【正文】 黃酮和黃酮醇 MS中的主要裂解方式。可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置是否含有羥基。 4. 掌握黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇、異黃酮和查耳酮的 UV光譜和 NMR譜特征；黃酮和黃酮醇 MS中的主要裂解方式 5. 掌握 UV光譜和 NMR光譜在測定黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中的應(yīng)用 第一百一十頁，共一百一十一頁。 酸性： CADB C A D B 第一百零九頁，共一百一十一頁。 黃酮 C15H10O2 黃酮醇 C15H9O3 二氫黃酮 C15H12O2 二氫黃酮醇 C15H11O3 OOO H第一百零五頁，共一百一十一頁。 UV λmax(nm) ?MeOH 267,296, 336 ?NaOMe 275,324, 376 ? 帶 I紅移 376336=40, 4’ OH ?NaOAc〔未〕 276,301, 392 ? 帶 II紅移 276267=9, 7OH ?AlCl3 276,301, 348,384 ?AlCl3/HCl 276,302, 350,381 ? AlCl3= AlCl3/HCl，結(jié)構(gòu)中無鄰二酚羥基 ? MeOH≠AlCl3/HCl，帶 I紅移 381336=45， 5OH ?NaOAc/H3BO3 268, 338 ? 與 MeOH根本相同，結(jié)構(gòu)中無鄰二酚羥基 OOO HO HO H第一百零三頁，共一百一十一頁。 〔 2〕 黃酮醇類質(zhì)譜 主要按途徑－ Ⅱ 進行 M+ 〔 基峰 〕 ， 105〔 B2+〕 ， 77〔 B2+ － CO〕 上述兩種根本裂解途徑是相互競爭 ， 相互制約的 ， 且B2+ ， B2 +－ CO的離子豐度與 A1+， B1+ 及 A1+ CO的豐度互成反比 。 H 黃酮類化合物根本裂解 第九十九頁，共一百一十一頁。 五、質(zhì)譜在黃酮類結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用 黃酮類化合物主要有以下兩種根本裂解途徑： 途徑 I〔 RDA裂解〕： B 1ABCH C+A 1OC OBAMOO裂解規(guī)律 1．分子離子峰為基峰 — 用于測定分子量。 第九十五頁，共一百一十一頁。 A環(huán)上引入取代基時，位移效應(yīng)只影響到 A環(huán)，而 B環(huán)上引入取代基時，位移效應(yīng)只影響到 B環(huán)。 C=O C2（或 Cβ） C3（或 Cα） 歸屬 ~(s) ~(d) ~(s) 異橙酮類 ~(s) ~(s) ~(d) 黃酮類 ~(d) ~(s) 異黃酮類 (s) (d) 黃酮醇類 ~(s) ~(s) ~(d) (=CH) 橙酮類 ~(s) ~(d) ~(d) 查耳酮類 ~(d) ~(t) 二氫黃酮類 (d) (d) 二氫黃酮醇 第九十一頁，共一百一十一頁。 〔 2〕甲氧基質(zhì)子 OCH3 一般在 ～ (3H s) 〔 3〕 6及 8CCH3質(zhì)子 6及 8CCH3 ～ 其中 6位 CH3質(zhì)子的化學(xué)位移較 8位 CH3質(zhì)子小 。 4. 查耳酮 d , ? 7 . 3 7 . 7 , J = 1 7 H zd , ? 6 . 7 7 . 4 , J = 1 7 H z??O s , ? 6 .5 6 .7 6 .3 7 6 .9 4 (D M S O d 6 )OC HO第八十七頁，共一百一十一頁。 H2 (S) 第八十四頁，共一百一十一頁。2 39。2 39。 ? 橙酮類 (～ , d)； ? 黃酮類 (～ , d)。 H2‘ , H6‘ ～ (d, J=7～ 9Hz) 與 C環(huán)有關(guān)，據(jù)此可判斷 C環(huán)氧化程度。3 39。 H 5 ? 7 .7 8 .2 (d , J= 9 H z )H 6 ??6 .4 7 .1?(d d , J= 9 , 2 .5 H z ) H 8 ? 6 .8 7 .0 (d , J= 2 .5 H z ) 5OOH O68第七十七頁，共一百一十一頁。 第七十五頁，共一百一十一頁。 形成絡(luò)合物越穩(wěn)定，紅移越多。 說明： 1〕 +NaOMe〔堿性強〕 , 所有酚 OH解離，紅移 另有有 3,4’ OH或 3,3’ ,4’ OH時，在 NaOMe作用下易氧化破壞，故峰有衰減。 第六十八頁，共一百一十一頁。 查耳酮：帶 Ⅱ 位于 220～ 270 nm； 帶 Ⅰ 位于 340～ 390 nm； 橙酮：常顯現(xiàn) 3～ 4個吸收峰，但主要吸收峰一般位 于 370～ 430 nm。 帶 Ⅱ 的峰位主要受 A環(huán)氧取代程度的影響，但 B環(huán)的取代基可影響它的形狀。 第六十三頁，共一百一十一頁。 ２〕聚酰胺層析 適用范圍廣，可別離含游離酚羥基或其苷類。 第四節(jié) 黃酮類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)測定 目前主要采用的方法有： ①色譜方法 與標準品或與文獻對照 PPC或 TLC得到的 Rf ②化學(xué)鑒別反響 顯色、鉛鹽沉淀 ③光譜方法 UV光譜：分析比照樣品在甲醇溶液中及參加酸、堿或金屬鹽類試劑后 UV光譜的變化 1HNMR、 13CNMR、 MS 第五十九頁，共一百一十一頁。 〔三〕根據(jù)分子中某些特定官能團進行別離 〔 1〕醋酸鉛沉淀法 一般酚羥基的成分可被堿式醋酸鉛沉淀，但有鄰二酚羥基的成分可被醋酸鉛沉淀，據(jù)此可將兩類成分別離。 黃酮苷類 —— 分子篩作用 洗脫順序：分子大 小。 查耳酮 二氫黃酮 〔 4〕不同黃酮母核被吸附強弱：黃酮醇 黃酮 二氫黃酮醇 異黃酮 〔 5〕與介質(zhì)的關(guān)系：吸附力 水〔中〕 甲醇、乙醇〔濃度 由低到高〕 丙酮 堿性溶劑 甲酰胺 DMF 尿素水 洗脫規(guī)律：與吸附規(guī)律正好相反，即吸附能力越強，越難洗脫 第五十四頁，共一百一十一頁。 —— 制備別離 洗脫劑：常用水 乙醇 水可洗下非黃酮的水溶性成分及少數(shù)黃酮 苷； 10%30%醇可洗下黃酮苷； 5095%乙醇可 洗下黃酮苷元 各種溶劑在聚酰胺柱上洗脫能力由 弱至強 依次為： 水，甲醇，丙酮，氫氧化鈉水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液 第五十三頁，共一百一十一頁。 第五十一頁，共一百一十一頁。 3． 炭粉吸附法 適用于苷類的精制工作。 第四十八頁，共一百一十一頁。 多用 CHCl Et2O、 EtOAc等極性較小有機溶劑提取 對于多 OCH3化的成分，用苯、石油醚提??； 對于極性大的成分，如查耳酮、橙酮、雙黃酮、羥基黃酮等，用 EtOAc、 EtOH、 Me2CO、 MeOH等溶劑提取。 乙液：硼酸 氯化鉀 氫氧化鉀緩沖液 () 第四十四頁，共一百一十一頁。 (五 )與五氯化銻的反響 查耳酮的 CCl4溶液 —— 紅或紫紅沉淀 黃酮、黃酮醇、二氫黃酮類 —— 黃 橙黃色。 1. 二氫黃酮類 易在堿液中開環(huán)，轉(zhuǎn)變成相應(yīng)異構(gòu)體 (查耳酮類化合物 )，顯橙 紅色。 〔三〕硼酸顯色反響 當黃酮類化合物分子中適當位置上有羥基時，在無機酸或有機酸存在條件下，可與硼酸反響生成六元環(huán)絡(luò)合物，呈亮黃色 條件： 1 具有以下結(jié)構(gòu)〔 5羥基黃酮， 2’ 羥基查耳酮〕 2 有無機酸或有機酸存在 在草酸存在下，顯黃色并帶綠色熒光。 1. 鋁鹽 常用試劑： 1%AlCl3或 Al(NO3)3 生成絡(luò)合物為 黃色 (?max=415nm)，并有熒光。 四、顯色反響 (一 )復(fù)原反響 1. 鹽酸 鎂粉〔鹽酸 鋅粉〕反響 —— 鑒定 黃酮、黃酮醇及二氫黃酮、二氫黃酮醇 —— 〔＋〕 橙紅 紫紅色 B環(huán)有 OH或 OCH3取代時，顏色隨之加深 查耳酮、橙酮、兒茶素 —— 〔－〕 但遇濃 HCL色變，需做空白對照 異黃酮 —— 個別陽性，大多陰性 第三十七頁，共一百一十一頁。 〔 2〕堿性 吡喃酮上的 1位氧原子上有未共用電子對，表性微弱的堿性。 酸性規(guī)律 a、 7， 4‘ OH酸性強于其他位置羥基的酸性〔處于羰基對位，羰基的共軛誘導(dǎo)〕。 羥基甲基化〔 OCH3〕 , 水溶度降低。 二 . 溶解性 符合苷的溶解性規(guī)律。 3. 顏色： ①分子中是否存在交叉共軛體系 ②助色團的數(shù)目與位置 色原酮局部原本無色，但在 2位引入苯環(huán)后，即形成交叉共軛體系，且通過電子的轉(zhuǎn)移，重排，使共軛鏈延長，而表現(xiàn)出顏色。 3. 抗炎 蘆丁、羥乙基蘆丁、二氫槲皮素等 4. 抗菌及抗病毒作用 黃芩苷：抗菌 山奈酚：抗病毒 5. 解痙作用 異甘草素、大豆素：解除平滑肌痙攣； 6. 雌性激素樣作用 大豆素等異黃酮具有雌性激素樣作用 可能與它們與己烯雌酚結(jié)構(gòu)類似有關(guān) 7. 去除人體自由基作用 8. 抗腫瘤作用 第二十九頁，共一百一十一頁。 I S O M E R A S EOO HO HH OO H OO H[ O ]OO HO HH OO H OOOO HO HH OO H OO H[ O ]OO HO HH OO H OO HO HO HH OO H O第二十七頁，共一百一十一頁。 11．雙苯吡酮類 根本母核由苯環(huán)與色原酮的２， 3位駢