【正文】 采用MRM模式，按三離子原則對(duì)分析物進(jìn)行定性，推測(cè)斷裂方式如圖33，選用離子335291，340296；209166，212168；249134 ，252134；236134，240134定量。第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 3 表 32 硝基呋喃代謝物的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞氣能量和去簇電壓名稱 定性離子對(duì) /（m/z） 定量離子對(duì) /（m/z ） 碰撞氣能量 /eV 去簇電壓/VSEM AHD181732606060AOZ AMOZ SCA13C15N2 AHD13C3 AOZD4 AMOZD5 圖33 第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 4 圖34 圖35 第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 5 圖36 檢測(cè)限、測(cè)定低限、回收率和精密度 回收率統(tǒng)計(jì)硝基呋喃類代謝物的回收率如下：第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 6 表 33 呋喃妥因回收率方法名稱動(dòng)物源食品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定化合物名稱 AHD回收率％添加水平(μg/㎏) 1 2 3 4 5 6平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差變異系數(shù)％第一組 第二組 第三組 第一組 第二組 第三組 第一組 第二組 第三組 第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 7 表 34 呋喃它酮回收率方法名稱動(dòng)物源食品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定化合物名稱AMOZ回收率％添加水平(μg/㎏) 1 2 3 4 5 6平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差變異系數(shù)％第一組 第二組 第三組 第一組 第二組 第三組 第一組 第二組 第三組 第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 8 表 35 呋喃唑酮回收率方法名稱動(dòng)物源食品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定化合物名稱 AOZ回收率％添加水平(μg/㎏) 1 2 3 4 5 6平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差變異系數(shù)％第一組 第二組 第三組 第一組 第二組 第三組 第一組 第二組 第三組 第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 9 表 36 呋喃西林回收率方法名稱動(dòng)物源食品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定化合物名稱 SEM回收率％添加水平(μg/㎏) 1 2 3 4 5 6平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差變異系數(shù)％第一組 第二組 第三組 第一組 第二組 第三組 第一組 第二組 第三組 重復(fù)性統(tǒng)計(jì)硝基呋喃類代謝物的重復(fù)性如下：第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 10 表 37 呋喃西林重復(fù)性方法名稱動(dòng)物源食品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定化合物名稱SEM測(cè)定值(μg/㎏)添加水平(μg/㎏)1 2 3 4 5 6平均值標(biāo)準(zhǔn) 偏差變異 系數(shù)%總體 標(biāo)準(zhǔn)偏差總體變異系數(shù)%第一組 第二組 第三組 712.04第一組 第二組 第三組 42第一組 第二組 第三組 78第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 11 表 38 呋喃妥因重復(fù)性方法名稱動(dòng)物源食品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定化合物名稱AHD測(cè)定值(μg/㎏)添加水平(μg/㎏)1 2 3 4 5 6平均值標(biāo)準(zhǔn) 偏差變異 系數(shù)%總體 標(biāo)準(zhǔn)偏差總體變異系數(shù)%第一組 第二組 第三組 44第一組 第二組 第三組 49第一組 第二組 第三組 85第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 12 表 39 呋喃它酮重復(fù)性方法名稱動(dòng)物源食品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定化合物名稱AMOZ測(cè)定值(μg/㎏)添加水平(μg/㎏)1 2 3 4 5 6平均值標(biāo)準(zhǔn) 偏差變異 系數(shù)%總體 標(biāo)準(zhǔn)偏差總體變異系數(shù)%第一組 第二組 第三組 69第一組 第二組 第三組 64第一組 第二組 第三組 87第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 13 表 310 呋喃唑酮重復(fù)性方法名稱動(dòng)物源食品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定化合物名稱AOZ測(cè)定值(μg/㎏)添加水平(μg/㎏)1 2 3 4 5 6平均值標(biāo)準(zhǔn) 偏差變異 系數(shù)%總體 標(biāo)準(zhǔn)偏差總體變異系數(shù)%第一組 第二組 第三組 47第一組 第二組 第三組 35第一組 第二組 第三組 58第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 14 本方法 AMOZ、SEM、AHD 和 AOZ 的定量檢測(cè)限 (LOQ)都為：；AMOZ、SEM、AHD 和 AOZ 的測(cè)定低限(LOD)都為：。這種方法有時(shí)出現(xiàn)乙酸乙酯和水相分層不徹底的情況，易產(chǎn)生干擾，從而影響回收率。同時(shí)，這些代謝物無(wú)特異性裂解行為( 主要是去氨、水或二氧化碳)，因此，它們的質(zhì)譜檢測(cè)靈敏度較低。第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 1 圖31 硝基呋喃代謝物標(biāo)準(zhǔn)品總離子流圖(AMOZ:。對(duì)于常規(guī)檢測(cè)樣品，也可使用外標(biāo)單點(diǎn)法定量。樣品溶液中目標(biāo)化合物響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定線性范圍內(nèi)。 儀器參數(shù)與設(shè)定（1）液相色譜條件a) 色譜柱：Intersil ODS3,5μm,150mm()或相當(dāng)者；第二章 實(shí)驗(yàn)方法 5 b) 柱溫： 20℃；c) 流動(dòng)相：A：乙腈；B：%甲酸溶液d) 流動(dòng)相及洗脫條件如表所示：表 26 流動(dòng)相及梯度洗脫條件 時(shí)間（min） 流動(dòng)相A(乙腈) 流動(dòng)相B（%甲酸） 10% 90% 95% 5%95%10%10%5%90%90%e) 流速：； f) 進(jìn)樣量：20181。勻漿液在37℃水浴中振蕩16h（過(guò)夜），頻率為 60Hz。 試樣，置于 50mL 離心管中，用甲醇－水溶液 15mL2 洗滌，每次完畢后 4000r/min 離心 3min，棄上清；然后再用乙醇 20mL2 洗滌，每次完畢后 4000r/min 離心 3min，棄上清；最后用乙酸乙酯 15mL2 洗滌，每次完畢后 4000r/min 離心 3min，棄上清。L 于 10mL容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，混勻內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（1mg/mL）分別精確稱取 ，SCA13C15N2，AOZD 4，AHD 13C3 至 50mL 容量瓶中，用甲醇在超聲波水浴中溶解，然后甲醇定容到刻度，混合均勻混合內(nèi)標(biāo)中間液（10μg/mL）移取 AMOZD5，SCA 13C15N2，AOZD4，AHD 13C3 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各 500181。分液漏斗 250mLEN SPE 柱 LiChroluT，200mg玻璃離心管 15mL第二章 實(shí)驗(yàn)方法 1 試劑與溶液 主要試劑實(shí)驗(yàn)所用到的主要試劑如下：表 22 主要試劑的純度及其生產(chǎn)廠家試劑名稱 純度 生產(chǎn)廠家乙腈 HPLC Grade B＆J Brand 公司甲醇 HPLC Grade B＆J Brand 公司甲酸 分析純 天津光復(fù)精細(xì)化工研究所乙醇 分析純 濟(jì)南三恩化工有限公司乙酸乙酯 HPLC Grade B＆J Brand 公司正己烷 HPLC Grade B＆J Brand 公司四氯化碳 優(yōu)級(jí)純 天津科密歐化學(xué)試劑公司二甲亞砜 GC Grade SigmaAldich氯化鈉 分析純 齊魯石化公司研究院試劑 廠氫氧化鈉 分析純 天津化學(xué)試劑三廠2硝基苯甲醛 HPLC Grade Fluka 公司鹽酸 分析純 淄博化學(xué)試劑廠無(wú)水硫酸鈉 分析純 上海光華科技有限公司水 MΩ 山東檢疫技術(shù)中心 主要溶液的配制實(shí)驗(yàn)所用到的主要溶液的配制如下：第二章 實(shí)驗(yàn)方法 2 表 23 主要溶液及其配制方法溶液名稱及濃度 配制方法鹽酸溶液(1mol/L) 移取 45mL 鹽酸于 500mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度鹽酸溶液（） 移取 125mL，1mol/L 鹽酸溶液于 1000mL容量瓶中，加水稀釋至刻度2硝基苯甲醛溶液（） 稱取 100177。第一章 引 言 16 第二章 實(shí)驗(yàn)方法 0 第 二 章 實(shí) 驗(yàn) 方 法 原理組織樣品經(jīng)均質(zhì)后經(jīng) HCl 水解，采用 2硝基苯甲醛進(jìn)行衍生化。國(guó)內(nèi)對(duì)硝基呋喃類藥物及其代謝物的檢測(cè)起步較晚，同國(guó)外還有一段差距，起先多數(shù)是檢測(cè)硝基呋喃類原藥化合物，隨著發(fā)達(dá)國(guó)家要求對(duì)從我國(guó)進(jìn)口的動(dòng)物源性食品中硝基呋喃類藥物及其代謝物進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)各研究機(jī)構(gòu)開始致力于硝基呋喃類藥物代謝物的檢測(cè)方法的研究，其檢測(cè)限也能滿足歐盟的最低檢測(cè)限量的要求。附加證明的主要內(nèi)容是：該產(chǎn)品出口前經(jīng)過(guò)獸藥殘留特別是氯霉素和硝基呋喃代謝物的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果要符合以下要求:氯霉素；呋喃唑酮(AOZ)；呋喃它酮(AMOZ)；呋喃妥因(AH)；呋喃西林 (SC)。我國(guó)加入WTO以后，加大了同歐盟、美國(guó)、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家的貿(mào)易往來(lái)，促進(jìn)了我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，但同時(shí)發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)我國(guó)推行的“綠色壁壘”“技術(shù)壁壘”問(wèn)題也嚴(yán)重沖擊著我國(guó)對(duì)外出口貿(mào)易。ELISA方法具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、方法種類多、高特異性等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)是容易出現(xiàn)假陽(yáng)性問(wèn)題。目前已有呋喃唑酮、呋喃它酮代謝物商品化的試劑盒開發(fā)出來(lái)，而我國(guó)只能靠引進(jìn)國(guó)外的試劑盒，現(xiàn)在各商檢部門所使用的和各生化試劑公司出售的都是德國(guó)rBiopharm公司生產(chǎn)的試劑盒，其價(jià)格昂貴。隨后， [30]又建立了蝦組織中呋喃唑酮組織結(jié)合代謝物3氨基2惡唑烷酮(AOZ)的酶聯(lián)免疫分析方法(ELISA)。對(duì)檢測(cè)量大、條件較好的實(shí)驗(yàn)室，可用全自動(dòng)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，上述操作中的加樣、孵育、洗板、發(fā)色、終止、測(cè)量、計(jì)算等步驟可全部由全自動(dòng)酶標(biāo)儀來(lái)完成。測(cè)定了不同批次(n=5)測(cè)試時(shí)添加實(shí)驗(yàn)的變異系數(shù)。其分析方法：①方法檢測(cè)限和定量檢測(cè)限。各種硝基呋喃類物質(zhì)代謝物中以AOZ較為典型，以此為例。%，板間差異為 %，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，添加回收率試驗(yàn)測(cè)得蝦肉樣本平均回收率為(177。分光光度第一章 引 言 12 法可以判定動(dòng)物性產(chǎn)品中是否存在硝基呋喃類藥物，且該法不需昂貴的儀器與試劑，也沒(méi)有復(fù)雜的樣品前處理，操作簡(jiǎn)單，對(duì)于硬件設(shè)備不夠完善的質(zhì)檢部門和生產(chǎn)企業(yè)有較好的推廣及應(yīng)用價(jià)值，但測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度不高，最低檢測(cè)限較高，靈敏度低，不能作為確證性方法。 分光光度法分光光度法主要是用來(lái)測(cè)定動(dòng)物飼料中呋喃唑酮等硝基呋喃類藥物添加劑。~10ng/g范圍內(nèi)，AMOZ回收%~%，%~%，AH回收率為%