【正文】 3 100 1:0 4 1 50 1:0 5 1 80 1:2 6 1 100 1:1 7 2 50 1:1 8 2 80 1:0 9 2 100 1:2 由表 4 可得最佳條件為 A（ 2h） B(100) C(氯仿比乙醇 1:2)，在此條件下大黃素的分離效果最好 3 結(jié)論 通過查閱資料，本文建立了一個(gè)通過高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定藥用大黃中大黃素的方法，通 過實(shí)際樣品的測(cè)定得出大黃素在 時(shí)得到分離，與參考資料比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較接近，得到了預(yù)期的效果，驗(yàn)證了此方法的可行性。 同時(shí)，本片畢業(yè)論文的寫作也得到了郭衛(wèi)國(guó)、任瑞妮等同學(xué)的熱情幫助。 樣品的配置 在 60177。國(guó)內(nèi)宗 玉英等 [22]人建立了利用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法分離和測(cè)定大黃中大黃素、蘆薈大黃素和大黃酸含量的方法。（ 2） 柱色譜 法 柱色譜法 又稱柱層析，固定相裝于柱內(nèi)，流動(dòng)相為液體，樣品沿豎直方向由上而下移動(dòng)而達(dá)到分離的色譜法。 大黃有效成分的分析與測(cè)定 大黃中有效成分的提取方法 有效成分的量的多少， 與提取方法有很大關(guān)系。也有報(bào)道，大黃對(duì)正常人的凝血功能無明顯的影響。臨床應(yīng)用大黃可以抑制 MDA 生成，減輕組織器官損傷，防止病情惡化。大黃素甲醚是高活性植物源殺菌劑，以天然植物大黃為原料，經(jīng)精心提取其活性成分，加工研制而成，對(duì)白粉病、霜霉病、灰霉病、炭疽病等有很好的防治效果，對(duì)人畜 低毒，對(duì)環(huán)境友好，特別適合于綠色和有機(jī)蔬菜生產(chǎn)。蘆薈大黃素對(duì)金黃色葡萄球菌的核酸和蛋白質(zhì)合成有較強(qiáng)的抑制作用。它對(duì)很多細(xì)菌如各種葡萄球菌、溶血性鏈球菌、白喉?xiàng)U菌、霍亂孤菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、皮膚真菌、枯 草桿菌、草分枝桿菌、淋球菌、炭宜桿菌、草狀菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌等均有抑制作用，其中對(duì)葡萄球菌、淋球菌、鏈球菌更為有效。 （ 4） 解痙、止咳作用 大黃素對(duì)乙酰膽堿所致離體大鼠腸管的痙攣有很強(qiáng)的抑制作用，約為罌栗堿的 4 倍。在轉(zhuǎn)錄水平上 ,報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)得出大黃酸與 RXR 結(jié)合能分別抑制 RXR 同源 二聚體、 RXR/TR3 和 RXR/RAR 異源二聚體的轉(zhuǎn)錄活性。大黃酸對(duì)金黃色葡萄球菌的核酸和蛋白質(zhì)合成有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)無細(xì)胞系統(tǒng) DNA 的生物合成也有抑制作用。目前，大黃蒽醌的測(cè)定方法主要有電化學(xué)法、光度法和色譜法，而高效液相色譜是最快捷最有效的測(cè)定方法。 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 畢業(yè)論文 論文題目 藥用大黃莖葉中有效成分的分析與測(cè)定 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）原創(chuàng)性聲明和使用授權(quán)說明 原創(chuàng)性聲明 本人鄭重承諾：所呈交的畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文），是我個(gè)人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的成果。本文采用了高效液相色譜法來測(cè)定大黃中大黃素、大黃酸這兩種大黃蒽醌，相比傳統(tǒng)液相色譜分析，該方法能準(zhǔn)確簡(jiǎn)便的測(cè)定出大黃中的蒽醌類衍生物，大大節(jié)省了分析時(shí)間，為我國(guó)大黃科學(xué)研究提供一定的科學(xué)依據(jù)。 （ 3） 免疫抑制作用 大黃酸能抑制生物體抗體產(chǎn)生，抑制碳粒廓清能力，減輕免疫器官的重量，降低白細(xì)胞數(shù)。研究結(jié)果表明 ,大黃酸的作用靶點(diǎn)是 RXR，它對(duì)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用是通過抑制 RXR 的轉(zhuǎn)錄激活來實(shí)現(xiàn)的。大黃素還有明顯的止咳作用。本品對(duì)真菌、病毒、原蟲也有效。蘆薈大黃素對(duì)臨床常見厭氧性細(xì)菌有較強(qiáng)的抑制作用，其中對(duì)常見脆弱桿菌能抑制 90％～ 100％ 菌株生長(zhǎng) ,其 MIC 略高于甲硝唑。大黃素甲醚是保護(hù)性殺菌劑，誘導(dǎo)作物產(chǎn)生保衛(wèi)反應(yīng)，抑制病原菌孢子萌發(fā)、菌絲的生長(zhǎng)、吸器的形成，使得作物免受病原菌的侵害，達(dá)到防病的效果。 （ 4） 保肝利膽作用 Arosio 等發(fā)現(xiàn)，蘆薈大黃素對(duì) CCL 所致的小鼠急性肝損害有保護(hù)作用，不僅能阻止肝細(xì)胞的死 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 第 5 頁 共 20 頁 亡，而且對(duì)脂質(zhì)過氧化引起的炎癥反應(yīng)也有保護(hù)作用。 （ 8） 隆血脂作用 大黃可使蛋黃及高脂飼料誘導(dǎo)的高脂血癥的小鼠血清及肝臟膽固醇、甘油三酯和過氧化脂質(zhì)明顯降低，其有效成分可能是蒽醌類、兒茶素類及多糠。大黃中有效成分的提取方法主要有溶劑提取法、 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 第 6 頁 共 20 頁 超聲提取法和超臨界萃取法。大 黃酚和大黃素甲醚結(jié)構(gòu)相似，極性相近，用一般層析方法很難分離，李軍林 [14]等人用柱層硅膠，石油醚作洗脫劑制備性分離出大黃素甲醚和大黃酚，并與纖維素柱層析進(jìn)行了比較。 Sheu 等 [23]人用毛細(xì)管電泳法不但成功分離出上述三種蒽醌甙元，而且還分離出了番瀉甙 A 與番瀉甙 B。5 ℃ 下干燥恒重并將大黃樣品粉碎后過 200 目篩，準(zhǔn)確稱取 1g 并加入 50mL 分析純氯仿加熱回流 120min，冷卻，蒸干氯仿，用 20%硫酸溶解殘?jiān)陨V純甲醇定容至 50mL，用 針頭過濾器過濾，即制得樣品試液。感謝在整個(gè)畢業(yè)設(shè)計(jì)期間和我密切合作的同學(xué)，和曾經(jīng)在各個(gè)方面給予過我?guī)椭幕锇閭?，在此，我再一次真誠地向幫助過我的老師和同學(xué)致以感謝 ! 。 圖 1 大黃素對(duì)照品液相色譜圖 陜西理工學(xué)院畢業(yè)論文 第 9 頁 共 20 頁 圖 2 大黃樣品 1 液相色譜圖 圖 3 大黃樣品 2 液相色譜圖 線性關(guān)系考察 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照液 1 20 按上述色譜條件進(jìn)行液相色譜測(cè)定峰面積（ Y），以峰面積分別對(duì)各進(jìn)液量 (X)回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：大黃素 A=100C+ R178。 Li[25] 等人用微乳膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法，用磷酸鹽的緩沖溶液也分離出大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素和大黃酚。 柱色譜的主要優(yōu)點(diǎn)是相對(duì)的低成本和可處理的固定相，后者可以避免重復(fù)利用的交叉污染和固定相的分解。溶劑提取法提取大黃是將大黃樣品用適當(dāng)溶劑于索氏提取器中回流提取至無色， 減壓除去溶劑后進(jìn)行氧化、水解、用氯仿等有機(jī)溶劑多次提取經(jīng)處理后所生成的全部蒽醌甙元， 然后進(jìn)行分離以及含量測(cè)定。有報(bào)道稱大黃抗腫瘤 作用主要是通過抑制腫瘤細(xì)胞的增生、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞色素 P450lAl(CYPlAl)和抗突變作用，以及抑制 N乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性實(shí)現(xiàn)的。同時(shí)大黃還能使膽紅素和膽汁酸的含量增加。在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中應(yīng)用已久，始載于我國(guó)現(xiàn)存最早的藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》，因其色黃，故名。 （ 3） 免疫抑制作用 蘆薈大黃素能抑制生物體抗體產(chǎn)生，抑制碳粒廓清能力，減輕免疫器官的重量，降低白細(xì)胞數(shù)，降低腹腔巨噬細(xì)胞功能 。近代臨床幾乎各科都用，如治療乙型腦炎與腮腺炎、傷寒、痢疾、尿路感染、淋病、肺炎、蜂窩組織炎、化膿性皮膚病、中耳炎、脈管炎等，和其他藥物配伍治療急性及亞急性闌尾炎、燒傷、小兒麻痹、濕疹及若干真菌引起的皮膚感染，另外可治療肝炎、蟯蟲、口腔炎、口唇潰瘍、消化不良、高血壓和動(dòng)脈硬化等，因此，大黃素在臨床上應(yīng)用極 廣。大黃素還有降壓作用。目前國(guó)內(nèi)已有單體大黃酸作為一類新藥已被國(guó)家科技部列為“十五”國(guó)家重大科技專項(xiàng)，旨在確證臨床療效、體內(nèi)和體外活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，按照國(guó)家藥品監(jiān)督管理局有關(guān)中藥一類新藥的要求，完成臨床前研制工作，并在獲得臨床研究批文的基礎(chǔ)上，完 成臨床研究和取得新藥證書。 （ 5） 瀉下作用 大黃酸本身無瀉下作用，其腸內(nèi)菌轉(zhuǎn)化產(chǎn)物大黃酸蒽酮有瀉下活性，能夠降低結(jié)腸對(duì)鈉和氯離子的吸收，增加鉀離子分泌。在中國(guó)地區(qū)的文獻(xiàn)里，“大黃”指的往往是馬蹄大黃，大黃栽培種主要為掌葉大黃（ ），次為唐古特大黃（ ）和藥用大黃（ ）。對(duì)本研究提供過幫助和做出過貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意 。 、圖表要求： 1）文字通順，語言流暢，書寫字跡工整，打印字體及大小符合要求，無錯(cuò)別字，不準(zhǔn)請(qǐng)他人代寫 2）工程設(shè)計(jì)類題目的圖紙，要求部分用尺規(guī)繪制，部分用 計(jì)算機(jī)繪制，所有圖紙應(yīng)符合國(guó)家技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。 （ 2） 抗菌活性 在 ~25mg/mL 深度，大黃酸對(duì)葡萄球菌、鏈球菌、白喉?xiàng)U菌、枯草桿菌、副傷寒桿菌、痢疾桿菌等均有抑制作用。在更詳細(xì)的分子機(jī)理研究中發(fā)現(xiàn)， 9cisRA 能減輕大黃酸對(duì)肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制。 （ 3） 免疫抑制作用 按 70mg/kg 劑量給大鼠腹腔注射大黃素，能夠抑制大鼠抗體產(chǎn)生、抑制碳粒廓清能力、減輕免疫器官的重、降低白細(xì)胞數(shù)、降低腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。大黃素被吸收后，由腎排出大黃酚，它能使酸性尿變成棕黃色，使堿性尿變成紫紅色。對(duì)金黃色葡萄球菌 209P、 大腸桿菌、福氏痢疾桿菌在體外抑菌濃度分別為 、 600mg／ L 其抗菌作用均為抑菌而非殺菌。 大黃素甲醚 大黃素甲醚又名朱砂蓮乙素、非斯酮，金黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為 203℃ ～ 207℃ ,幾乎不溶于水，微溶于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、氯仿、 乙醚、丙酮、冰醋酸、氫氧化鈉及熱碳酸鈉溶液，極微溶于石油醚。郭昌燕等應(yīng)用富含脂質(zhì)過氧化物 — 丙二醛 (MDA)的鼠肝與中藥大黃孵育，觀察大黃對(duì) MDA 的影