蛋白質(zhì)分子量測定方法研究進(jìn)展-wenkub.com
2025-08-13 00:58 本頁面
【正文】 分子量也是多肽、蛋白質(zhì)等鑒定中首要的參數(shù)，也是基因工程產(chǎn)品報(bào)批的重要數(shù)據(jù)之一，在實(shí)驗(yàn)過程中，要根據(jù)蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)特點(diǎn)，選擇合理的測定方法對蛋白質(zhì)進(jìn)行分子質(zhì)量的測定。 主要基于染料陰離子在蛋白質(zhì)等電點(diǎn)前與肽鏈上帶正電荷的基團(tuán)上的結(jié)合作用。高能射線照射生物組織會(huì)產(chǎn)生電離作用，若在一定范圍內(nèi)輻射能量破壞蛋白質(zhì)分子的 CH鍵，使蛋白質(zhì)喪失功能，電離作用減少。 在一種理想溶液中，滲透壓與溶質(zhì)濃度成正比。通過測定高聚物 稀溶液 粘度隨濃度的變化，即可計(jì)算出其平均分子量 (粘均分子量 )。 缺點(diǎn)： 在與高效液相色譜、毛細(xì)管電泳等分離設(shè)備的聯(lián)用時(shí)，目前只能采取離線的方式，致使分析結(jié)果的重復(fù)性較差，與MALDIMS 本身高精密度的特性不匹配。 （ MALDIMS） 原理： 基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜技術(shù)（ MALDIMS）是將待測物懸浮或溶解在一個(gè)基體中，基體與待測物形成混晶，當(dāng)基體吸收激光的能量后，均勻傳遞給待測物，使待測物瞬間氣化并離子化。 可準(zhǔn)確測定分子量 （ ESIMS） 原理： 電噴霧離子化質(zhì)譜技術(shù)（ ESIMS）是在毛細(xì)管的出口處施加一高電壓，所產(chǎn)生的高電場使從毛細(xì)管流出的 液體霧化成細(xì)小的帶電液滴 ，隨著溶劑蒸發(fā)，液滴表面的電荷密度逐漸增大，最后 液滴崩解為大量帶一個(gè)或多個(gè)電荷的離子，致使分析物以單電荷或多電荷離子的形式進(jìn)入氣相的質(zhì)譜技術(shù) 。 ? 缺點(diǎn)： 應(yīng)用具有一定的局限性，在 pH6— 8的范圍內(nèi)，線性關(guān)系比較好，但在極端 pH時(shí)，一般蛋白質(zhì)有可能因變性而偏離。 SDSPAGE凝膠電泳 凝膠滲透層析法 定義：又叫體積排阻層析、分子篩層析，當(dāng)生物大分子通過裝有凝
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