蛋白質(zhì)分子量測定方法研究進(jìn)展-在線瀏覽
2024-09-26 00:58本頁面
【正文】 定義：又叫體積排阻層析、分子篩層析，當(dāng)生物大分子通過裝有凝膠顆粒的層析柱時，根據(jù)它們分子大小不同而進(jìn)行的分離技術(shù)。在實際操作過程中，選取標(biāo)準(zhǔn)品與樣品同時通過凝膠柱，通過已知標(biāo)準(zhǔn)品的流出體積和分子量可以計算出曲線中的 K K2值，再根據(jù)已知的曲線方程和樣品流出體積計算樣品的分子量。 ? 缺點： 應(yīng)用具有一定的局限性，在 pH6— 8的范圍內(nèi)，線性關(guān)系比較好，但在極端 pH時，一般蛋白質(zhì)有可能因變性而偏離。 質(zhì)譜法 1906年， Thomson發(fā)明了質(zhì)譜技術(shù)，最初只是用于無機(jī)化學(xué)中的同位素分析，直至 20世紀(jì) 40年代末才發(fā)展成為有機(jī)質(zhì)譜。 可準(zhǔn)確測定分子量 （ ESIMS） 原理： 電噴霧離子化質(zhì)譜技術(shù)（ ESIMS）是在毛細(xì)管的出口處施加一高電壓，所產(chǎn)生的高電場使從毛細(xì)管流出的 液體霧化成細(xì)小的帶電液滴 ，隨著溶劑蒸發(fā)，液滴表面的電荷密度逐漸增大，最后 液滴崩解為大量帶一個或多個電荷的離子，致使分析物以單電荷或多電荷離子的形式進(jìn)入氣相的質(zhì)譜技術(shù) 。 （ ESIMS） ? 電噴霧是一種離子化方法，可以用作質(zhì)譜儀的離子源 （ ESIMS） 多電荷使得樣品譜圖復(fù)雜 荷質(zhì)比： （ ESIMS） 優(yōu)點： （ 1）對樣品的消耗少，不會造成樣品的大量浪費； （ 2）對樣品分子質(zhì)量測試靈敏度、分辨力和準(zhǔn)確度都相當(dāng)高； （ 3）能夠方便地與多種分離技術(shù)聯(lián)用，如毛細(xì)管電泳、高效液相色譜等，是解決非揮發(fā)性、熱不穩(wěn)定性、極性強(qiáng)的復(fù)雜組分化合物的定性定量的高靈敏度檢測方法。 （ MALDIMS） 原理： 基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜技術(shù)（ MALDIMS）是將待測物懸浮或溶解在
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