核醫(yī)學放射性標記化合物-wenkub.com
2025-12-26 10:53 本頁面
【正文】 2）與標記物比活度有關(guān)； 3）與標記物的純度有關(guān)：開始時緩慢，隨后加速，輻射自分解產(chǎn)物可加速隨后的破壞。 特異結(jié)合試驗 （ 標記抗原 ， 非標記抗原與抗體親和力 ） 。 標記率 = S1+S2+S3 100% S1 若投入待標記物 W， 且 100%成為標記物 比活度 = W AY （ A為總放射性） （ 3） 自身取代法 （ 將 Bq/mg換算為 Bq/mol） ： 分三步進行 ① 以標記品 、 標準品與抗體競爭結(jié)合做一條 B/F對標準品依次遞增的曲線 。 標記率計算： P90 （ 三 ） 分離純化 （ 為什么 ） ？？？ 純化方法 凝膠過濾法 —— 分離標記蛋白與無機碘 離子交換法 —— 分離短肽標記物 透 析 法 —— 分離標記蛋白與小分子 親和層析法 —— 特異性好 ,保持生物活性 ConA吸附法 —— 糖蛋白 標記化合物主要質(zhì)量指標（ 5個） 1，放射性核素純度， 2，放化純度、 3，放射性比活度、 4，生物活性 5，免疫活性及標記位置 放射性核素純度及其檢查 所需放射性核素的活度 放射性核素純度 （ %） = % 樣品的總放射性活度 43 （ 三 ） 放化純度及鑒定： 特定化學形態(tài)的放射性活度 放化純度 = % 樣品總放射性活度 放化純度的測定原則 ： 高效的化學分離與靈敏的放射性測量結(jié)合 。 ⑹ 分段測量 ， 段的大小要一致； ⑺ 起跑點所在段也要測量 。 要求：能把 混合物很好的分開 ， 用時還要組成簡單 ， 粘度小 ， 展開 快 ， 展開后易揮發(fā) ， 價格低 ， 易購買 。 標記率圖見 P91 Rf = 待測組分到原點的距離 I 流動相前沿到原點距離 L 39 薄層層析 原理 硅膠或氧化鋁 （ 固定相 ） ：根據(jù)混合物各組分的吸附力和分配系數(shù)不同而分開 。 常用測定方法： 紙層析法： 混合樣品中各組分的性質(zhì)不同 ，在固定相上的吸附能力和在流動相中的溶解度不同 ， 因此它們各自的移動速度不同 ， 可在特殊紙片上分離開 。 操作程序 ① DNA常規(guī)提取純化； ② DNA加熱 （ 70℃ ） ， 分為單股 DNA； ③ 用 TLCL3將 Na125I氧化產(chǎn)生 125I2 ④ 調(diào) ， 125I將取代嘧啶環(huán)上第 5位的碳原子 ，形成共價結(jié)合的 DNA單鏈 。 將 Iodogen的二氯甲烷溶液放入反應管中或涂在小破片上 ， 微微加熱 ， 使溶劑揮發(fā)后 ， 反應管下部或小玻片上就形成 Iodogen薄膜 ， 蛋白質(zhì)碘標記反應就在反應管中進行 ， 或?qū)⑿〔ㄆ?“ 懸掛 ” 入加有 Na125I的細胞培養(yǎng)液中 ， 可使細胞表面的蛋白碘化 。 缺點 ： 標記率低， 2040% 32 聯(lián)接標記法 ： 先用 Na125I和氧化劑 （ CHT）碘化 ?；瘎?3(對 羥基苯 )丙酸 N琥珀亞胺酯 （ BoltonHunter試劑或 BH） 再與蛋白質(zhì)分子中的游離氨基酸相結(jié)合引入蛋白質(zhì)中 。 30 CHT標記實驗應注意的問題 ①氯胺 T臨時配制； ②氯胺 T用量要適宜，過大免疫活性和生物活性低，反之，標記率低； ③加入氯胺 T后盡快混勻；
教學課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1