牛乳中抗生素殘留的檢測本科生畢業(yè)論文設(shè)計-wenkub.com
2025-06-19 18:30 本頁面
【正文】 在試驗(yàn)過程中，還得到了雒江菡、張筠老師的熱心幫助，在此一并致以深深的謝意。25(12):54 57.[13] of the improved Dutch tube diffusion test for detection of antimicrobial residues in Kenyan milk [J].The Journal of Food Technology in Africa,2001,(6):57.[14] （食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物部分,GIM789—94）[S].北京,中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1997.[15] 馬兆瑞,祝戰(zhàn)斌,卡爾這些微生物檢測法方便、經(jīng)濟(jì)，不同程度的應(yīng)用于原料乳及乳制品中抗生素檢測，但由于乳本身因素和外部因素，常出現(xiàn)假陽性檢測結(jié)果，降低了檢測的準(zhǔn)確性。綜上所述，快速檢測方法檢測乳及乳制品中殘留抗生素最主要的特點(diǎn)是攜帶方便，操作簡單，省時省力，結(jié)果可靠，靈敏度高。而TTC法和紙片法需要專門的實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)人員，檢測費(fèi)用較高，現(xiàn)場可操作性較差等，且結(jié)果需要幾十小時才能完成。試劑盒法在抗生素檢測的廣普性上明顯優(yōu)于國標(biāo)方法，靈敏度高。 方法比較 紙片法需培養(yǎng)4 h以上才可見清晰明顯的抑菌圈，為了得到更為密集的菌落，~8 h。對照奶樣115中青霉素抑制了微生物生長所以有大約15mm的抑菌圈存在；對照奶樣117無抗生素存在，沒有抑菌圈生成，說明對照實(shí)驗(yàn)成功。＋陽性對照1415177。 判定結(jié)果測得結(jié)果見表33表33 紙片法測得結(jié)果品種編號抑菌圈（mm） 判斷純牛奶10－215177。 判斷方法 把含有青霉素的對照紙片也安放在瓊脂表面，各作2個濾片，標(biāo)記不同的濾片位置。 判定結(jié)果測得結(jié)果見表32表32試劑盒法測得結(jié)果品種編號顯色狀態(tài)判斷純牛奶1淡黃色－2紫色＋3黃色－4紫色＋5紫色＋6紫色＋花色奶7淡黃色－8淡紫色＋/－9紫色＋10淺紫色＋11紫色＋12黃色－13紫色＋陽性對照14紫色＋15深紫色＋陰性對照16黃色－17淡黃色－注：+為陽性，為陰性,+/為可疑。陰性對照試驗(yàn)117結(jié)果桃紅色，為陰性，未檢出抗生素殘留。 表31 TTC法測結(jié)果品種編號顯色狀態(tài)判斷純牛奶1桃紅色－2桃紅色－3微粉色＋/－4未顯色＋5桃紅色－6桃紅色－花色奶7微粉色＋/－8微粉色＋/－9桃紅色－10桃紅色－11桃紅色－12微粉色＋/－13桃紅色－陽性對照14未顯色＋15未顯色＋陰性對照16桃紅色－17桃紅色－注：+為陽性，為陰性,+/為可疑。2)℃培養(yǎng)，~8 h，抑菌圈明顯清晰，測定抑菌圈直徑。 U/mL青霉素的對照紙片也安放在瓊脂表面。2)℃， U/mL的對照濾片得到很好確定的抑菌圈，一般為4 h。把6 mL接種培養(yǎng)基傾入各個平皿，并于超平的平面上凝固，4℃貯存，5 d內(nèi)使用。取出培養(yǎng)液以5 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min，傾去上清夜，將細(xì)胞懸浮于滅菌生理鹽水中，再次離心。（5）放映時間與判讀結(jié)果：反應(yīng)溫度：64℃177。（2）添加營養(yǎng)藥片：用鑷子夾取營養(yǎng)藥片，每個反應(yīng)管各放入一片。1℃水浴2h加TTC指示劑，36℃177?？股仃栃哉撸谟谒″佒信囵B(yǎng)30min第二次觀察，記錄結(jié)果。（2）冷卻至37℃以下，加制備的菌液1ml，36177。1℃培養(yǎng)15h。試劑盒法：試劑盒中的反應(yīng)管和營養(yǎng)藥片，保存于0~15℃，避光、干燥陰涼處，防止凝結(jié)成塊或凍結(jié)。 主要儀器和設(shè)備表23 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備儀器與設(shè)備生產(chǎn)廠家Hws24型電熱恒溫水浴鍋 上海一恒科技有限公司DHG9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱上海一恒科技有限公司LRH50生化培養(yǎng)箱上海一恒科技有限公司京制00000249號電子天平北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司科拓抗生素檢測試劑盒北京科拓恒通生物技術(shù)開發(fā)郵箱公司容聲冰箱廣東科龍電器股份有限公司JJ200型精密電子天平美國雙杰兄弟有限公司常熟雙杰測試儀器廠高壓滅菌鍋上海一恒科技有限公司檢測試劑盒由反應(yīng)管、營養(yǎng)藥片、取樣注射器、取樣吸頭、鑷子和使用說明書等組成。c 儀器或其他用具：試管，三角瓶，燒杯，量筒，培養(yǎng)基分裝器，天平，牛角匙，高壓滅菌鍋，PH試紙（～），棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。 1000mlpH NaCL表21 原材料表品種編號規(guī)格（ml）來源純牛奶1220市售2220市售3220市售4220市售5220市售6220市售花色奶7280市售8250市售9220市售10280市售11240市售12250市售13220市售 對照試驗(yàn)樣品的采樣，見表22。 保障人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全。 經(jīng)常飲用抗生素超標(biāo)的牛奶還會破壞人體道菌群平衡。美國Charm Science公司Charm MRL檢測法與BetaSTAR檢測法形式十分相似，在8min內(nèi)可以檢測到青霉素和頭孢菌素殘留。在需要檢測其他種類的抗生素時，可以選用對應(yīng)的試劑盒進(jìn)行檢測。DelvotestSP的用法基本與DelvotestP相同，只是培養(yǎng)時間縮短為2h，~。DelvotestP成型于20世紀(jì)70年代，主要用于檢測內(nèi)酰胺類抗生素，裝在小型安碚瓶或者微孔板微孔中的瓊脂里，含有用微膠囊包裹的標(biāo)志微生物嗜熱硬脂酸芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)的芽孢和pH指示劑(溴甲酚紫)，同時包裝內(nèi)附有一瓶營養(yǎng)藥片，檢驗(yàn)時將營養(yǎng)藥片與乳樣同時放在培養(yǎng)基上，在64e溫度下培養(yǎng)3h，培養(yǎng)基顏色由紫變黃表明抗生素殘留陰性，顏色不變表示陽性。樣品平均回收率為 % ～% ，變異系數(shù)在 % ～% 之間，方法檢測限為 ～；賈薇等建立了一種用 C18 小柱進(jìn)行固相萃取，液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測牛奶中 4 種四環(huán)素類的方法，每毫升牛奶中含四環(huán)素、土霉素及美他環(huán)素為 ，；而 Van Bruiynsvoort則成功運(yùn)用色譜聯(lián)用技術(shù)測定了牛奶中的鏈霉素和二雙氫鏈霉素。在許多常規(guī)分析中，HPLC/PDA 是一種簡便的定性分析方法。UVD 是應(yīng)用最早和最廣泛的 HPLC 檢測器。最常用的方法為高效液相色譜法和聯(lián)用技術(shù)。理化檢測方法的原理是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來測定其含量[12]。 Brilliant Black Reduction Test(亮黑裉色試驗(yàn))是另一種重要的檢測方法，包括德國的 AiMAanlytikin Mitch Productionund Vertiebs Aim 和荷蘭的Gist Brocades等。其與先前的 DelvotestSP相似，但用時更短，只需培養(yǎng) 2h，對青霉素的檢測靈敏度提高到 。相反，如果沒有抗生素存在，則加入菌液即進(jìn)行增殖，TTC 被還原而顯紅色。枯草桿菌紙片
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