【正文】
再如,甲苯磺酰賴氨酰氯甲酮( TLCK)為胰蛋白酶的底物類似物,在與胰蛋白酶活性中心結(jié)合以后,共價修飾活性中心 Cys殘基上的巰基,導(dǎo)致其活性的喪失 ? 3. 自殺型抑制劑 ? 自殺型抑制劑是受酶本身來激活的不可逆抑制劑,在與酶結(jié)合以后,受到酶的催化發(fā)生幾步反應(yīng),但并不形成產(chǎn)物,而是變成高度反應(yīng)性的化合物后,轉(zhuǎn)而修飾酶的必需基團(tuán)導(dǎo)致酶活性的喪失。常見的例子有:有機(jī)磷化合物、碘代乙酸和環(huán)氧化物等,前者包括二異丙基氟磷酸( DIPF)和甲基氟磷酸異丙酯(沙林)。一旦它們與 ES結(jié)合,將導(dǎo)致與活性中心結(jié)合的底物不再能夠轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物。 ? 2. 非競爭性抑制劑 ? ( 1)性質(zhì) . 只能與 ES結(jié)合,但不能與游離的酶結(jié)合。因此,不可逆性抑制劑通常表現(xiàn)出對時間有依賴性,即抑制的效果隨著與酶接觸時間的延長而增強(qiáng)。結(jié)果是抑制作用的效果來得快,但并不能使酶永久性失活。 ( 2) 當(dāng) pH改變不很劇烈時,酶雖未變性,但活力受到影響。 米氏酶的雙倒數(shù)作圖 EadieHofstee作圖 HanesWolff 作圖 The turnover number A measure of catalytic activity ? kcat, the turnover number, is the number of substrate molecules converted to product per enzyme molecule per unit of time, when E is saturated with substrate. ? If the MM model fits, k2 = kcat = Vmax/Et ? Values of kcat range from less than 1/sec to many millions per sec The catalytic efficiency Name for kcat/Km ? An estimate of how perfect the enzyme is ? kcat/Km is an apparent secondorder rate constant ? It measures how the enzyme performs when S is low ? The upper limit for kcat/Km is the diffusion limit the rate at which E and S diffuse together 幾種酶的動力學(xué)參數(shù) 酶濃度對反應(yīng)速度的影響 溫度對酶反應(yīng)速率的影響 溫度對酶反應(yīng)速率的影響表現(xiàn)在兩個方面: 一方面是當(dāng)溫度升高時,與一般化學(xué)反應(yīng)一樣,反應(yīng)速 率加快。 ③ Km與 Ks: Km=k2+k3/k1, Ks=k2/k1 ④ 若已知某酶的 Km值,就可以計算在某一底物濃度時,其反應(yīng)速率相當(dāng)于 Vmax的百分率。 ? 4. 解讀 kcat/Km ? kcat/Km通常被用來衡量酶的催化效率 ,可以表示一個酶的催化效率或者完美程度。隨著底物濃度的增加, V只能接近此值。 ? Km可以幫助判斷體內(nèi)一個可逆反應(yīng)進(jìn)行的方向。 high Km means weak substrate binding. ? Km equals to the substrate concentration at which v=1/2vmax 121k kkK m ?? ?ESSE ?k1 k1 ? ?11][ ][ kkES SEK d ???? ? ][][ 11 ESkSEk ??Km的物理意義 Understanding Vmax The theoretical maximal velocity ? Vmax is a constant ? Vmax is the theoretical maximal rate of the reaction but it is NEVER achieved in reality ? To reach Vmax would require that ALL enzyme molecules are tightly bound with substrate ? Vmax is asymptotically a