多糖分子量測(cè)定ppt課件-wenkub.com
2025-05-09 07:36 本頁(yè)面
【正文】 Kav對(duì) lgM作圖 ， 得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) （ 圖2） 。 由各種標(biāo)準(zhǔn)糖的 Ve值計(jì)算對(duì)應(yīng) Kav， 在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙 上畫(huà)出 Kav對(duì) lgM的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 。 (2)取上清液 ， 由注射器相繼進(jìn)樣 ， 進(jìn)樣量 20μ L。 當(dāng)然也可以不用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) ， 而用線(xiàn)性回歸求得分子量 。這種色譜法，樣品分子與固定相凝膠之間無(wú)相互作用，完全是按分子篩原理分離。 第 4章 多糖的干燥和純度鑒定 (3)以百分濾過(guò)量對(duì)分子量作圖得出三種膜的三條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 圖 7— 1超過(guò)濾測(cè) KS2分子量 在 PM10上 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) ． ﹎﹎ 在 XM50上 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) ， ____ 在 XM110A上 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) ． 50％ 濾過(guò)量 ， 口 Ks2的百分濾過(guò)量。 這樣大小的粒子可以是溶液中的大分子或膠體溶液中的膠懸體 ， 因此超過(guò)濾又名分子過(guò)濾 。 為了柱流量的足夠精確測(cè)定 ， 可采用稱(chēng)重試管 ， 并測(cè)定總的流出重量 。 Kav， Kd及其他凝膠過(guò)濾參數(shù)與球狀蛋白和糖胺聚糖分子量之間的經(jīng)驗(yàn)關(guān)系式已經(jīng)建立 。 (3)以蒸汽蒸餾法將氨蒸出并吸收于一定體積 (VHCL,)的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸中 。 [試劑 ] O． 4 mol／ L醋酸 ， O． 8 mol／ L氰化鉀溶液 ， 20％ 氫氧化鈉溶液 ， O． 01 mol／ L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸 ， O． 01 mol／ L的標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉 。 用硫代硫酸鈉溶液滴定測(cè)定龍膽二糖 ， 每毫升 5mol／ L的硫代硫酸鈉相當(dāng)于 mg龍膽二糖 ， 因此樣品 (右旋糖酐 )的分子量 : M=() 式中 W樣品的取量 (mg)； V滴定時(shí)用去的 O． 002 5％ mol／ L的硫代硫酸鈉體積(mL)(空白對(duì)照滴定值減去樣品滴定值 )。 第 4章 多糖的干燥和純度鑒定 [操作 ] (1)精確稱(chēng)取樣品 1～ 2 g， 用蒸餾水溶解后 ， 配制成 50 mL， 吸取兩份 5 mL分別置于兩只容量為 100 mL具磨砂口的三角燒瓶 。 [試劑 ] 堿性銅鹽試劑： Na2HPO4 (3)如果檢測(cè)的樣品是淀粉，則可用麥芽糖作參比物。 [試劑 ] 3， 5一二硝基水楊酸溶液：稱(chēng)取 666 mg經(jīng) 2次重結(jié)晶的 3， 5一二硝基水楊酸 ， 溶解于 200 mL濃度為 1 mol／ L的氫氧化鉀溶液中 。 可見(jiàn)檢樣的分子量 ,是它每毫克重量中所含可測(cè)端基的毫摩爾數(shù)的倒數(shù) ， 在端基法測(cè)定分子量時(shí) ， 分子量計(jì)算的通式為 : 檢樣重量 mg／可測(cè)端基 (mmol)=檢樣的分子量 (Mn) 用端基法測(cè)分子量要求檢樣的化學(xué)結(jié)構(gòu)須具備如下兩個(gè)條件： (1)每一個(gè)分子鏈端須具有可以用化學(xué)方法作分析的基團(tuán) ，以便采用一定的定量分析方法 ， 對(duì)該端基作定量分析 。劃出的直線(xiàn)與基線(xiàn)之間的距離即為該濃度溶液的 π 值。 按操作要求逐步旋緊中心螺絲 (約 8小時(shí) )， 裝上針閥及校正杯進(jìn)行儀器校正 (約12小時(shí) )， 取下針形閥及校正杯 ， 裝上進(jìn)樣管 ， 用溶劑充分沖洗后 ， 開(kāi)動(dòng)記錄儀 ， 劃出基線(xiàn) (約 12小時(shí) )。在恒溫條件下使兩池達(dá)成平衡，壓力之差由換能器輸出信號(hào)放大后記錄，求得 π 值 . 第 4章 多糖的干燥和純度鑒定 膜滲透壓計(jì)示意圖 第 4章 多糖的干燥和純度鑒定 [操作 ] 以右旋糖酐分子量的測(cè)定為例 。 滲透壓與溶液中的溶質(zhì)分子數(shù)有關(guān) ， 可以用范特荷甫公式表示 ， 即 πV=nRT (11) 式中 π —— 滲透壓； V—— 溶液體積； n—— 溶液摩爾數(shù)； R—— 氣體常數(shù)； T—— 絕對(duì)溫度 。 (3)把不同分子量大小的組分相互分開(kāi) 。 因而測(cè)定分子量成為研究和制備多糖的一項(xiàng)經(jīng)常性工作 。 一般說(shuō)來(lái) ， 分子量增大 ， 粘度增高 。 多糖的分子量測(cè)定是研究多糖性質(zhì)的一項(xiàng)較為重要的
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