重組人干擾素生產(chǎn)工藝(精品ppt)-資料下載頁
2024-11-19 22:01本頁面
【正文】 。 離心：連續(xù)流離心機(jī)，16000 r/min 保存：收集(shōuj237。)沉淀，粗干擾素，4℃保存。,第三十五頁，共四十五頁。,、干擾素純化工藝(gōngy236。)過程,溶解粗干擾素 沉淀與疏水層析 陰離子交換層析與濃縮(n243。nɡ suō) 陽離子交換層析與濃縮 凝膠過濾層析 無菌過濾分裝,第三十六頁，共四十五頁。,(1) 溶解(r243。ngjiě)粗干擾素,配制(p232。izh236。)純化緩沖液： 超純水，磷酸緩沖液，0.45 μm濾器和10 ku超濾系統(tǒng)，百級層流下收集。冷卻至2℃～10℃。 檢查: 緩沖液的pH值和電導(dǎo)值。 溶解： 2℃～10℃，勻漿，完全溶解。,第三十七頁，共四十五頁。,(2) 沉淀(ch233。ndi224。n)與疏水層析,等電點(diǎn)沉淀〔1〕：磷酸調(diào)節(jié)至，沉淀雜蛋白，離心收集上清液。 疏水層析：干擾素吸附(xīf249。)在疏水層析柱中 除非疏水性蛋白 洗脫與收集：磷酸緩沖液〔〕。,第三十八頁，共四十五頁。,等電點(diǎn)沉淀〔2〕：磷酸調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)電導(dǎo)值40 ms/cm，2℃～10℃，靜置過夜(gu242?！▂232。) 超濾：1000 ku超濾膜過濾，除去大蛋白。 透析除鹽：調(diào)整溶液，電導(dǎo)值，10 ku超濾膜，0.005 M緩沖液。,第三十九頁，共四十五頁。,(3)陰離子交換(jiāohu224。n)層析與濃縮,磷酸緩沖液〔〕平衡樹脂(sh249。zhī)。 鹽濃度線性梯度5～50 ms/cm進(jìn)行洗脫， 配合SDSPAGE收集干擾素峰。 濃縮：調(diào)整溶液和電導(dǎo)，10 ku超濾膜，醋酸緩沖液〔〕中透析。,第四十頁，共四十五頁。,〔4)陽離子交換層析(c233。nɡ xī)與濃縮,用醋酸緩沖液〔〕平衡樹脂。 上樣，相同緩沖液沖洗(chōngxǐ)。 鹽濃度線性梯度5～50 ms/cm進(jìn)行洗脫 配合SDSPAGE收集干擾素峰。 濃縮：10 ku超濾膜進(jìn)行。,第四十一頁，共四十五頁。,(5)凝膠過濾(gu242。lǜ)層析,洗滌液：0.15 M NaCl的磷酸緩沖液〔〕清洗系統(tǒng)和樹脂 上樣，相同緩沖液進(jìn)行洗脫(xǐ tuō)。 合并干擾素局部,第四十二頁，共四十五頁。,(6)無菌過濾(gu242。lǜ)分裝,0.22 μm濾膜過濾干擾素溶液 分裝 －20℃以下(yǐxi224。)的冰箱中保存。,第四十三頁，共四十五頁。,(7)檢測(jiǎn c232。)工程,干擾素鑒別試驗(yàn) 干擾素效價測定 蛋白質(zhì)含量，純度測定，分子量 宿主剩余蛋白(d224。nb225。i)、剩余DNA 干擾素結(jié)構(gòu)鑒定：紫外光譜，肽譜，N端序列 其他：熱原，內(nèi)毒素，殘留抗生素,第四十四頁，共四十五頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),第十五章 重組人干擾素生產(chǎn)工藝(gōngy236。)。發(fā)現(xiàn)：干擾素是1957年英國科學(xué)家Isaccs等發(fā)現(xiàn)的。此外還能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞外表表達(dá)Fc受體，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬免疫復(fù)合物、抗體包被的病原體和腫瘤細(xì)胞。工藝(gōngy236。)特點(diǎn)：發(fā)酵過程，隨后變性、復(fù)性過程。基因連接質(zhì)粒, 轉(zhuǎn)化E.coli,篩選鑒定克隆。接種：接入50L種子罐，接種量10%。接種：通入300L培養(yǎng)基的發(fā)酵罐，接種量10%。檢查: 緩沖液的pH值和電導(dǎo)值。宿主剩余蛋白、剩余DNA,第四十五頁，共四十五頁。,
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