于甲氰咪呱。大黃還能促進(jìn)胰液分泌，在模擬胃腸道條件下，對(duì)胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶的活性均有明顯的抑制作用，但對(duì)胃蛋白酶無(wú)影響。 （ 5） 對(duì)胰腺分泌及其消化酶的影響 大黃對(duì) TNFα(腫瘤壞死因子 )作用下的胰腺組織具有保護(hù)作用。同時(shí)大黃還能使膽紅素和膽汁酸的含量增加。 （ 4） 保肝利膽作用 Arosio 等發(fā)現(xiàn)，蘆薈大黃素對(duì) CCL 所致的小鼠急性肝損害有保護(hù)作用，不僅能阻止肝細(xì)胞的死 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 第 5 頁(yè) 共 20 頁(yè) 亡，而且對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化引起的炎癥反應(yīng)也有保護(hù)作用。結(jié)果表明，大黃對(duì) MDA 呈明顯抑制作用，且抑制作用有明顯的量效關(guān)系。 （ 3） 抗炎作用 大黃能清除組織和血漿內(nèi)的炎性介質(zhì)，顯著降低危重癥患者血清中腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素和內(nèi)毒素水平。其抑菌的有效成分為蒽醌衍生物，其中大 黃酸、大黃素、蘆薈大黃素的作用最強(qiáng)。因此體弱虛弱者或婦女胎前產(chǎn)后均應(yīng)慎用。 （ 1） 瀉下作用 大黃瀉下作用確切，大黃瀉下的有效成分為蒽醌類和二蒽酮類以及它們的苷類，而主要瀉下成分為二蒽酮類化合物 — 番瀉苷，但現(xiàn)代研究還表明，大黃中還存在其它一些未知的瀉下成分。歷代本草均有收載：《千金方》稱大黃為錦文大黃；《吳普本草》稱大黃為黃良；李當(dāng)之《藥錄》稱其為將軍；而《中藥材手冊(cè)》 則稱之為川軍，藏語(yǔ)叫“君木扎”。在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中應(yīng)用已久，始載于我國(guó)現(xiàn)存最早的藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》，因其色黃，故名。大黃素甲醚是保護(hù)性殺菌劑，